本文關(guān)鍵詞：須癬毛癬菌烯醇化酶基因的克隆、原核表達(dá)與純化

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【摘要】：目的克隆須癬毛癬菌烯醇化酶(Enolase)基因全長(zhǎng)c DNA,制備具有高免疫原性的須癬毛癬菌烯醇化酶重組蛋白。方法選用須癬毛癬菌肉芽腫株(774),提取總RNA,采用c DNA快速末端擴(kuò)增法(RACE)克隆Enolase基因的全長(zhǎng)序列,并對(duì)該片段進(jìn)行序列測(cè)定和分析。同時(shí)對(duì)該片段進(jìn)行了克隆、原核表達(dá)及純化。結(jié)果獲得須癬毛癬菌Enolase基因全長(zhǎng)序列1 491bp,擁有一個(gè)1 317bp的開放閱讀框,編碼438個(gè)氨基酸,5'非編碼區(qū)為106bp,3'非編碼區(qū)為68bp;同源比對(duì)與斷發(fā)毛癬菌Enolase同源性達(dá)100%,與紅色毛癬菌同源性達(dá)98%。構(gòu)建了p ET-16b-Enolase表達(dá)質(zhì)粒,重組質(zhì)粒都經(jīng)過(guò)測(cè)序鑒定正確,p ET-16b-Enolase誘導(dǎo)表達(dá)后能抑制宿主菌生長(zhǎng),但經(jīng)過(guò)條件優(yōu)化后表達(dá)質(zhì)粒能在BL21(DE3)菌中經(jīng)異丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)誘導(dǎo)大量表達(dá)和純化,Western blot證實(shí)了表達(dá)的結(jié)果。結(jié)論克隆出須癬毛癬菌Enolase基因c DNA全長(zhǎng)序列,原核表達(dá)和純化成功,為進(jìn)一步研究重組須癬毛癬菌Enolase的作用奠定了基礎(chǔ)。
【作者單位】： 大連醫(yī)科大學(xué)附屬一院皮膚科;大連醫(yī)科大學(xué);大連醫(yī)科大學(xué)附屬一院消化內(nèi)鏡科;
【關(guān)鍵詞】： 須癬毛癬菌 烯醇化酶 基因序列 原核表達(dá) 蛋白純化
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金(81071330;30640016)
【分類號(hào)】：R756
【正文快照】： 須癬毛癬菌又稱石膏樣毛癬菌,是一種親人、親動(dòng)物性真菌,是臨床上除紅色毛癬菌外最常見(jiàn)的皮膚癬菌,甚至在部分地區(qū)超過(guò)紅色毛癬菌位居第一[1-2]。須癬毛癬菌不僅能感染頭皮、光滑皮膚、指甲等淺部組織,而且還可引發(fā)膿癬、癬結(jié)節(jié)[3]、肉芽腫及足菌腫等深部感染[4-5]。隨著寵物

【相似文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 李慶祥;楊國(guó)玲;安利佳;;須癬毛癬菌表型的研究[J];中國(guó)麻風(fēng)皮膚病雜志;2007年03期

2 惠讓松;楊雪琴;萬(wàn)哲;;三種錦綸織物對(duì)紅色毛癬菌和須癬毛癬菌的生長(zhǎng)抑制效應(yīng)觀察[J];解放軍醫(yī)學(xué)雜志;2010年10期

3 陳柏S，

本文編號(hào)：619649