目的：間充質干細胞(Mesenchymal stem cells, MSCs)是一類能夠從骨髓、脂肪、羊膜和牙髓等多種組織分離的干細胞。由于其具有多向分化潛能,不表達人白細胞抗原DR位點(Human leukocyte antigen-antigen D related, HLA-DR)、 CD45等細胞表面標志的低免疫原性,以及向損傷組織、腫瘤部位歸巢和促進組織再生的特性,以MSCs為主的干細胞治療有望成為腫瘤和一些自體免疫疾病的新型治療手段。目前已證明MSCs在體內外能夠分泌細胞因子,調節(jié)腫瘤細胞的相關信號通路,進而抑制腫瘤細胞增殖、促進腫瘤細胞凋亡。其中,NF-κB信號通路也參與了該過程,然而完整的抑制機制目前尚未見報道。起源于皮膚、黏膜和中樞神經系統(tǒng)的黑色素瘤中有50%的病例與BRAF基因突變有關。該基因突變的發(fā)生導致白介素-1(Interleukin-1, IL-1)持續(xù)激活NF-κB信號通路,使得黑色素瘤細胞細胞周期失控,進而導致了腫瘤的形成和發(fā)展。有研究證明MSCs能夠分泌IL-1的受體拮抗劑(Interleukin-1 receptor antagonist, IL-1R...

【文章頁數(shù)】：93 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
致謝
中文摘要
ABSTRACT
1 引言
    1.1 黑色素瘤
    1.2 MSCs
        1.2.1 MSCs概述
        1.2.2 MSCs對腫瘤細胞的直接抑制作用機制
            1.2.2.1 MSCs通過下調Wnt/β-catenin信號通路抑制腫瘤細胞增殖
            1.2.2.2 MSCs通過下調Akt信號通路抑制腫瘤細胞增殖
            1.2.2.3 MSCs通過分泌微泡抑制腫瘤細胞增殖
            1.2.2.4 MSCs抑制腫瘤細胞增殖的其他途徑
        1.2.3 MSCs抑制腫瘤細胞增殖的間接機制
            1.2.3.1 MSCs向腫瘤歸巢的機制
            1.2.3.2 MSCs免疫抑制的機制
            1.2.3.3 MSCs間接抑制腫瘤細胞增殖的機制
        1.2.4 MSCs是否抑制腫瘤細胞增殖的爭議
    1.3 NF-κB信號通路,IL-1與IL-1Ra
    1.4 總結
2 實驗材料
    2.1 細胞株及細胞培養(yǎng)所用培養(yǎng)基
        2.1.1 細胞株
        2.1.2 細胞培養(yǎng)所用培養(yǎng)基
    2.2 主要試劑和試劑盒
    2.3 質粒和菌株
    2.4 實驗動物
    2.5 主要實驗儀器
    2.6 實驗耗材
    2.7 主要溶液的配制
        2.7.1 核酸電泳緩沖液的配制
        2.7.2 蛋白質電泳和Western Blot所用試劑的配制
        2.7.3 細胞實驗主要溶液配制
        2.7.4 其他實驗溶液配制
3 實驗方法
    3.1 MSCs、HEK-293細胞和A375細胞的培養(yǎng)
        3.1.1 MSCs的復蘇
        3.1.2 MSCs的傳代
        3.1.3 MSCs的凍存
        3.1.4 A375細胞和HEK-293細胞的復蘇
        3.1.5 A375細胞和HEK-293細胞的傳代
        3.1.6 A375細胞和HEK-293細胞的凍存
    3.2 MSCs對A375細胞增殖能力的影響
        3.2.1 MSCs與A375細胞共培養(yǎng)對A375的抑制效應分析
        3.2.2 MSCs CM對A375細胞的抑制效應分析
        3.2.3 MSCs CM對A375細胞周期的影響
        3.2.4 MSCs CM對NF-κB信號通路的影響
    3.3 沉默IL-1Ra表達的多克隆細胞MSCs-S和過表達IL-1Ra的多克隆細胞MSCs-O的獲得
        3.3.1 IL-1Ra和GAPDH的引物設計
        3.3.2 總RNA的提取和反轉錄
        3.3.3 重組載體pcDNA3.1-EGFP-IL-1Ra和pGPH1-IL-1Ra的構建
        3.3.4 MSCs-S和MSCs-O的獲得
        3.3.5 IL-1Ra在MSCs、MSCs-O和MSCs-S中的表達水平的檢測
    3.4 MSCs-S CM和MSCs-O CM對A375細胞增殖能力的影響
        3.4.1 MSCs-S CM對A375細胞增殖的抑制效應分析
        3.4.2 MSCs-S CM對A375細胞周期的影響
        3.4.3 MSCs-O CM對A375細胞的抑制效應分析
        3.4.4 MSCs-O CM對A375細胞周期的影響
    3.5 MSCs-S和MSCs-O CM對A375細胞抑制效應的分析及對NF-κB信號通路的影響
        3.5.1 MSCs-S和MSCs-O CM對A375細胞抑制效應的分析
        3.5.2 MSCs-S和MSCs-O CM對NF-κB信號通路的影響
    3.6 裸鼠異位瘤實驗
        3.6.1 A375細胞裸鼠異位瘤模型的建立
        3.6.2 腫瘤的組織學檢測
4 結果
    4.1 MSCs對A375細胞增殖的抑制作用
        4.1.1 MSCs與A375細胞共培養(yǎng)對A375細胞的抑制效應分析
        4.1.2 MSCs CM對A375細胞的抑制效應分析
        4.1.3 MSCs CM對A375細胞周期的影響
        4.1.4 MSCs CM對NF-κB信號通路的影響
    4.2 MSCs對A375細胞增殖的抑制作用的機制
        4.2.1 MSCs中IL-1Ra表達水平的調節(jié)
        4.2.2 降低IL-1Ra表達水平減弱了MSCs對A375細胞增殖的抑制作用
        4.2.3 提高IL-1Ra表達水平增強了MSCs對A375細胞增殖的抑制作用
        4.2.4 MSCs-S和MSCs-O CM對A375細胞周期的影響
        4.2.5 MSCs-S和MSCs-O CM對A375細胞抑制效應的分析及對NF-κB信號通路的影響
    4.3 IL-1Ra表達水平對A375細胞體內增殖的影響
5 討論
6 結論
參考文獻
附錄A 英文縮略詞表
作者簡歷
學位論文數(shù)據(jù)集



本文編號：4049153