發(fā)布時間：2017-06-16 00:03

  本文關(guān)鍵詞：RPL8蛋白沖擊的DC疫苗抑制黑色素瘤生長的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的：構(gòu)建RPL8原核表達載體,經(jīng)誘導(dǎo)表達后獲得一定純度的RPL8蛋白；沖擊致敏DC,觀察其在體外對CTL的增殖和活化效果；免疫治療荷瘤小鼠后,觀察小鼠的存活期及腫瘤體積變化。 方法： 1.PCR擴增目的基因pUC57-RPL8,雙酶切后與載體pET28a (+)連接、構(gòu)建pET28a (+)-RPL8重組質(zhì)粒,經(jīng)雙酶切及測序鑒定后,轉(zhuǎn)化入大腸桿菌BL21誘導(dǎo)表達,經(jīng)SDS-PAGE和Western Blotting鑒定。 2.無菌分離小鼠骨髓細胞,在細胞因子rm-CSF、rmIL-4、LPS聯(lián)合誘導(dǎo)下,體外培養(yǎng)DC,每天在顯微鏡下觀察DC形態(tài)特征,LPS誘導(dǎo)前后用流式細胞儀檢測其DC的表面標志。 3.RPL8蛋白與DC混合培養(yǎng),24h后加入FITC-羊抗鼠抗體,1h后在熒光倒置顯微鏡下觀察。 4.RPL8沖擊樹突狀細胞后與尼龍毛柱分離的小鼠脾臟T淋巴細胞,按不同比例混勻,72h后分別以不同效靶比加入到Bl6黑色素瘤細胞中繼續(xù)培養(yǎng)48h后,酶標儀測其OD值。 5.將RPL8蛋白沖擊的DC疫苗注入荷瘤小鼠體內(nèi),觀察腫瘤的體積變化及小鼠的生存時間與瘤體組織的病理變化。 結(jié)果： 1.構(gòu)建的pET28a (+)-RPL8重組質(zhì)粒酶切鑒定及測序結(jié)果正確；經(jīng)SDS-PAGE電泳和Western Blotting分析可見約28KDa大小蛋白。 2.倒置顯微鏡下觀察DC具有典型的樹突狀結(jié)構(gòu),流式細胞儀檢測CDllc、CD80、MHC-I類及MHC-II類分別為77.3%、76.1%、62.2%和74.4%；熒光倒置顯微鏡下觀察DC內(nèi)有綠色熒光。 3.RPL8蛋白沖擊DC組可刺激T細胞增殖和活化能力,其誘導(dǎo)的CTL對小鼠黑色素瘤細胞有特異性殺傷作用。 4.RPL8蛋白沖擊的DC疫苗,注入荷瘤小鼠體內(nèi)后,小鼠生存期明顯延長,能抑制腫瘤生長,腫瘤體積大小明顯小于DC及PBS組。 結(jié)論：成功制備DC疫苗,該疫苗對黑色素瘤有生長抑制作用,為免疫治療黑色素瘤提供理論依據(jù)。
【關(guān)鍵詞】：原核表達 RPL8 樹突狀細胞 黑色素瘤 免疫治療
【學(xué)位授予單位】：遵義醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R739.5
【目錄】：

• 英文縮略詞對照表3-6
• 中文摘要6-8
• Abstract8-10
• 前言10-12
• 第一部分：RPL8原核表達載體的構(gòu)建及誘導(dǎo)表達12-23
• 材料12-15
• 方法15-19
• 結(jié)果19-22
• 討論22-23
• 第二部分：RPL8蛋白沖擊DC疫苗的制備23-31
• 材料23-24
• 方法24-26
• 結(jié)果26-29
• 討論29-31
• 第三部分：RPL8蛋白沖擊的DC疫苗對小鼠體內(nèi)黑色素瘤的抑制作用31-39
• 材料31-32
• 方法32-34
• 結(jié)果34-37
• 討論37-39
• 結(jié)論39-40
• 參考文獻40-43
• 綜述：DC疫苗在黑色素瘤免疫治療中的應(yīng)用43-49
• 參考文獻47-49
• 致謝49-50
• 作者簡介50

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前6條

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  本文關(guān)鍵詞：RPL8蛋白沖擊的DC疫苗抑制黑色素瘤生長的研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：453821