本文關(guān)鍵詞：Diallyl Disulfide對化學(xué)誘導(dǎo)皮膚癌的預(yù)防作用及其作用機(jī)制研究

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【摘要】：[研究背景與目的]癌癥患者數(shù)量與日俱增,通過手術(shù)切除、放化療、甚至分子靶向抑制劑等單純的治療都無法完全根治癌癥,且醫(yī)療花費巨大。癌癥等重大疾病的的預(yù)防一直是研究的重點。選擇低毒、經(jīng)濟(jì)且可長期應(yīng)用的天然化合物預(yù)防癌癥的策略正逐步受到人們的重視。黑蒜是一種新型的大蒜加工食品,具有抗菌、抗腫瘤、抗炎等許多生物學(xué)活性。黑蒜中的Diallyl Disulfide (DADS)具有抑制腫瘤細(xì)胞增殖、促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡及抑制腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移的潛能。本研究在于考察DADS對于化學(xué)致癌物誘導(dǎo)的小鼠皮膚癌體內(nèi)和體外模型的預(yù)防作用,并闡明其確切的作用機(jī)制。[研究內(nèi)容與結(jié)果]本研究首先利用經(jīng)典的DMBA/TPA兩階段致癌模型及TPA誘導(dǎo)的JB6 P+細(xì)胞克隆形成實驗分別在體內(nèi)外考察DADS的癌癥預(yù)防作用。結(jié)果表明預(yù)先給予DADS在體內(nèi)可以濃度依賴性地降低皮膚乳突狀淋瘤的發(fā)生率、平均荷瘤數(shù)目、腫瘤的大小以及在體外同樣可以濃度依賴性地減少TPA誘導(dǎo)的克隆形成數(shù)目。考慮到DADS具有較強(qiáng)的抗氧化活性,通過檢測小鼠背部皮膚中活性氧簇(Reactive Oxygen Species, ROS)的水平,發(fā)現(xiàn)預(yù)先給予DADS可以清除TPA誘導(dǎo)的高水平ROS含量,這主要與抗氧化酶活力的升高有關(guān)。采用Real-time PCR檢測,發(fā)現(xiàn)DADS在體內(nèi)外模型中均可以濃度依賴性地提升抗氧化酶的mRNA水平。進(jìn)一步通過免疫組化和WesternBlot研究發(fā)現(xiàn)DADS可以在體內(nèi)外濃度依賴性地促進(jìn)小鼠皮膚細(xì)胞中的Nrf2入核。以上結(jié)果初步表明DADS的癌癥預(yù)防作用與誘導(dǎo)Nrf2入核相關(guān)。選用Nrf2-/-小鼠進(jìn)行反向驗證,結(jié)果表明DADS無法預(yù)防DMBA/TPA誘導(dǎo)的Nrf2-/-小鼠背部皮膚乳突狀淋瘤的發(fā)生與生長以及無法減少DMBA/TPA誘導(dǎo)的小鼠背部皮膚增厚。由此證明了DADS是通過誘導(dǎo)Nrf2入核促進(jìn)抗氧化酶表達(dá)增多發(fā)揮癌癥預(yù)防作用。利用細(xì)胞在體外探究DADS促進(jìn)Nrf2入核的具體機(jī)制,通過WesterBlot和免疫熒光實驗初步發(fā)現(xiàn)DADS可以時間依賴性地上調(diào)Nrf2的核表達(dá)。其中,DADS作用4-8h時能顯著增加Nrf2的核內(nèi)表達(dá)。另外,通過給予p-Akt抑制劑MK2206反向驗證,進(jìn)一步排除了DADS是通過激活MAPKs和Akt信號通路后引起Nrf2入核的級聯(lián)反應(yīng)。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn),DADS能夠時間依賴地誘導(dǎo)Nrf2總蛋白表達(dá)水平升高,但不影響Nrf2的mRNA水平。選用蛋白酶抑制劑MG132與DADS合用,結(jié)果表明DADS與MG132協(xié)同抑制Nrf2降解。由此可知DADS是通過抑制Nrf2的降解,從而引起了Nrf2的胞內(nèi)蓄積及后續(xù)的入核。為了探究DADS抑制Nrf2降解的機(jī)制,我們首先排除了DADS對Nrf2胞內(nèi)抑制因子Keap1的影響。而DADS能夠時間依賴地增加Nrf2的另一個結(jié)合蛋白p21的表達(dá)水平。而p21可以與Keap1競爭性結(jié)合Nrf2,減少其降解。通過免疫共沉淀檢測發(fā)現(xiàn)DADS不僅能促進(jìn)p21的表達(dá),而且能夠促進(jìn)p21與Nrf2的結(jié)合,進(jìn)而減少了Nrf2的降解。此外,我們選用HEK293T細(xì)胞轉(zhuǎn)染p21 siRNA反向驗證了p21在DADS調(diào)節(jié)Nrf2蛋白水平過程中的重要作用。[結(jié)論與意義]基于以上結(jié)果,我們發(fā)現(xiàn)DADS成分可以預(yù)防化學(xué)致癌物誘導(dǎo)的小鼠背部皮膚乳突狀淋瘤的發(fā)生和生長。給予DADS能夠促進(jìn)p21與Nrf2結(jié)合增多,進(jìn)而減少了Nrf2的降解,增加了Nrf2的核表達(dá)并啟動下游轉(zhuǎn)錄,促進(jìn)抗氧化酶的表達(dá)上調(diào),從而減少了ROS對機(jī)體的損傷,最終發(fā)揮了癌癥預(yù)防作用。該課題闡明了DADS具有很好的癌癥預(yù)防潛能并明確了DADS發(fā)揮癌癥預(yù)防作用的機(jī)制,為DADS進(jìn)入臨床研究及日常生活中的應(yīng)用提供了一個有力的證據(jù)。
【關(guān)鍵詞】：Diallyl Disulfide 腫瘤 皮膚 Nrf2 p21
【學(xué)位授予單位】：南京中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R739.5
【目錄】：

