目的:目前國內(nèi)對金黃色葡萄球菌(金葡菌)侵染人角質(zhì)形成細胞的研究多集中在抗菌肽對金葡菌的抑制與殺傷作用等方面,而對染菌角質(zhì)形成細胞產(chǎn)生的Toll樣受體與β-防御素的相關(guān)研究較少。本實驗通過建立金葡菌侵染人角質(zhì)形成細胞(HaCaT細胞)的體外模型,來觀察金葡菌對HaCaT細胞活力的影響,檢測染菌細胞內(nèi)Toll樣受體2(TLR2)和β-防御素-3(hBD-3)的表達變化,初步探討TLR2及hBD-3的免疫機制,來揭示皮膚感染金葡菌后的發(fā)病機制。方法:將HaCaT細胞培養(yǎng)到80%融合時,用0.25%胰酶消化,加入培養(yǎng)液重懸,細胞計數(shù),調(diào)整細胞濃度為0.5×10⁴/ml進行接種;將金葡菌接種于平板,培養(yǎng)24h,拍照觀察其生長狀況,挑取單菌落接種于液體培養(yǎng)基,16¹8h后收集菌體用培養(yǎng)基重懸,于分光光度計660nm處測定菌液OD值,算出菌液濃度(0.8004×10⁹CFU/ml)。實驗設(shè)空白對照組和MOI(感染復(fù)數(shù)=細菌量∶細胞量)分別為1∶20、1∶10、1∶1、3∶1、10∶1、20∶1、50∶1、100∶1和200∶1的九個...

【文章頁數(shù)】：50 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
引言
材料與方法
    1.主要材料及試劑
        1.1 主要儀器
        1.2 主要試劑
        1.3 常用溶液配置
    2.方法
        2.1 HaCaT細胞培養(yǎng)
        2.2 金黃色葡萄球菌培養(yǎng)
        2.3 最適菌種濃度篩選
        2.4 金黃色葡萄球菌對角質(zhì)形成細胞中TLR2和hBD-3mRNA表達的影響
            2.4.1 實驗分組與處理
            2.4.2 RT-PCR檢測
                2.4.2.1 總RNA的提取
                2.4.2.2 RNA純度及濃度檢測
                2.4.2.3 RT-PCR檢測
                2.4.2.4 瓊脂糖凝膠電泳
            2.4.3 圖像及統(tǒng)計學(xué)分析
結(jié)果
    1.CCK8檢測結(jié)果
    2.圖像及統(tǒng)計學(xué)分析結(jié)果
        2.1 圖像分析結(jié)果
        2.2 統(tǒng)計學(xué)分析結(jié)果
討論
結(jié)論
參考文獻
綜述
    綜述參考文獻
攻讀學(xué)位期間的研究成果
縮略詞表(附錄)
致謝



本文編號：3761602