目的：研究重組質(zhì)粒pEGFP-N1-IL-24基因?qū)谏亓鯞16細(xì)胞小鼠移植瘤的抑制作用及作用機(jī)制。 方法： 取6周齡C57BL/6小鼠,于背部注射5×106cell/mL黑色素瘤B16細(xì)胞懸液0.2mL。將構(gòu)建成功的黑色素瘤B16細(xì)胞小鼠模型,隨機(jī)分為3組,分別向瘤體內(nèi)注射脂質(zhì)體包裹的基因重組質(zhì)粒pEGFP-N1-IL-24(實(shí)驗(yàn)組),pEGFP-NI(陰性對(duì)照組)和PBS緩沖液(陰性對(duì)照組)。共注射4次,每3d注射一次。最后一次注射7d后,處死小鼠,取腫瘤組織。每只小鼠腫瘤組織分成3份,分別應(yīng)用HE染色對(duì)腫瘤組織形態(tài)進(jìn)行觀察,RT-PCR法測(cè)定移植瘤中Bax,Bcl-2和VEGF三種mRNA的表達(dá),Western Blot;方法研究腫瘤細(xì)胞凋亡情況。其中RT-PCR與Western Blot方法所測(cè)定的結(jié)果,各mRNA和蛋白的表達(dá)量均用灰度值表示,并且通過內(nèi)參的灰度值進(jìn)行校正,以相對(duì)灰度值進(jìn)行體現(xiàn)。數(shù)據(jù)用SPSS19.0進(jìn)行分析,結(jié)果用x士s表示。 結(jié)果： 1.在小鼠接種黑色素瘤B16細(xì)胞后,約12d接種背部均產(chǎn)生0.05cm左右的瘤體,證明造模成功。 2.經(jīng)HE染色發(fā)現(xiàn)實(shí)驗(yàn)組腫...

【文章頁數(shù)】：55 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
縮略語表
第一章 前言
第二章 實(shí)驗(yàn)材料
    2.1 主要實(shí)驗(yàn)材料
    2.2 實(shí)驗(yàn)試劑
    2.3 實(shí)驗(yàn)耗材和儀器
        2.3.1 實(shí)驗(yàn)耗材
        2.3.2 實(shí)驗(yàn)儀器
    2.4 培養(yǎng)基和溶液的配制
        2.4.1 培養(yǎng)基的配制
        2.4.2 溶液的配制
第三章 實(shí)驗(yàn)方法
    3.1 質(zhì)粒DNA的制備
        3.1.1 菌種E.coli的復(fù)蘇和擴(kuò)大培養(yǎng)
        3.1.2 質(zhì)粒DNA的大量提取
    3.2 黑色素瘤B16細(xì)胞的培養(yǎng)
        3.2.1 B16細(xì)胞的復(fù)蘇
        3.2.2 細(xì)胞的換液與傳代
        3.2.3 B16細(xì)胞計(jì)數(shù)方法
        3.2.4 細(xì)胞凍存
    3.3 移植瘤小鼠模型的建立
    3.4 石蠟切片的制作與HE染色
        3.4.1 石蠟切片的制作
        3.4.2 HE染色
    3.5 RT-PCR(逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng))法鑒定Bax,Bcl-2,VEGF的表達(dá)
        3.5.1 腫瘤細(xì)胞總RNA的提取
        3.5.2 RNA純度測(cè)定
        3.5.3 逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA
        3.5.4 引物設(shè)計(jì)
        3.5.5 PCR擴(kuò)增反應(yīng)
        3.5.6 擴(kuò)增產(chǎn)物電泳分析
    3.6 Western Blot檢測(cè)Bax,Bcl-2,VEGF蛋白的表達(dá)
        3.6.1 收集蛋白樣本
        3.6.2 SDS-PAGE(聚丙烯酰胺凝膠)電泳
    3.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
第四章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    4.1 小鼠移植瘤模型的成功建立及3組腫瘤的HE染色
    4.2 RT-PCR檢測(cè)IL-24對(duì)3組腫瘤組織中Bax,Bcl-2,VEGF mRNA表達(dá)的影響
    4.3 Western Blot檢測(cè)IL-24對(duì)3組腫瘤組織中Bax,Bcl-2,VEGF蛋白表達(dá)的影響
第五章 討論
第六章 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
綜述
    參考文獻(xiàn)



本文編號(hào)：3859378