• 摘要7-9
• Abstract9-11
• 第一部分 前言11-13
• 1. 針對晚期癌癥患者的研究并不能解決嚴(yán)峻的問題11
• 2. 利用天然化合物預(yù)防癌癥是抗癌研究的重要策略11
• 3. DMBA/TPA兩階段致癌模型是評價藥物癌化學(xué)預(yù)防作用的經(jīng)典模型11-12
• 4. 黑蒜提取物中的DADS具有癌癥預(yù)防的潛能12
• 5. 課題假說的提出12
• 6. 課題意義12-13
• 第二部分 DADS在體內(nèi)外對化學(xué)誘導(dǎo)的小鼠皮膚癌模型的預(yù)防作用13-22
• 1. DADS對DMBA/TPA誘導(dǎo)的小鼠皮膚癌的預(yù)防作用13-17
• 2. DADS對TPA誘導(dǎo)JB6 P+細(xì)胞克隆形成的預(yù)防作用17-21
• 3. 討論21-22
• 第三部分 DADS在體內(nèi)外對抗氧化系統(tǒng)的影響22-33
• 1. DADS抑制DMB-TPA誘導(dǎo)ROS的表達(dá)22-24
• 2. DADS在體內(nèi)外促進(jìn)抗氧化酶的活性24-28
• 3. DADS在體內(nèi)外促進(jìn)抗氧化酶的mRNA水平28-32
• 4. 討論32-33
• 第四部分 DADS促進(jìn)Nrf2入核發(fā)揮皮膚癌預(yù)防作用研究33-43
• 1. DADS促進(jìn)各抗氧化酶上游Nrf2入核及轉(zhuǎn)錄活性33-39
• 2. DADS無法對DMBA/TPA誘導(dǎo)的Nrf2~(-/-)小鼠皮膚癌發(fā)揮預(yù)防作用39-42
• 3. 討論42-43
• 第五部分 DADS在體外促進(jìn)Nrf2入核的機(jī)制研究43-53
• 1. DADS時間依賴地促進(jìn)JB6 P+細(xì)胞中Nrf2的核表達(dá)增多43-46
• 2. DADS對JB6 P+細(xì)胞中Nrf2的上游信號通路的影響46-48
• 3. DADS促進(jìn)JB6 P+細(xì)胞中Nrf2的總蛋白升高的影響及其機(jī)制48-52
• 4. 討論52-53
• 總結(jié)與展望53-55
• 1. 總結(jié)53-54
• 2. 論文的創(chuàng)新點54
• 3. 研究的不足和展望54-55
• 綜述55-59
• 參考文獻(xiàn)59-67
• 附錄67-72
• 正文涉及常規(guī)試劑配置表67-69
• 正文實驗涉及抗體表69-70
• 正文實驗涉及引物表70-71
• 正文涉及縮略詞表71-72
• 攻讀碩士學(xué)位期間取得的學(xué)術(shù)成果72-73
• 發(fā)表文章72
• 獲得獎項72-73
• 致謝73

