血管生成素基于其促血管發(fā)生活性,最早作為腫瘤血管生成因子被分離出來。已知血管生成素在血管內(nèi)皮細(xì)胞中進(jìn)行核轉(zhuǎn)移作用,在核仁中發(fā)生積累并刺激rRNA的轉(zhuǎn)錄,進(jìn)而誘發(fā)內(nèi)皮細(xì)胞的增殖促進(jìn)血管發(fā)生。目前對于血管生成素的研究主要集中在其如何誘發(fā)腫瘤的血管發(fā)生,進(jìn)而促進(jìn)腫瘤的進(jìn)一步生長和惡化。本文中我們研究血管生成素在黑色素瘤細(xì)胞生長中的作用,并分析血管生成素對于另一血管生成因子bFGF表達(dá)及功能的影響。我們將血管生成素的基因分別以正向和反向轉(zhuǎn)入人黑色素瘤A375細(xì)胞中,得到了穩(wěn)定的低表達(dá)和高表達(dá)血管生成素的細(xì)胞株。我們發(fā)現(xiàn)在轉(zhuǎn)入反義血管生成素基因的細(xì)胞株中,細(xì)胞的增殖受到了抑制,同時bFGF誘發(fā)的細(xì)胞增殖也受到了抑制,但是bFGF的表達(dá)水平卻提高了。相反,在轉(zhuǎn)染正義血管生成素基因的細(xì)胞株中,細(xì)胞的增殖提高了,同時bFGF誘發(fā)的細(xì)胞增殖也提高了,但是bFGF的表達(dá)水平下降了。另外我們利用免疫熒光實(shí)驗(yàn)進(jìn)行了血管生成素的核轉(zhuǎn)移分析,發(fā)現(xiàn)血管生成素在A375細(xì)胞中能夠進(jìn)行核轉(zhuǎn)移作用。進(jìn)一步的免疫透射電鏡實(shí)驗(yàn)分析表明血管生成素進(jìn)入細(xì)胞核后,其在核仁的分布與rDNA的分布及rRNA的合成區(qū)域相同,可能其作用與...

【文章頁數(shù)】：121 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
中文摘要
英文摘要
第一章 文獻(xiàn)綜述
    一、血管生成因子與腫瘤的關(guān)系
        (一) 血管生成簡介
        (二) 血管生成與腫瘤
        (三) 抗血管生成的腫瘤治療
        (四) 血管生成因子簡介
        (五) 血管生成因子對腫瘤的生長、轉(zhuǎn)移及預(yù)后的意義
    二、血管生成素的結(jié)構(gòu)功能及與腫瘤的關(guān)系
        (一) 血管生成素的結(jié)構(gòu)與性質(zhì)
        (二) 血管生成素的生物學(xué)功能
        (三) 血管生成素的作用機(jī)制
        (四) 血管生成素與腫瘤
        (五) 血管生成素的抑制劑
    三、bFGF的結(jié)構(gòu)功能及與腫瘤的關(guān)系
        (一) bFGF的結(jié)構(gòu)與性質(zhì)
        (二) bFGF的作用機(jī)制
        (三) bFGF的生物學(xué)作用
        (四) bFGF與腫瘤
    四、黑色素瘤的研究進(jìn)展
        (一) 黑色素瘤簡介
        (二) 黑色素瘤與血管生成因子
        (三) 血管生成素在黑色素瘤中的表達(dá)及其作用
        (四) bFGF在黑色素瘤中的表達(dá)及其作用
        (五) 抗血管生成因子的黑色素瘤治療
第二章 引言
    一、研究背景和立題依據(jù)
    二、本文的研究內(nèi)容和意義
第三章 實(shí)驗(yàn)材料與方法
    一、實(shí)驗(yàn)材料
        (一) 細(xì)胞和質(zhì)粒
        (二) 主要試劑
        (三) 主要儀器
    二、實(shí)驗(yàn)方法
        (一) 大量制備質(zhì)粒的方法
        (二) 哺乳動物細(xì)胞培養(yǎng)
        (三) 哺乳動物細(xì)胞轉(zhuǎn)染
        (四) 哺乳動物細(xì)胞基因組的提取
        (五) 哺乳動物細(xì)胞總RNA的提取
        (六) 逆轉(zhuǎn)錄PCR (RT-PCR)
        (七) 酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)
        (八) SDS-PAGE 電泳及Western Blotting
        (九) 免疫熒光
        (十) 免疫膠體金透射電鏡
        (十一) MTT法
第四章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析
    一、穩(wěn)定轉(zhuǎn)染血管生成素基因的細(xì)胞株的獲得
        (一) 質(zhì)粒的制備及電穿孔轉(zhuǎn)染與篩選
        (二) 陽性細(xì)胞克隆的鑒定
    二、外源血管生成素基因的轉(zhuǎn)入對細(xì)胞內(nèi)源血管生成素表達(dá)的影響
        (一) 外源血管生成素基因的轉(zhuǎn)入對細(xì)胞內(nèi)源血管生成素m RNA 表達(dá)的影響
        (二) 外源血管生成素基因的轉(zhuǎn)入對細(xì)胞內(nèi)源血管生成素蛋白表達(dá)的影響
    三、血管生成素對A375 細(xì)胞生長的影響
        (一) MTT 法實(shí)驗(yàn)條件的確定
        (二) 血管生成素對細(xì)胞增殖的影響
    四、血管生成素在A375 細(xì)胞中進(jìn)行核轉(zhuǎn)移作用
        (一) 血管生成素核轉(zhuǎn)移作用的免疫熒光分析
        (二) 免疫電鏡分析血管生成素在細(xì)胞核中的定位
    五、新霉素對A375 細(xì)胞的增殖具有抑制作用
        (一) 新霉素抑制血管生成素在A375 細(xì)胞中的核轉(zhuǎn)移作用
        (二) 新霉素抑制A375 細(xì)胞的增殖
    六、血管生成素對bFGF 表達(dá)的影響
        (一) 外源血管生成素基因的轉(zhuǎn)入對細(xì)胞bFGF mRNA 表達(dá)的影響
        (二) 外源血管生成素基因的轉(zhuǎn)入對細(xì)胞bFGF 蛋白表達(dá)的影響
    七、血管生成素對bFGF 誘發(fā)的細(xì)胞增殖的作用
第五章 討論
    一、外源血管生成素基因的轉(zhuǎn)入影響細(xì)胞內(nèi)源血管生成素的表達(dá)
        (一) 穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞系的建立
        (二) 外源血管生成素基因的轉(zhuǎn)入影響細(xì)胞內(nèi)源血管生成素的表達(dá)
    二、血管生成素對A375 細(xì)胞的增殖具有促進(jìn)作用
    三、血管生成素通過核轉(zhuǎn)移作用促進(jìn)A375 細(xì)胞的增殖
        (一) 血管生成素在A375 細(xì)胞中進(jìn)行核轉(zhuǎn)移作用
        (二) 新霉素抑制血管生成素在A375 細(xì)胞中的核轉(zhuǎn)移作用
        (三) 新霉素對A375 細(xì)胞的增殖具有抑制作用
    四、血管生成素對bFGF 表達(dá)具有負(fù)調(diào)節(jié)的作用
    五、血管生成素對bFGF 誘發(fā)的細(xì)胞增殖具有促進(jìn)作用
結(jié)論與創(chuàng)新點(diǎn)
參考文獻(xiàn)
在學(xué)期間公開發(fā)表論文及著作情況
在讀期間參加科研項(xiàng)目情況



本文編號：3860338