本文關(guān)鍵詞：氧化亞銅納米粒（CONPs）對(duì)人黑色素瘤干細(xì)胞的抑制和殺傷作用研究

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【摘要】：惡性黑色素瘤是一種非常嚴(yán)重的皮膚惡性腫瘤,由于它極易轉(zhuǎn)移到肺、腦等重要器官,因此患者死亡率極高。隨著我國(guó)社會(huì)經(jīng)濟(jì)的發(fā)展,惡性黑色素瘤已成為我國(guó)所有惡性腫瘤中發(fā)病率增長(zhǎng)最快的腫瘤之一。由于傳統(tǒng)的手術(shù)切除、放化療等手段在改善預(yù)后、提高患者遠(yuǎn)期生存率等方面效果不顯著,所以新型藥物和療法的建立就顯得尤為重要。納米醫(yī)學(xué)及其分支納米腫瘤學(xué)的發(fā)展給腫瘤治療及抗腫瘤藥物研發(fā)提供了可行的方法和思路。腫瘤干細(xì)胞學(xué)說(shuō)認(rèn)為,腫瘤的形成和發(fā)展與其中一小部分被稱為腫瘤干細(xì)胞的群體關(guān)系密切。這群細(xì)胞具有高度的增殖、自我更新能力和多向分化潛能,同時(shí)可逃逸免疫監(jiān)視。它們?cè)谀[瘤的發(fā)生和發(fā)展中發(fā)揮著重要作用,與腫瘤的侵襲、轉(zhuǎn)移、抗藥性的產(chǎn)生以及治療后的復(fù)發(fā)有密切的相關(guān)性,所以針對(duì)腫瘤干細(xì)胞的治療才是治療腫瘤和預(yù)防腫瘤復(fù)發(fā)的關(guān)鍵。傳統(tǒng)的化療藥物不具有腫瘤干細(xì)胞的靶向性,無(wú)法徹底清除病人體內(nèi)腫瘤干細(xì)胞,導(dǎo)致化療后腫瘤的復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移。因此我們認(rèn)為,能否有效殺傷腫瘤干細(xì)胞和能否有效降低腫瘤干細(xì)胞的干性特征應(yīng)該成為一個(gè)評(píng)價(jià)藥物腫瘤治療有效性的重要指標(biāo)。本課題組在之前的研究中對(duì)氧化亞銅納米粒(Cuprous Oxide Nanoparticles,CONPs)抑制小鼠黑色素瘤生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移的能力進(jìn)行了評(píng)價(jià)。研究結(jié)果顯示CONPs在體內(nèi)能夠顯著抑制小鼠黑色素瘤的生長(zhǎng),顯著延長(zhǎng)荷瘤小鼠的生存期,提高荷瘤小鼠的生存率;更重要的是能抑制黑色素瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移,減少肺內(nèi)轉(zhuǎn)移瘤的數(shù)量和單個(gè)瘤體的大小;同時(shí)還發(fā)現(xiàn)CONPs對(duì)小鼠具有很低的毒性。我們也對(duì)CONPs的腫瘤治療作用的相關(guān)機(jī)制進(jìn)行了探討,結(jié)果證實(shí)了CONPs進(jìn)入細(xì)胞后具有線粒體靶向性,通過(guò)啟動(dòng)線粒體介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡程序從而誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡,但是并未對(duì)CONPs能否根治人的黑色素瘤,即能否有效殺傷人黑色素瘤腫瘤干細(xì)胞的問(wèn)題做出回答。令人高興的是,人黑色素瘤腫瘤干細(xì)胞鑒定標(biāo)志物的明確,使這一問(wèn)題的闡明成為可能。本課題作為CONPs潛在抗腫瘤藥物評(píng)價(jià)的一部分,我們著重于低劑量CONPs在抑制人的黑色素細(xì)胞增殖、殺傷黑色素瘤干細(xì)胞和降低細(xì)胞群體的干性等方面的作用作了系統(tǒng)地研究。我們首先利用人黑色素瘤干細(xì)胞標(biāo)志物CD271分選了A375、WM266-4黑色素瘤細(xì)胞系中的CD271~(+/high)細(xì)胞,利用NOD/SCID的成瘤實(shí)驗(yàn)證明CD271~(+/high)細(xì)胞具有較高的成瘤能力;然后確認(rèn)了不同濃度CONPs抑制細(xì)胞增殖以及誘導(dǎo)CD271~(+/high)細(xì)胞和CD271~(-/low)細(xì)胞凋亡的作用,發(fā)現(xiàn)低劑量的CONPs雖然只能引起少量黑色素瘤細(xì)胞凋亡,但是卻可以明顯抑制黑色素瘤細(xì)胞的增殖速度,顯著降低細(xì)胞成球比例和在NOD/SCID小鼠的成瘤能力。低劑量處理后的黑色素瘤細(xì)胞中腫瘤干細(xì)胞干性關(guān)鍵性基因CD271、SOX10顯著下調(diào),與黑色素瘤增殖、轉(zhuǎn)移和耐藥相關(guān)的MITF基因表達(dá)水平顯著下調(diào)。最后,我們證實(shí)了黑色素瘤細(xì)胞可以通過(guò)網(wǎng)格蛋白介導(dǎo)的內(nèi)吞作用攝取CONPs,具有一定的特異性,而且CD271~(+/high)細(xì)胞同CD271~(-/low)細(xì)胞相比,可攝取和積累更多的CONPs,提示CONPs可能具有一定的黑色素瘤干細(xì)靶向性,具備通過(guò)抑制和殺傷黑色素瘤干細(xì)胞而抑制黑色素瘤生長(zhǎng)、轉(zhuǎn)移和形成抗藥性的能力。總之,本研究證明低劑量的CONPs不但可以抑制人黑色素瘤細(xì)胞增殖,而且可以通過(guò)誘導(dǎo)黑色素腫瘤干細(xì)胞凋亡、降低腫瘤細(xì)胞的干性以及抑制耐藥性的形成來(lái)抑制黑色素瘤的生長(zhǎng)。該研究為CONPs作為一種潛在的新型藥物的進(jìn)一步開(kāi)發(fā)提供了有價(jià)值的實(shí)驗(yàn)和理論方面的支持。
【關(guān)鍵詞】：黑色素瘤 腫瘤干細(xì)胞 CONPs CD271
【學(xué)位授予單位】：第二軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：R739.5
【目錄】：

