目的探討白細(xì)胞介素(IL-22)對(duì)HaCaT細(xì)胞黏膜相關(guān)上皮趨化因子(CCL28)表達(dá)的影響。方法培養(yǎng)HaCaT細(xì)胞,將其分為6組:4個(gè)IL-22組(分別用12.5、25、50、100μg/L的IL-22進(jìn)行干預(yù)處理);阻斷劑組(50μmol/L PD98059阻斷干預(yù),2 h后加入50μg/L IL-22);對(duì)照組(用PBS處理)。24 h后,用CCK-8檢測(cè)細(xì)胞的增殖;用實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR檢測(cè)CCL28 mRNA的水平變化;用蛋白免疫印跡法、酶聯(lián)免疫吸附法和免疫熒光檢測(cè)CCL28蛋白水平的變化。結(jié)果 CCK-8檢測(cè)顯示,上述濃度的IL-22作用于HaCaT細(xì)胞24 h后,對(duì)細(xì)胞的增殖有明顯的促進(jìn)作用,且這種促進(jìn)作用能被PD98059抑制,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR檢測(cè)顯示,上述濃度的IL-22作用于HaCaT細(xì)胞,細(xì)胞中CCL28 mRNA逐漸升高,均較對(duì)照組升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01);通路阻斷劑組較50μg/L IL-22組降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。用蛋白免疫印跡法和酶聯(lián)免疫法檢測(cè)到CCL28蛋白...

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圖1CCK-8檢測(cè)HaCaT細(xì)胞增殖

不同濃度的IL-22作用于HaCaT細(xì)胞24h后,對(duì)細(xì)胞的增殖有明顯的促進(jìn)作用,細(xì)胞的增長(zhǎng)率呈現(xiàn)出濃度的依賴性,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=109.94,P<0.01)。且這種促進(jìn)作用能被PD98059抑制,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=131.02,P<0.05),見(jiàn)圖1。2.2實(shí)時(shí)熒....

圖2實(shí)時(shí)定量熒光PCR檢測(cè)CCL28mRNA水平

mRNA的變化在加入不同濃度的IL-22后,HaCaT細(xì)胞CCL28mRNA的水平均較對(duì)照組升高,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=14.61,P<0.01)。阻斷劑組中CCL28mRNA的水平較50μg/LIL-22組明顯降低,且這種差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=123.05,P....

圖3蛋白印跡法檢測(cè)CCL28蛋白表達(dá)

12.5、25、50、100μg/LIL-22干預(yù)處理后,HaCaT細(xì)胞中CCL28蛋白逐漸增高,依次為(CCL28與β肌動(dòng)蛋白灰度比值)0.87±0.01、1.76±0.02、2.43±0.01、2.82±0.01均較對(duì)照組(0.35±0.01)升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=....

圖4酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)CCL28蛋白表達(dá)

CCL28蛋白主要位于細(xì)胞質(zhì)(紅色熒光物質(zhì)),隨著IL-22濃度的升高,CCL28的表達(dá)量較對(duì)照組逐漸遞增。阻斷劑組中CCL28的表達(dá)量較50μg/LIL-22組明顯降低,見(jiàn)圖5。圖5免疫熒光法檢測(cè)CCL28的表達(dá)

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