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3 龍白;胡鐵輝;張陽德;;DADS抑制裸鼠肝癌HePG2細(xì)胞移植瘤的實驗研究[J];中南大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版);2010年07期

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5 尹曉然;馮誠;張軍;馬紅兵;王西京;張淑群;焦楊;張蓉;;DADS抑制食管胃交界部腺癌細(xì)胞OE19增殖及誘導(dǎo)凋亡的機(jī)制[J];西安交通大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版);2014年03期

6 向姝霖;肖曉嵐;蘇琦;趙潔;黃琛;解娜;周秀田;周建國;;DADS體內(nèi)誘導(dǎo)人胃癌細(xì)胞分化作用中組蛋白乙�；淖兓痆J];中國藥理學(xué)通報;2006年01期

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8 劉德勇;張慶麗;王海倫;彭和人;謝海龍;;DADS對人小細(xì)胞肺癌NCI-H446細(xì)胞系增殖抑制的研究[J];現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展;2014年08期

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10 蘇堅;史玲;周鈺娟;廖前進(jìn);夏紅;蘇琦;;DADS下調(diào)肌動蛋白解聚因子抑制人結(jié)腸癌SW480細(xì)胞遷移與侵襲[J];中國腫瘤臨床;2012年06期

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1 凌暉;;Effects of Diallyl Disulfide on Checkpoint Kinase Chkl/2 of Cell Cycle G2/M in the Human Gastric Cancer Cell Line MGC803[A];2008年中國病理生理學(xué)會第十一屆腫瘤和第十二屆免疫專業(yè)委員會學(xué)術(shù)會議論文集[C];2008年

2 向姝霖;肖曉嵐;蘇琦;趙潔;黃琛;解娜;周秀田;董琳;;組蛋白乙�；贒ADS誘導(dǎo)人胃癌MGC803細(xì)胞分化中的作用[A];第四屆中國腫瘤學(xué)術(shù)大會暨第五屆海峽兩岸腫瘤學(xué)術(shù)會議論文集[C];2006年

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4 解娜;蘇琦;凌暉;黃琛;;DADS誘導(dǎo)人胃癌MGC803細(xì)胞相關(guān)基因差異表達(dá)分析[A];第四屆中國腫瘤學(xué)術(shù)大會暨第五屆海峽兩岸腫瘤學(xué)術(shù)會議論文集[C];2006年

5 廖前進(jìn);蘇堅;周鈺娟;史玲;夏紅;蘇琦;;LIMKl沉默促進(jìn)DADS抑制SW480細(xì)胞遷移與侵襲[A];中國病理生理學(xué)會第十三屆腫瘤、第十四屆免疫專業(yè)委員會學(xué)術(shù)會議論文集[C];2012年