• 摘要6-8
• Abstract8-10
• 縮略詞表10-11
• 前言11-15
• 實(shí)驗(yàn)材料15-18
• 一、主要器材和設(shè)備15-16
• 二、主要試劑及其制備16-18
• 試驗(yàn)方法18-25
• 一、氧化亞銅納米粒的合成18
• 二、細(xì)胞中微量元素銅（Cu）的測(cè)定18-19
• 三、細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)19-21
• 四、分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)21-22
• 五、免疫組織化學(xué)22-23
• 六、動(dòng)物實(shí)驗(yàn)23-25
• 實(shí)驗(yàn)結(jié)果25-45
• 一、A375和WM266-4 黑色素瘤細(xì)胞系含有較高比例的CD271~(+/high)細(xì)胞，具有較強(qiáng)的成瘤能力25-26
• 二、CONPs誘導(dǎo)人黑色素瘤細(xì)胞凋亡26-29
• 三、經(jīng)CONPs處理后的存活細(xì)胞的增殖和自我更新能力顯著下降， 而且作用效果呈現(xiàn)劑量依賴性29-30
• 四、低劑量CONPs處理對(duì)黑色素瘤細(xì)胞增殖和干性的影響30-37
• 五、CONPs殺傷黑色瘤干細(xì)胞的作用及相關(guān)機(jī)制37-41
• 六、CONPs可有效抑制NOD/SCID小鼠體內(nèi)黑色素瘤生長(zhǎng)41-45
• 討論45-47
• 綜述 納米技術(shù)在癌癥治療中的應(yīng)用47-56
• 參考文獻(xiàn)56-61
• 在讀期間論文發(fā)表情況61-62
• 致謝62

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