RPL8蛋白沖擊的DC疫苗抑制黑色素瘤生長的研究

發(fā)布時間：2017-06-16 00:03

本文關(guān)鍵詞：RPL8蛋白沖擊的DC疫苗抑制黑色素瘤生長的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的：構(gòu)建RPL8原核表達(dá)載體,經(jīng)誘導(dǎo)表達(dá)后獲得一定純度的RPL8蛋白；沖擊致敏DC,觀察其在體外對CTL的增殖和活化效果；免疫治療荷瘤小鼠后,觀察小鼠的存活期及腫瘤體積變化。方法： 1.PCR擴(kuò)增目的基因pUC57-RPL8,雙酶切后與載體pET28a (+)連接、構(gòu)建pET28a (+)-RPL8重組質(zhì)粒,經(jīng)雙酶切及測序鑒定后,轉(zhuǎn)化入大腸桿菌BL21誘導(dǎo)表達(dá),經(jīng)SDS-PAGE和Western Blotting鑒定。 2.無菌分離小鼠骨髓細(xì)胞,在細(xì)胞因子rm-CSF、rmIL-4、LPS聯(lián)合誘導(dǎo)下,體外培養(yǎng)DC,每天在顯微鏡下觀察DC形態(tài)特征,LPS誘導(dǎo)前后用流式細(xì)胞儀檢測其DC的表面標(biāo)志。 3.RPL8蛋白與DC混合培養(yǎng),24h后加入FITC-羊抗鼠抗體,1h后在熒光倒置顯微鏡下觀察。 4.RPL8沖擊樹突狀細(xì)胞后與尼龍毛柱分離的小鼠脾臟T淋巴細(xì)胞,按不同比例混勻,72h后分別以不同效靶比加入到Bl6黑色素瘤細(xì)胞中繼續(xù)培養(yǎng)48h后,酶標(biāo)儀測其OD值。 5.將RPL8蛋白沖擊的DC疫苗注入荷瘤小鼠體內(nèi),觀察腫瘤的體積變化及小鼠的生存時間與瘤體組織的病理變化。結(jié)果： 1.構(gòu)建的pET28a (+)-RPL8重組質(zhì)粒酶切鑒定及測序結(jié)果正確；經(jīng)SDS-PAGE電泳和Western Blotting分析可見約28KDa大小蛋白。 2.倒置顯微鏡下觀察DC具有典型的樹突狀結(jié)構(gòu),流式細(xì)胞儀檢測CDllc、CD80、MHC-I類及MHC-II類分別為77.3%、76.1%、62.2%和74.4%；熒光倒置顯微鏡下觀察DC內(nèi)有綠色熒光。 3.RPL8蛋白沖擊DC組可刺激T細(xì)胞增殖和活化能力,其誘導(dǎo)的CTL對小鼠黑色素瘤細(xì)胞有特異性殺傷作用。 4.RPL8蛋白沖擊的DC疫苗,注入荷瘤小鼠體內(nèi)后,小鼠生存期明顯延長,能抑制腫瘤生長,腫瘤體積大小明顯小于DC及PBS組。結(jié)論：成功制備DC疫苗,該疫苗對黑色素瘤有生長抑制作用,為免疫治療黑色素瘤提供理論依據(jù)。
【關(guān)鍵詞】：原核表達(dá) RPL8 樹突狀細(xì)胞 黑色素瘤 免疫治療
【學(xué)位授予單位】：遵義醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R739.5
【目錄】：