目的:克隆人IL-31基因、構(gòu)建原核及真核表達(dá)載體,在大腸桿菌及哺乳動(dòng)物細(xì)胞中表達(dá),純化IL-31蛋白,研究其在皮膚炎癥中的作用及作用機(jī)制。 方法:PMA、PHA刺激正常人外周血單個(gè)核細(xì)胞,提取細(xì)胞總RNA,采用RT-PCR克隆人IL-31基因,將其克隆到原核表達(dá)載體pET28a(+),通過(guò)IPTG誘導(dǎo)目的基因在大腸桿菌中表達(dá);同時(shí)將其克隆到真核表達(dá)載體pcDNA3.1/myc-His(-)A,將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染CHO細(xì)胞,用RT-PCR和western-blot分析rhIL-31在CHO細(xì)胞中的表達(dá)。Ni樹脂純化在原核及真核細(xì)胞表達(dá)的his融合蛋白;用不同劑量rhIL-31刺激人表皮角質(zhì)細(xì)胞HaCaT,利用transwell穿孔板檢測(cè)HaCaT細(xì)胞培養(yǎng)上清對(duì)外周血單個(gè)核細(xì)胞的趨化作用,RT-PCR、熒光定量PCR檢測(cè)巨噬細(xì)胞炎性蛋白-3β(MIP-3β)、胸腺和活化調(diào)節(jié)趨化因子(TARC)、巨噬細(xì)胞來(lái)源的趨化因子(MDC)及T細(xì)胞活化蛋白-3(TCA-3/I-309)的表達(dá),western-blot檢測(cè)STAT1、STAT3、STAT5磷酸化;小鼠皮內(nèi)注射該目的蛋白,觀察局部炎癥表現(xiàn),皮...

【文章頁(yè)數(shù)】：83 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
引言
第一部分 hIL-31基因克隆、在原核細(xì)胞中的表達(dá) 及多克隆抗體的制備
    1 材料與方法
    2 結(jié)果
    3 討論
    參考文獻(xiàn)
第二部分 IL-31誘導(dǎo)小鼠皮膚炎癥
    1 材料與方法
    2 結(jié)果
    3 討論
    參考文獻(xiàn)
第三部分 IL-31對(duì)人表皮角質(zhì)細(xì)胞的作用
    1 材料與方法
    2 結(jié)果
    3 討論
    參考文獻(xiàn)
第四部分 hIL-31在真核細(xì)胞中的表達(dá)及對(duì) 人表皮角質(zhì)細(xì)胞的作用
    1 材料與方法
    2 結(jié)果
    3 討論
    4 參考文獻(xiàn)
結(jié)論
綜述
    參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間發(fā)表和待發(fā)表的文章
縮略詞語(yǔ)
致謝



本文編號(hào)：3883558