本文關鍵詞：兩種遺傳性色素減少性皮膚病致病基因突變研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：第一部分斑駁病KIT及SLUG致病基因突變檢測斑駁病(piebaldism)是一種臨床上較為罕見的常染色體顯性遺傳性皮膚病。由Morgan于1786年首次報道,目前尚無有效的根治方法。80%以上的患者存在特征性臨床表現(xiàn),即發(fā)生在額部中央部位的三角形或鉆石形白斑,并伴有跨越發(fā)際的局限性白發(fā),常可累及手足、腕踝、面、胸腹部。有些病人僅表現(xiàn)為軀干部位色素沉著斑或咖啡斑。本病可伴發(fā)虹膜異常、聾啞、精神發(fā)育異常、兔唇、耳、齒畸形、先天性紅細胞生成異常性貧血2型、神經纖維瘤病、先天性巨結腸、棘層松解性皮病等。斑駁病的發(fā)病率小于1：20000,無明顯性別及種族差異。斑駁病的組織病理表現(xiàn)并無特異性,主要表現(xiàn)為白斑處黑素細胞減少或消失。因而臨床上主要通過其典型皮膚表現(xiàn)結合家族病史進行診斷。大部分斑駁病患者生活功能及生存時間雖不受本病影響,但因斑駁病引起的皮膚外觀改變而致使生活質量顯著降低。目前已發(fā)現(xiàn)治療斑駁病的多種方法如自體表皮移植及黑色素細胞混懸液移植等。研究表明KIT及SLUG基因與斑駁病的發(fā)病存在相關性。KIT基因位于染色體4q21,是一種起源于HZ4貓肉瘤病毒的的原癌基因,其基因組DNA全長約70kb,包含21個外顯子。主要作用為編碼含有976個氨基酸的酪氨酸激酶(RTK)。RTK是一種跨膜蛋白,屬于III型蛋白酪氨酸激酶受體超家族,由7個部分組成,分別為信號序列(SS,氨基酸1-22)、氨基末端的胞外配體結合域(EC,氨基酸23-520)、跨膜區(qū)(TM,氨基酸52卜543)、近膜區(qū)(JM,氨基酸544-581)、兩個RTK活性區(qū)域(TK1,氨基酸684-582；TK2,氨基酸762-973)和激酶嵌入域(KI,氨基酸685-761),參與多條細胞內外信號轉導通路。胚胎發(fā)育期間,RTK胞外配體結合域與其配體肥大細胞生長因子(SCF)結合,RTK多肽鏈形成同源二聚體,從而激活細胞內RTK活性區(qū)域,使得活性區(qū)域內的酪氨酸殘基及信號轉導通路中各種末梢蛋白磷酸化,傳遞信號,從而參與成黑素細胞的增殖和遷移。研究表明75%的斑駁病患者都存在KIT基因突變。目前文獻已經報道的KIT基因突變包括轉換和顛換的點突變,插入及缺失的移碼突變以及染色體倒位,引起RTK功能下降或失活,致使胚胎發(fā)育期間的成黑素細胞增殖及遷移障礙,從而導致斑駁病發(fā)病。而SLUG基因位于染色體8q11,包含3個外顯子,總長約4034kb,屬于乙炔型鋅指轉錄因子。SLUG基因編碼由268個氨基酸組成的鋅指神經嵴轉錄因子。SLUG在胚胎期神經嵴衍生的細胞發(fā)育中起到重要作用,可調控表達KIT基因的神經嵴細胞的遷移,從而影響黑素細胞的發(fā)育。目前,對斑駁病的遺傳病因學研究主要集中在KIT基因上,對于SLUG基因的研究尚未完全開展,國內尚無關于SLUG基因序列突變的研究。本實驗對2斑駁病患者及其家系的KIT及SLUG基因進行突變檢測,以期有所發(fā)現(xiàn)。本研究對2個斑駁病家系中的先證者及其父母進行致病基因KIT和SLUG編碼序列的突變檢測,尋找致病性突變。經知情同意后采集家系中患者、患者父母及與家系成員無關的50例健康對照者外周靜脈血,進行全血基因組DNA提��；設計覆蓋KIT和SLUG基因編碼區(qū)及外顯子-內含子交界區(qū)的PCR引物,通過PCR技術擴增出研究對象KIT和SLUG基因編碼區(qū)及外顯子-內含子交界區(qū)；將PCR擴增產物進行瓊脂糖凝膠電泳,紫外燈下觀察擴增條帶；擴增產物純化后測序,分析測序結果,并與PubMed Genebank所公布的KIT及SLUG基因序列比對。