本文關(guān)鍵詞：黑素體特異性蛋白GPNMB在黑色素形成中的作用探討

  更多相關(guān)文章： GPNMB 中波紫外線 酪氨酸酶 黑素細(xì)胞 黑素體 RNA干擾

【摘要】：黑色素代謝過程是色素性皮膚病及皮膚美白領(lǐng)域研究熱點(diǎn)。皮膚中的色素是由黑色素細(xì)胞產(chǎn)生的，因此，美白的關(guān)鍵在于抑制黑色素細(xì)胞產(chǎn)生黑色素的能力。傳統(tǒng)的觀點(diǎn)認(rèn)為抑制黑色素產(chǎn)生的關(guān)鍵在于抑制黑色素合成過程的關(guān)鍵酶酪氨酸酶（Tyr）的活性。隨著人們對黑色素合成機(jī)理認(rèn)識的深入，人們已經(jīng)能夠從多個(gè)靶位點(diǎn)出發(fā)抑制黑色素的形成。近年來，一些新型的如非轉(zhuǎn)移性黑色素瘤糖蛋白B[glycoprotein (transmembrane) nonmetastatic melanoma protein b，GPNMB]等黑素體特異性蛋白被發(fā)現(xiàn)，，但是它們在黑色素代謝中的作用尚不清楚。本課題擬探討GPNMB在黑色素形成中的作用。 目的：明確UVB對GPNMB表達(dá)的調(diào)變規(guī)律，利用SiRNA法干擾GPNMB后判斷其在黑色素形成中的作用，并初步探討其可能機(jī)理。 方法：以GPNMB為研究對象，將Tyr作為陽性對照，通過對黑色素上皮細(xì)胞系PIG1進(jìn)行UVB照射，分別利用實(shí)時(shí)定量RT-PCR、Western blot和免疫熒光技術(shù)，了解對GPNMB的變化規(guī)律；合成GPNMB特異性SiRNA并轉(zhuǎn)染入PIG1細(xì)胞中，利用Western blot判斷其抑制GPNMB表達(dá)的效率，利用電鏡觀察黑素細(xì)胞中黑素體結(jié)構(gòu)及分布的變化；利用實(shí)時(shí)定量RT-PCR和Western blot判斷當(dāng)GPNMB表達(dá)受抑制后，Tyr在基因和蛋白水平的變化；利用實(shí)時(shí)定量RT-PCR，分析小眼球轉(zhuǎn)錄因子（microphthalmia-associated transcription factor, MITF）及受MITF調(diào)控的黑素體特異性蛋白Trp1和OA1的表達(dá)變化。 結(jié)果：（1）GPNMB可以被UVB上調(diào)，變化趨勢與Tyr相近；（2）GPNMB表達(dá)被抑制后，黑素體形成減少，同時(shí)Tyr的基因及蛋白表達(dá)水平都降低；（3）在對MITF及其調(diào)節(jié)蛋白的研究中，發(fā)現(xiàn)UVB和GPNMB的下調(diào)都能夠上調(diào)MITF表達(dá)，而當(dāng)UVB和GPNMB下調(diào)同時(shí)發(fā)生時(shí)，MITF水平急劇下降。 結(jié)論：1.GPNMB能夠被UVB上調(diào)；2.GPNMB的表達(dá)被抑制后，黑素體生成減少，酪氨酸酶合成下降；3.GPNMB被抑制后黑素體減少的原因可能與MITF調(diào)控途徑不同。
【關(guān)鍵詞】：GPNMB 中波紫外線 酪氨酸酶 黑素細(xì)胞 黑素體 RNA干擾
【學(xué)位授予單位】：第四軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R751
【目錄】：

• 縮略詞表5-7
• 中文摘要7-9
• ABSTRACT9-11
• 前言11-12
• 文獻(xiàn)回顧12-42
• 第一部分 UVB 照射下 GPNMB 表達(dá)的變化42-58
• 1 材料42-44
• 1.1 細(xì)胞42
• 1.2 主要試劑42-43
• 1.3 主要儀器43-44
• 1.4 引物44
• 1.5 試劑配方44
• 2 方法44-51
• 2.1 黑色素細(xì)胞系 PIG1 的培養(yǎng)與保存44-45
• 2.2 PIG1 細(xì)胞分組 UV 照射的培養(yǎng)45
• 2.3 UVB照射方法及照射劑量的選擇45-46
• 2.4 MTT 法測定生長曲線46
• 2.5 PIG1 細(xì)胞的裂解46
• 2.6 DEPC 處理實(shí)驗(yàn)耗材以去除 RNA 酶46
• 2.7 總 RNA 的提取46-47
• 2.8 反轉(zhuǎn)錄制備 cDNA47-48
• 2.9 Real-time PCR 測定 mRNA 表達(dá)水平48
• 2.10 蛋白質(zhì)濃度的測定48-49
• 2.11 變性（SDS）不連續(xù)凝膠電泳49
• 2.12 免疫印跡和免疫檢測（Western Blot）49-50
• 2.13 用第二抗體偶聯(lián)物進(jìn)行免疫檢測50
• 2.14 間接免疫熒光50-51
• 2.15 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理51
• 3 結(jié)果51-53
• 4 討論53-58
• 第二部分 GPNMB 對黑素體形成的影響58-68
• 1 材料58
• 1.1 主要試劑58
• 1.2 主要儀器58
• 2 方法58-61
• 2.1 實(shí)時(shí)定量 RT-PCR58
• 2.2 siRNA 干涉 GPNMB58-59
• 2.3 細(xì)胞活力測定59
• 2.4 免疫印跡（Western Blot）59
• 2.5 電鏡檢測59-60
• 2.6 siRNA 干涉 GPNMB 后對 Tyr 的影響60
• 2.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理60-61
• 3 結(jié)果61-63
• 4 討論63-68
• 第三部分 GPNMB 在黑素體形成中作用機(jī)制的探討68-73
• 1 材料68
• 2 方法68
• 3 結(jié)果68-69
• 4 討論69-73
• 小結(jié)73-74
• 參考文獻(xiàn)74-88
• 個(gè)人簡歷和研究成果88-89
• 致謝89

【共引文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

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本文編號：528529