本文關(guān)鍵詞：2-甲氧基雌二醇對(duì)黑素瘤B16荷瘤小鼠抑瘤作用及其機(jī)制的實(shí)驗(yàn)研究

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【摘要】：目的:惡性黑素瘤是一種惡性程度較高的具有黑色素細(xì)胞分化的惡性腫瘤,具備高侵襲性及增殖能力,并可以產(chǎn)生肝素、成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子復(fù)合物等致使腫瘤內(nèi)大量新生血管形成,腫瘤細(xì)胞易發(fā)生淋巴及血行轉(zhuǎn)移且預(yù)后差。近年來其發(fā)生率呈逐年增高趨勢(shì),為目前發(fā)病率最高的惡性腫瘤之一。常規(guī)治療手段包括手術(shù)切除、放化療、靶向治療及免疫治療等綜合治療,目前整體的治療效果仍不理想,生存期的延長(zhǎng)不明顯。2-甲氧基雌二醇是一種甾體激素類化合物,具有抗血管生成及抗腫瘤作用,并且2-ME在多種荷瘤動(dòng)物模型實(shí)驗(yàn)中表現(xiàn)出顯著的抑制腫瘤生長(zhǎng)的作用,迄今為止,國(guó)內(nèi)尚無2-ME對(duì)惡性黑素瘤體內(nèi)外抑瘤效果的研究報(bào)道。本課題組前期實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明2-ME對(duì)小鼠黑素瘤B16細(xì)胞的增殖具有抑制作用,這種作用呈時(shí)間-劑量的依賴關(guān)系,且2-ME作用24h后G0/G1周期出現(xiàn)阻滯,細(xì)胞的凋亡率增高,2-ME能明顯下調(diào)原癌基因(c-myc)的表達(dá),使抑癌基因gadd45b表達(dá)升高。因此本實(shí)驗(yàn)通過建立動(dòng)物模型繼續(xù)研究2-甲氧基雌二醇對(duì)惡性黑素瘤細(xì)胞的增殖、凋亡的影響。通過相關(guān)蛋白表達(dá)的變化,進(jìn)一步探討2-ME抑制黑素瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的可能作用機(jī)制,從而為黑素瘤提供新的治療方法及相應(yīng)的理論依據(jù)。方法:將12只雌性BALB/c小鼠隨機(jī)分為2組,每組6只。將鼠黑素瘤B16細(xì)胞懸液接種于各組小鼠右側(cè)背部皮下,每只1×106個(gè),建立小鼠黑素瘤移植瘤模型。當(dāng)多數(shù)小鼠荷瘤后開始給藥,采用尾靜脈注射給藥方式:實(shí)驗(yàn)組分別給予2-ME 50mg/kg尾靜脈注射,對(duì)照組尾靜脈注射等量生理鹽水,隔日一次,每隔兩日測(cè)量一次腫瘤的長(zhǎng)、短徑,第21天時(shí)最后一次靜脈給藥,次日頸椎脫臼處死各組小鼠,處死后完整剝離腫瘤組織及肺、肝、脾組織,再次測(cè)量腫瘤組織大小,稱量各組瘤重,計(jì)算體積及質(zhì)量抑瘤率;顯微鏡觀察生理鹽水對(duì)照組及2-ME藥物處理組各主要臟器和瘤細(xì)胞大體形態(tài)學(xué)的變化情況;免疫組化法檢測(cè)各組瘤細(xì)胞c-myc,Gadd45b的蛋白表達(dá)情況;運(yùn)用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理,統(tǒng)計(jì)分析。結(jié)果:1 2-ME可抑制小鼠腫瘤生長(zhǎng)。22天時(shí)稱取瘤重顯示藥物組小鼠的瘤重相比對(duì)照組小鼠瘤重差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。其質(zhì)量抑瘤率為62.8%。小鼠腫瘤體積方面:第7日,小鼠腫瘤體積差異不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),余天數(shù)兩組對(duì)應(yīng)的腫瘤體積差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01),其體積抑制率為66.9%。