發(fā)現(xiàn)家系1的先證者于KIT基因檢測到1個國際數(shù)據(jù)庫中尚未報道的新突變c.1082TA(p.V287E),患者父母均未檢測到此突變,故此突變?yōu)橐粋�de novo突變。家系2的先證者未檢測到KIT基因突變。2例先證者未檢測到SLUG基因突變,但均存在SLUG基因外顯子序列缺失。進一步證實了SLUG基因與斑駁病發(fā)病存在聯(lián)系。此2名患者臨床表型差異較大,先證者1表現(xiàn)為額頭、軀干及雙下肢大小不等的白斑,臨床表型為重型,而先證者2僅表現(xiàn)為額部白斑,臨床表型為輕型。研究表明,編碼細胞外配體結合域序列的基因突變導致輕的臨床表型,在跨膜區(qū)附近的突變臨床表型一般為中型,而RTK活性區(qū)域的突變常導致重型的發(fā)生。先證者1 KIT基因錯義突變c.1082TA(p.V287E)雖然位于編碼細胞外配體結合域的序列,但臨床表型卻是重型,推測是KIT基因錯義突變合并SLUG基因的缺失所產生的疊加效應。而先證者2臨床表型為輕型,KIT基因序列正常,僅表現(xiàn)為SLUG基因的缺失,推測SLUG基因缺失與斑駁病臨床輕型表現(xiàn)有一定的相關性。目前,對斑駁病的遺傳病因學研究主要集中在KIT基因上,對于SLUG基因的研究尚未完全開展,國內尚無關于斑駁病患者SLUG基因序列突變的研究。本實驗對2例斑駁病患者的KIT及SLUG基因進行突變檢測,豐富了斑駁病的遺傳及臨床數(shù)據(jù)庫,為斑駁病的進一步研究提供了基礎。目前斑駁病的發(fā)病機制尚未完全明確,國內僅有少量關于KIT基因突變位點與臨床表型間關系的研究,尚無SLUG基因突變與臨床表型相關性的研究,為了解斑駁病KIT及SLUG基因突變位點與斑駁病發(fā)病機制間的關系,仍需擴大樣本量進行進一步調查。第二部分ADAR1基因突變導致遺傳性對稱性色素異常癥一家系臨床表型差異遺傳性對稱性色素異常癥(dyschromatosis symmetrica hereditaria, DSH)是一種常染色體顯性遺傳性皮膚病。該病起于嬰幼兒期,其特征性臨床表現(xiàn)為四肢末端及手足背對稱性色素沉著斑和色素脫失斑,相互交織呈網狀,可累及前臂及小腿伸側。皮疹泛發(fā)者可波及頸、鎖骨上部、面部及口腔黏膜。組織學研究表明在DSH患者的色素沉著部位,基底細胞中的黑色素沉積顯著增加,而在色素脫失部位,基底細胞中只有少量黑色素沉積。皮膚鏡下可以觀察到相互連接的黑色素點組成了色素沉著斑,而在色素脫失斑部位,只有散在的不相連的黑色素點。研究表明DSH致病基因為位于1q11-1q21的ADAR1基因,目前已發(fā)現(xiàn)超過140種ADAR1基因突變。銀屑病(psoriasis)是一種慢性炎癥性皮膚病,病程較長,有易復發(fā)傾向,有的病例幾乎終生不愈。該病發(fā)病以青壯年為主,對患者的身體健康和精神狀況影響較大。臨床表現(xiàn)以紅斑,鱗屑為主,全身均可發(fā)病,以頭皮,四肢伸側較為常見,多在冬季加重。銀屑病的發(fā)病與多基因存在相關,目前其致病基因定位尚未完全明確。DSH一般只累及皮膚,但也可合并銀屑病或其他疾病如特發(fā)性腦鈣化及對稱性肢端肥大癥等。DSH為常染色體顯性遺傳病。其致病基因為位于1q21.3約500kb的區(qū)域內的雙鏈RNA特異性腺苷脫氨酶基因(ADAR1基因)。該基因全長約30kb,包含15個外顯子,編碼由1226個氨基酸組成的雙鏈RNA特異性腺苷脫氨酶(DSRAD)。DSRAD包括3個雙鏈RNA結合區(qū)域(DRBM),2個Z-DNA功能結合域區(qū)域(Z-alpha)和1個酶催化結合區(qū)域(ADEAMc),這些功能區(qū)域所對應的編碼序列分別位于ADAR1基因第2-7外顯子,第2外顯子和第9-14外顯子。目前為止,已發(fā)現(xiàn)140多種不同類型的DSRAD突變,包括80種錯義和無義突變,40種缺失突變,11種剪接位點突變和14種插入突變。約60%的DSRAD突變位于酶催化結合區(qū)域,推測此區(qū)域為突變熱點區(qū)。