本文關(guān)鍵詞：金黃色葡萄球菌α-toxin上調(diào)皮膚組織中IL-19的表達(dá)及其機(jī)制研究

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【摘要】：背景:尋常型銀屑病(以下簡(jiǎn)稱(chēng)銀屑病)是常見(jiàn)的慢性炎癥性皮膚病,以皮損局部炎細(xì)胞浸潤(rùn)和角質(zhì)形成細(xì)胞(Keratinocyte cell,KC)過(guò)度增殖為基本病理特征�，F(xiàn)階段我們對(duì)銀屑病發(fā)病機(jī)理的認(rèn)識(shí)尚不全面,目前比較確定的是:多種細(xì)胞因子表達(dá)水平的改變參與了銀屑病的發(fā)病機(jī)制,這些細(xì)胞因子包括IL-6、IL-8、IL-12、腫瘤壞死因子(Tumor necrosis factor,TNF)和干擾素-γ(Interferon-γ,IFN-γ),而IL-19能夠上調(diào)上述細(xì)胞因子的表達(dá)。角質(zhì)形成細(xì)胞是IL-19的主要分泌來(lái)源,IL-19的上調(diào)可以誘導(dǎo)CD8+T細(xì)胞分泌角質(zhì)形成細(xì)胞生長(zhǎng)因子(Keratinocyte growth factor,KGF)作用于角質(zhì)形成細(xì)胞使其增殖,從而加重銀屑病的病理?yè)p傷。IL-19在角質(zhì)形成細(xì)胞中的表達(dá)上調(diào)與另一重要的促炎癥細(xì)胞因子IL-1β的刺激有關(guān);另一方面,金黃色葡萄球菌感染能夠促進(jìn)中性粒細(xì)胞分泌促炎癥細(xì)胞因子IL-1β,Alpha毒素(α-toxin)在其中發(fā)揮了重要作用,即IL-1β的表達(dá)上調(diào)可能與α-toxin的表達(dá)分泌有關(guān)。越來(lái)越多的學(xué)者認(rèn)為金黃色葡萄球菌在皮膚表面的定植是誘發(fā)和加重銀屑病的重要影響因素。有研究證實(shí)50%以上的銀屑病患者的皮損部位可以檢測(cè)出金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,S.aureus),S.aureus的定植與高銀屑病皮損面積和嚴(yán)重程度評(píng)分(Psoriasis Area Severity Index,PASI)相關(guān)。S.aureus可以分泌多種病原分子和毒素,進(jìn)而影響宿主的免疫系統(tǒng)和免疫穩(wěn)態(tài)。S.aureus分泌的α-toxin還能夠作用于角質(zhì)形成細(xì)胞,與特應(yīng)性皮炎(Atopic dermatitis,AD)的嚴(yán)重程度密切相關(guān)。我們推測(cè)α-toxin可能通過(guò)促進(jìn)中性粒細(xì)胞分泌IL-1β,進(jìn)而上調(diào)IL-19在銀屑病皮損中的表達(dá),從而參與銀屑病的發(fā)生與發(fā)展。目的:本課題旨明確金黃色葡萄球菌分泌的α-toxin能否上調(diào)皮膚組織中IL-19的表達(dá),并初步探討其機(jī)制及與銀屑病的發(fā)生發(fā)展之間的關(guān)系,以進(jìn)一步明確銀屑病的發(fā)病機(jī)制。方法:1.實(shí)時(shí)熒光定量PCR(Quantitative Real-time PCR,q RT-PCR)檢測(cè)銀屑病皮損與正常皮膚組織中IL-19的m RNA水平,Western blotting分別檢測(cè)從正常皮膚組織和銀屑病皮損來(lái)源的金黃色葡萄球菌培養(yǎng)上清中α-toxin的表達(dá)。相關(guān)性分析銀屑病皮損中IL-19的表達(dá)水平與金黃色葡萄球菌分泌α-toxin水平是否相關(guān)。2.采用金黃色葡萄球菌α-toxin缺失菌株(△Hla S.aureus),野生型金黃色葡萄球菌(WT S.aureus),以及PBS感染BALB/c小鼠背部皮膚,收集感染后的皮膚組織,HE染色觀(guān)察組織炎癥程度病理變化,實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)IL-19,IL-1β的m RNA水平,ELISA檢測(cè)IL-19,IL-1β的蛋白表達(dá)水平。分離小鼠骨髓的中性粒細(xì)胞,用△Hla S.aureus和WT S.aureus刺激6h后,實(shí)時(shí)熒光定量PCR、ELISA和Western blotting檢測(cè)IL-1β的表達(dá)。不同濃度IL-1β刺激PAM 2-12角質(zhì)形成細(xì)胞后,實(shí)時(shí)熒光定量PCR和ELISA檢測(cè)IL-19的表達(dá)。結(jié)果:1.銀屑病皮損IL-19 m RNA水平顯著高于在正常皮膚組織IL-19 m RNA水平(1.708±0.1610VS 0.5679±0.0978,P0.05)。2.銀屑病皮損中金黃色葡萄球菌檢出率顯著高于正常皮膚組織(P0.05);銀屑病患者組分離的金黃色葡萄球菌產(chǎn)α-toxin的陽(yáng)性率顯著高于正常皮膚組(P0.05)。3.銀屑病皮損中IL-19的表達(dá)與金黃色葡萄球菌α-toxin的分泌呈正相關(guān)(r=0.7999,P0.0001)4.WT S.aureus組與△Hla S.aureus組相比,前者皮損的面積增加,炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)和膿腫形成增加。5.實(shí)時(shí)熒光定量PCR和ELISA檢測(cè)發(fā)現(xiàn)△Hla S.aureus組IL-19和IL-1β的m RNA和蛋白水平,相較于WT S.aureus組顯著降低(P0.01)。6.中性粒細(xì)胞in vitro刺激發(fā)現(xiàn),△Hla S.aureus組IL-1β蛋白表達(dá)水平相較于WT S.aureus組顯著降低(P0.01)。7.IL-1βin vitro刺激PAM 2-12角質(zhì)形成細(xì)胞發(fā)現(xiàn),與對(duì)照組相比,IL-19的m RNA和蛋白表達(dá)水平顯著增加(P0.01),并呈劑量依賴(lài)性。結(jié)論:金黃色葡萄球菌分泌的α-toxin能夠作用于中性粒細(xì)胞,促進(jìn)其表達(dá)分泌IL-1β;IL-1β則可作用于皮膚的角質(zhì)形成細(xì)胞,上調(diào)IL-19,參與銀屑病的發(fā)生發(fā)展。
【關(guān)鍵詞】：金黃色葡萄球菌 銀屑病 α-toxin IL-1β IL-19
【學(xué)位授予單位】：第三軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：R758.63
【目錄】：