腫瘤生長(zhǎng)曲線顯示藥物組小鼠腫瘤生長(zhǎng)相比對(duì)照組緩慢。2 2-ME對(duì)腫瘤組織細(xì)胞及各重要臟器組織細(xì)胞形態(tài)的影響:對(duì)照組可見數(shù)量多且排列緊密體積較大的瘤細(xì)胞,細(xì)胞核異型性明顯,部分腫瘤細(xì)胞呈巢狀排列;與對(duì)照組相比,2-ME處理組腫瘤組織的瘤細(xì)胞密度較稀,間質(zhì)較多,部分細(xì)胞顯現(xiàn)核固縮、核裂解等現(xiàn)象,腫瘤組織內(nèi)部可見大量的壞死、凋亡的細(xì)胞及部分區(qū)域可見炎性細(xì)胞的浸潤(rùn),含色素顆粒細(xì)胞較對(duì)照組明顯增多。提示藥物組腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)受到抑制,腫瘤細(xì)胞形態(tài)受到破壞。在2-ME處理組小鼠體內(nèi)均未發(fā)現(xiàn)肺、肝、脾轉(zhuǎn)移且細(xì)胞形態(tài)完整,而對(duì)照組3例小鼠的肺組織中發(fā)現(xiàn)少量轉(zhuǎn)移灶。3免疫組化檢測(cè)瘤細(xì)胞c-myc、Gadd45b蛋白表達(dá):c-myc蛋白染色陽性反應(yīng)顆粒出現(xiàn)在細(xì)胞核內(nèi),呈棕黃色顆粒。生理鹽水對(duì)照組和2-ME組的細(xì)胞核中均見c-myc蛋白陽性表達(dá),生理鹽水對(duì)照組細(xì)胞核中陽性表達(dá)細(xì)胞較2-ME組陽性表達(dá)細(xì)胞有增多趨勢(shì)。Gadd45b蛋白陽性著色主要定位于腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì),呈棕黃色細(xì)顆粒狀,局灶或彌漫性分布。生理鹽水對(duì)照組和2-ME組的細(xì)胞漿中均見gadd45b蛋白陽性表達(dá),2-ME組細(xì)胞漿中陽性表達(dá)細(xì)胞較生理鹽水對(duì)照組陽性表達(dá)細(xì)胞有增多趨勢(shì)。結(jié)論:1 2-ME對(duì)鼠B16黑素瘤移植瘤的生長(zhǎng)有顯著抑制作用。2 2-ME可以減少鼠B16黑素瘤移植瘤的臟器轉(zhuǎn)移。3 2-ME在對(duì)鼠B16黑素瘤移植瘤產(chǎn)生抑瘤作用的同時(shí)對(duì)其它重要臟器無明顯損傷,提示其藥物毒副作用小,選擇性強(qiáng)。4 2-ME抑制黑素瘤增殖并促進(jìn)其凋亡的可能機(jī)制為:2-ME一方面下調(diào)c-myc蛋白的表達(dá),另一方面上調(diào)Gadd45b蛋白的表達(dá),最終引發(fā)細(xì)胞凋亡。
【關(guān)鍵詞】：2-甲氧基雌二醇2-ME 鼠黑素瘤細(xì)胞B16 增殖和凋亡 c-myc Gadd45b
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R739.5
【目錄】：

• 中文摘要4-7
• 英文摘要7-11
• 前言11
• 材料與方法11-17
• 結(jié)果17-20
• 附圖20-28
• 附表28-29
• 討論29-36
• 結(jié)論36-37
• 參考文獻(xiàn)37-42
• 綜述 惡性黑素瘤的治療進(jìn)展42-56
• 參考文獻(xiàn)50-56
• 致謝56-57
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷57

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 李蠡,薛春雨,邢新;惡性黑色素瘤細(xì)胞凋亡特點(diǎn)的研究進(jìn)展[J];醫(yī)學(xué)研究生學(xué)報(bào);2005年09期

2 練煉;馬德亮;陶敏;;惡性黑色素瘤的分子靶向治療進(jìn)展[J];實(shí)用腫瘤雜志;2010年02期

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本文編號(hào)：598468