DSRAD廣泛存在于哺乳動物各組織中,該酶選擇性作用于mRNA前體,將相應位點上腺嘌呤核苷酸(A)脫氨基轉換成次黃嘌呤核苷(Ⅰ),使剪切位點或密碼子發(fā)生改變,從而產生特定生理效應。目前DSH的發(fā)病機制尚不明確,有學者推測可能與個體發(fā)育時,黑素母細胞從神經嵴遷往受累的皮膚區(qū)域,ADAR1基因突變導致DSRAD的mRNA編輯功能喪失,從而致使黑素母細胞分化成高活性或低活性的黑素細胞,致使DSH患者局部皮膚色素分布不規(guī)則。也有學者認為DSRAD是以是以同源二聚體的形式發(fā)揮作用的,當基因發(fā)生突變時,突變單體和野生型單體形成異源二聚體無法有效發(fā)揮應有的作用,從而導致DSH的發(fā)生。目前國內僅有2例DSH合并銀屑病病例相關報道,尚無DSH合并銀屑病患者及其家系ADAR1基因學相關研究。本研究檢測1例遺傳性對稱性色素異常癥合并銀屑病患者及其家系ADAR1致病基因突變情況。經知情同意后收集家系患者臨床資料,抽取家系中包括患者、表型正常者15人及與該家系無關的50例健康人外周血,進行全血基因組DNA提�。辉O計覆蓋ADAR1基因編碼區(qū)的PCR引物,通過PCR技術擴增出研究對象ADAR1基因編碼區(qū)及外顯子-內含子交界區(qū)；將PCR擴增產物進行瓊脂糖凝膠電泳,紫外燈下觀察擴增條帶；擴增產物純化后測序,分析測序結果,并與PubMed Genebank所公布的ADAR1基因序列比對。同時對家系所有成員進行體格檢查及血液學實驗室檢查。臨床資料分析顯示,僅先證者表現(xiàn)為遺傳性對稱性色素異常癥合并銀屑病,家系中其余患者僅表現(xiàn)為表型輕重不一的遺傳性對稱性色素異常癥�；蚍治霭l(fā)現(xiàn)先證者及家系中其余患者均存在ADARl基因c.2745_2746de1 CT(p.D582X)突變。家系中表型正常者及100例對照組不存在此突變,經多個數(shù)據(jù)庫文獻檢索及對照最新文獻未發(fā)現(xiàn)該突變的相關報道,考慮為新突變。推測ADAR1基因突變c.2745_2746de1 CT(p.D582X)可能導致了遺傳性對稱性色素異常癥的發(fā)生,但此家系DSH臨床表型輕重不一及不同的臨床表型的原因尚需進一步研究。
【關鍵詞】：斑駁病 KIT基因 SLUG基因 遺傳性對稱性色素異常癥 ADAR1基因 突變
【學位授予單位】：南方醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R758.5
【目錄】：

• 摘要3-8
• ABSTRACT8-16
• 第一部分 斑駁病KIT及SLUG致病基因突變檢測16-45
• 前言16-22
• 第一章 材料與方法22-37
• 第二章 結果37-40
• 第三章 討論40-44
• 第四章 結論44-45
• 第二部分 ADAR1基因突變導致遺傳性對稱性色素異常癥一家系臨床表型差異45-68
• 前言45-48
• 第一章 材料與方法48-62
• 第二章 結果62-64
• 第三章 討論64-67
• 第四章 結論67-68
• 參考文獻68-75
• 在讀期間發(fā)表的文章75-76
• 致謝76-77

【共引文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 彭琛;賴維;鄧偉平;;遺傳性對稱性色素異常癥一家系ADAR1致病基因突變檢測[J];臨床皮膚科雜志;2015年06期

2 陳艷宇;李艷;王貴明;彭芳;王愛武;權莉;譚夕;;液基薄層細胞學在宮頸癌篩查中的應用[J];檢驗醫(yī)學與臨床;2015年15期

  本文關鍵詞：兩種遺傳性色素減少性皮膚病致病基因突變研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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本文編號：510881