本文關(guān)鍵詞：CD147與GLUT1在人惡性黑素瘤細胞中相互作用的研究

  更多相關(guān)文章： CD147 GLUT1 糖酵解 惡性黑素瘤 葡萄糖攝取

【摘要】：研究目的： CD147是免疫球蛋白超家族成員中的一種跨膜糖蛋白,本實驗室前期研究表明CD147能促進惡性黑素瘤增殖、侵襲、轉(zhuǎn)移和血管新生,但具體機制尚不完全清楚。葡萄糖轉(zhuǎn)運蛋白1(glucose transporter member1GLUT1)是一種分布在細胞膜的跨膜糖蛋白,介導葡萄糖在細胞膜上的轉(zhuǎn)運,在細胞攝取利用葡萄糖過程中發(fā)揮重要作用。本研究擬通過對CD147與GLUT1在惡性黑素瘤細胞株A375中及人惡性黑色素瘤組織中相互作用的研究,明確其作用位點,在細胞中對于葡萄糖攝取的影響,為進一步明確惡性黑素瘤發(fā)生發(fā)展的分子機制提供理論依據(jù)。 研究方法： 1.用組織芯片免疫組化技術(shù)明確CD147、GLUT1在惡性黑素瘤組織中的表達及二者相關(guān)性。 2.運用細胞免疫熒光技術(shù)觀察A375細胞中CD147與GLUT1的定位。 3.構(gòu)建GLUT1與CD147全長及缺失突變體的真核表達載體。 4.運用免疫共沉淀技術(shù)驗證CD147與GLUT1相互結(jié)合,共轉(zhuǎn)染GLUT1質(zhì)粒及CD147的不同缺失突變體質(zhì)粒至工具細胞293FT,分析CD147與GLUT1相互結(jié)合的位點。 5.分別用A375及A375穩(wěn)定干擾CD147細胞行裸鼠皮下成瘤。運用micro PET/CT成像技術(shù)檢測兩組裸鼠葡萄糖攝取的變化。然后用免疫組化方法分別檢測移植瘤中CD147與GLUT1的表達。 研究結(jié)果： 1.免疫組化檢測出GLUT1與CD147在人惡性黑素瘤中均有表達且二者正相關(guān),具有統(tǒng)計學意義(P0.05)。 2.細胞免疫熒光發(fā)現(xiàn)A375細胞中CD147與GLUT1在細胞膜存在共定位現(xiàn)象。 3.成功構(gòu)建了GLUT1與CD147全長及缺失突變體的真核表達載體。 4.Co-IP驗證GLUT1與CD147相互作用的結(jié)果,并進一步證實CD147與GLUT1相互結(jié)合的區(qū)段位于CD147胞外第二個Ig樣結(jié)構(gòu)域。5.CD147干擾的A375細胞與正常A375細胞在裸鼠皮下成瘤。micro PET/CT掃描顯示干擾CD147后裸鼠裸鼠移植瘤攝取葡萄糖明顯下(P0.05)。且免疫組化結(jié)果證實,干擾CD147組的移植瘤中,CD147與GLUT1的表達明顯下降。 結(jié)論 CD147分子不僅能與GLUT1相互作用,CD147與GLUT1相互結(jié)合的區(qū)段位于CD147胞外第二個IgG樣結(jié)構(gòu)域,且CD147能正調(diào)節(jié)惡性黑素瘤細胞葡萄糖轉(zhuǎn)運過程,為CD147參與惡性黑素瘤的糖酵解過程提供了進一步的理論依據(jù)。
【關(guān)鍵詞】：CD147 GLUT1 糖酵解 惡性黑素瘤 葡萄糖攝取
【學位授予單位】：中南大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R739.5
【目錄】：