• 縮略語(yǔ)表4-6
• 英文摘要6-9
• 中文摘要9-11
• 第一章 前言11-13
• 第二章 IL-19 在銀屑病患者皮損中的表達(dá)及其與金黃色葡萄球菌 α-toxin的相關(guān)性研究13-23
• 2.1 引言13-14
• 2.2 材料與方法14-18
• 2.3 結(jié)果18-21
• 2.4 討論21-23
• 第三章 金黃色葡萄球菌 α-toxin上調(diào)小鼠皮膚組織中IL-19 的表達(dá)及其機(jī)制研究23-36
• 3.1 引言23
• 3.2 材料與方法23-27
• 3.3 結(jié)果27-34
• 3.4 討論34-36
• 全文總結(jié)36-37
• 參考文獻(xiàn)37-41
• 文獻(xiàn)綜述 IL-19 在炎癥性疾病中的免疫調(diào)控作用41-52
• 參考文獻(xiàn)47-52
• 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的論文及參與的課題52-53
• 致謝53

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2 朱自強(qiáng);;金黃色葡萄球菌更具殺傷力的原因在于其金黃色“外殼”[J];基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床;2005年11期

3 杜洪利;張雙雙;歐旭;閆訓(xùn)友;;金黃色葡萄球菌檢測(cè)技術(shù)研究進(jìn)展[J];食品與發(fā)酵科技;2009年05期

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5 王娉;勞華均;胡s，

本文編號(hào)：664449