6 凌暉;文玲;曾鐵兵;朱亞平;蘇琦;;microRNA靶向抑制RORa表達(dá)對DADS誘導(dǎo)人胃癌細(xì)胞增殖的影響[A];中國病理生理學(xué)會受體、腫瘤和免疫專業(yè)委員會聯(lián)合學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2010年

7 蘇琦;;DADS抑制人胃癌MGC803細(xì)胞增殖差異基因表達(dá)譜構(gòu)建與生物信息學(xué)分析[A];中華醫(yī)學(xué)會病理學(xué)分會2010年學(xué)術(shù)年會日程及論文匯編[C];2010年

8 蘇琦;;DADS對轉(zhuǎn)Chk1、Chk2基因MGC-803細(xì)胞系G2/M期的影響[A];中華醫(yī)學(xué)會病理學(xué)分會2010年學(xué)術(shù)年會日程及論文匯編[C];2010年

9 易嵐;曾希;蘇琦;葛玲;解娜;;DADS啟動人白血病細(xì)胞HL-60細(xì)胞凋亡的蛋白質(zhì)組學(xué)研究[A];第四屆中國腫瘤學(xué)術(shù)大會暨第五屆海峽兩岸腫瘤學(xué)術(shù)會議論文集[C];2006年

10 蘇琦;;Chk1和Chk2轉(zhuǎn)染對DADS誘導(dǎo)BGC823細(xì)胞周期阻滯的影響[A];中華醫(yī)學(xué)會病理學(xué)分會2010年學(xué)術(shù)年會日程及論文匯編[C];2010年

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1 凌暉;DADS靶向誘導(dǎo)人胃癌細(xì)胞分化與周期阻滯及機(jī)理研究[D];南華大學(xué);2007年

2 龍白;槲皮素、地錢黃酮、DADS對人肝癌HepG2細(xì)胞增殖和凋亡的影響及相關(guān)作用機(jī)理的研究[D];中南大學(xué);2010年

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1 單云龍;Diallyl Disulfide對化學(xué)誘導(dǎo)皮膚癌的預(yù)防作用及其作用機(jī)制研究[D];南京中醫(yī)藥大學(xué);2016年

2 向姝霖;組蛋白乙酰化在DADS體內(nèi)外誘導(dǎo)人胃癌細(xì)胞分化中的作用[D];南華大學(xué);2005年

3 汪煜華;DADS誘導(dǎo)HL-60細(xì)胞G_2/M期阻滯差異表達(dá)基因的分離與克隆[D];南華大學(xué);2006年

4 黃幼生;DADS對人結(jié)腸癌細(xì)胞生長抑制作用及其差異表達(dá)基因分析[D];南華大學(xué);2005年

5 邵志濱;DADS對人小細(xì)胞肺癌細(xì)胞株NCI-H446增殖和凋亡的影響[D];南華大學(xué);2008年

6 蘇堅;DADS對SW480細(xì)胞系生物學(xué)行為及蛋白質(zhì)表達(dá)譜的影響[D];南華大學(xué);2007年

7 趙婷玉;DADS對人類胃癌BGC-823細(xì)胞增殖與凋亡作用的影響[D];中南大學(xué);2013年

8 胡和平;DADS下調(diào)MRP逆轉(zhuǎn)肝癌細(xì)胞耐藥性的研究[D];南華大學(xué);2014年

9 劉德勇;DADS對人小細(xì)胞肺癌細(xì)胞株NCI-H446細(xì)胞及裸鼠移植瘤生長的影響[D];南華大學(xué);2008年

10 趙潔;DADS體內(nèi)外誘導(dǎo)人白血病細(xì)胞分化與組蛋白乙�；年P(guān)系[D];南華大學(xué);2005年

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