• 摘要5-7
• ABSTRACT7-10
• ~.略語表10-11
• 前言11-14
• 第一章 材料與方法14-29
• 1.1 材料14-20
• 1.1.1 主要試劑14-16
• 1.1.2 主要耗材16
• 1.1.3 主要儀器16-18
• 1.1.4 主要自制溶液配方18-20
• 1.1.5 細胞株20
• 1.2 方法20-28
• 1.2.1 免疫組化20-21
• 1.2.2 裸鼠成瘤模型的建立21
• 1.2.3 microPET/CT掃描21
• 1.2.4 分子克隆與PCR21-25
• 1.2.5 細胞培養(yǎng)25
• 1.2.6 細胞免疫熒光25-26
• 1.2.7 免疫共沉淀26-27
• 1.2.8 Western Blot27-28
• 1.3 免疫組化評分標準28
• 1.4 統(tǒng)計學分析方法28-29
• 第二章 結(jié)果29-37
• 2.1 CD147與GLUT1在惡性黑素瘤組織微陣列芯片中的表達的相關(guān)性29-32
• 2.2 免疫熒光檢測CD147與GLUT1共定位32
• 2.3 CD147與GLUT-1相互作用32-34
• 2.4 荷瘤裸鼠腫瘤組織~(18)F-FDG攝取的掃描34-37
• 第三章 討論37-40
• 結(jié)論40-41
• 參考文獻41-43
• 綜述43-52
• 參考文獻49-52
• 攻讀碩士期間研究成果52-53
• 致謝53

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1 宋智琦;微管相關(guān)蛋白2基因轉(zhuǎn)染抑制惡性黑素瘤細胞生長的研究[J];中華皮膚科雜志;2004年04期

2 龍朝欽,鄧軍,鐘白玉,郝飛;5-氨基酮戊酸光動力效應對體外培養(yǎng)人惡性黑素瘤細胞的物理學干預特征[J];中國臨床康復;2005年10期

3 李雅琳;焦振山;張玉環(huán);劉棟;;梔子苷、黃芩苷、華蟾酥毒基對體外培養(yǎng)的B16惡性黑素瘤細胞細胞增殖的抑制作用[J];中國中西醫(yī)結(jié)合皮膚性病學雜志;2007年04期

4 余德厚,陸洪光,程波,吳承龍,牟霞,汪宇;金黃色葡萄球菌腸毒素A對B16惡性黑素瘤細胞的殺傷作用[J];中華皮膚科雜志;2004年10期

5 涂亞庭,陶娟,黃長征,張杏平,張麗霞,沈關(guān)心;血管內(nèi)皮生長因子-siRNA對惡性黑素瘤細胞生長的抑制作用[J];中華皮膚科雜志;2005年05期

6 權(quán)錦花;高明陽;;MCL-1反義寡核苷酸轉(zhuǎn)染惡性黑素瘤細胞的光鏡和電鏡觀察[J];中國皮膚性病學雜志;2007年10期

7 田羽;;抗體截獲皮癌細胞[J];國外醫(yī)學情報;1988年23期

8 侯麥花,朱文元,盧新政;三氧化二砷對小鼠惡性黑素瘤細胞Cloudman S91的作用[J];中華皮膚科雜志;2004年04期

9 余晶晶,盛晚香,魯英,王玉,余月英,黃霞;腺病毒介導p27mt基因轉(zhuǎn)移誘導惡性黑素瘤細胞凋亡的實驗研究[J];中國麻風皮膚病雜志;2005年09期

10 殷河慧;廖文俊;王巖;謝楊新;高天文;;RNA干擾技術(shù)抑制人惡性黑素瘤細胞A375中淋巴樣增強因子mRNA及蛋白表達[J];中華皮膚科雜志;2006年04期

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1 李雅琳;焦振山;張玉環(huán);劉棟;;梔子苷對體外培養(yǎng)的B16惡性黑素瘤細胞的分化誘導和促凋亡作用[A];中華醫(yī)學會第十五次全國皮膚性病學術(shù)會議論文集[C];2009年

2 李春英;高天文;李廷慧;孫東杰;李強;高鴿;劉玉峰;;人酪氨酸酶相關(guān)蛋白1(TRP1)編碼基因反義核酸對人黑素細胞及惡性黑素瘤細胞影響的研究[A];2003中國中西醫(yī)結(jié)合皮膚性病學術(shù)會議論文匯編[C];2003年

3 吳麗莎;唐麗梅;李岱;趙爽;陽丹雯;粟娟;匡葉紅;陳翔;;白黎蘆醇通過上調(diào)miR-492抑制CD147的表達而促進惡性黑素瘤細胞的凋亡[A];中華醫(yī)學會第十八次全國皮膚性病學術(shù)年會論文匯編[C];2012年

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本文編號：593077