本文關(guān)鍵詞：CD147與GLUT1在人惡性黑素瘤細(xì)胞中相互作用的研究

  更多相關(guān)文章： CD147 GLUT1 糖酵解 惡性黑素瘤 葡萄糖攝取

【摘要】：研究目的： CD147是免疫球蛋白超家族成員中的一種跨膜糖蛋白,本實(shí)驗(yàn)室前期研究表明CD147能促進(jìn)惡性黑素瘤增殖、侵襲、轉(zhuǎn)移和血管新生,但具體機(jī)制尚不完全清楚。葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白1(glucose transporter member1GLUT1)是一種分布在細(xì)胞膜的跨膜糖蛋白,介導(dǎo)葡萄糖在細(xì)胞膜上的轉(zhuǎn)運(yùn),在細(xì)胞攝取利用葡萄糖過(guò)程中發(fā)揮重要作用。本研究擬通過(guò)對(duì)CD147與GLUT1在惡性黑素瘤細(xì)胞株A375中及人惡性黑色素瘤組織中相互作用的研究,明確其作用位點(diǎn),在細(xì)胞中對(duì)于葡萄糖攝取的影響,為進(jìn)一步明確惡性黑素瘤發(fā)生發(fā)展的分子機(jī)制提供理論依據(jù)。 研究方法： 1.用組織芯片免疫組化技術(shù)明確CD147、GLUT1在惡性黑素瘤組織中的表達(dá)及二者相關(guān)性。 2.運(yùn)用細(xì)胞免疫熒光技術(shù)觀察A375細(xì)胞中CD147與GLUT1的定位。 3.構(gòu)建GLUT1與CD147全長(zhǎng)及缺失突變體的真核表達(dá)載體。 4.運(yùn)用免疫共沉淀技術(shù)驗(yàn)證CD147與GLUT1相互結(jié)合,共轉(zhuǎn)染GLUT1質(zhì)粒及CD147的不同缺失突變體質(zhì)粒至工具細(xì)胞293FT,分析CD147與GLUT1相互結(jié)合的位點(diǎn)。 5.分別用A375及A375穩(wěn)定干擾CD147細(xì)胞行裸鼠皮下成瘤。運(yùn)用micro PET/CT成像技術(shù)檢測(cè)兩組裸鼠葡萄糖攝取的變化。然后用免疫組化方法分別檢測(cè)移植瘤中CD147與GLUT1的表達(dá)。 研究結(jié)果： 1.免疫組化檢測(cè)出GLUT1與CD147在人惡性黑素瘤中均有表達(dá)且二者正相關(guān),具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。 2.細(xì)胞免疫熒光發(fā)現(xiàn)A375細(xì)胞中CD147與GLUT1在細(xì)胞膜存在共定位現(xiàn)象。 3.成功構(gòu)建了GLUT1與CD147全長(zhǎng)及缺失突變體的真核表達(dá)載體。 4.Co-IP驗(yàn)證GLUT1與CD147相互作用的結(jié)果,并進(jìn)一步證實(shí)CD147與GLUT1相互結(jié)合的區(qū)段位于CD147胞外第二個(gè)Ig樣結(jié)構(gòu)域。5.CD147干擾的A375細(xì)胞與正常A375細(xì)胞在裸鼠皮下成瘤。micro PET/CT掃描顯示干擾CD147后裸鼠裸鼠移植瘤攝取葡萄糖明顯下(P0.05)。且免疫組化結(jié)果證實(shí),干擾CD147組的移植瘤中,CD147與GLUT1的表達(dá)明顯下降。 結(jié)論 CD147分子不僅能與GLUT1相互作用,CD147與GLUT1相互結(jié)合的區(qū)段位于CD147胞外第二個(gè)IgG樣結(jié)構(gòu)域,且CD147能正調(diào)節(jié)惡性黑素瘤細(xì)胞葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)過(guò)程,為CD147參與惡性黑素瘤的糖酵解過(guò)程提供了進(jìn)一步的理論依據(jù)。
【關(guān)鍵詞】：CD147 GLUT1 糖酵解 惡性黑素瘤 葡萄糖攝取
【學(xué)位授予單位】：中南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R739.5
【目錄】：

• 摘要5-7
• ABSTRACT7-10
• ~.略語(yǔ)表10-11
• 前言11-14
• 第一章 材料與方法14-29
• 1.1 材料14-20
• 1.1.1 主要試劑14-16
• 1.1.2 主要耗材16
• 1.1.3 主要儀器16-18
• 1.1.4 主要自制溶液配方18-20
• 1.1.5 細(xì)胞株20
• 1.2 方法20-28
• 1.2.1 免疫組化20-21
• 1.2.2 裸鼠成瘤模型的建立21
• 1.2.3 microPET/CT掃描21
• 1.2.4 分子克隆與PCR21-25
• 1.2.5 細(xì)胞培養(yǎng)25
• 1.2.6 細(xì)胞免疫熒光25-26
• 1.2.7 免疫共沉淀26-27
• 1.2.8 Western Blot27-28
• 1.3 免疫組化評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)28
• 1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析方法28-29
• 第二章 結(jié)果29-37
• 2.1 CD147與GLUT1在惡性黑素瘤組織微陣列芯片中的表達(dá)的相關(guān)性29-32
• 2.2 免疫熒光檢測(cè)CD147與GLUT1共定位32
• 2.3 CD147與GLUT-1相互作用32-34
• 2.4 荷瘤裸鼠腫瘤組織~(18)F-FDG攝取的掃描34-37
• 第三章 討論37-40
• 結(jié)論40-41
• 參考文獻(xiàn)41-43
• 綜述43-52
• 參考文獻(xiàn)49-52
• 攻讀碩士期間研究成果52-53
• 致謝53

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