本文關(guān)鍵詞：靈芝多糖拮抗B16F10腫瘤上清對(duì)同基因小鼠脾淋巴細(xì)胞分泌IL-2、IFN-γ、TNF-α的抑制作用，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的： 黑素瘤是一種惡性程度極高的皮膚腫瘤,其發(fā)生與機(jī)體的免疫功能異常關(guān)系密切,而細(xì)胞因子在機(jī)體的免疫功能中的作用日益引起重視。IL-2、IFN-γ、TNF-α都具有廣泛的生物學(xué)活性,是機(jī)體細(xì)胞因子網(wǎng)絡(luò)中的重要成員,參與機(jī)體的免疫調(diào)節(jié),在機(jī)體抗病毒,抗腫瘤免疫中起著重要的作用。靈芝多糖(Ganoderma lucidum Polysaccharides Gl-PS)是靈芝的主要活性成分之一,具有多種藥理作用。目前關(guān)于靈芝多糖抗腫瘤機(jī)制的研究已有很多文獻(xiàn)資料報(bào)道,但其是否能夠拮抗B16F10腫瘤上清對(duì)同基因小鼠脾淋巴細(xì)胞分泌IL-2、IFN-γ、TNF-α的抑制作用,還有待直接證據(jù)加以確認(rèn)。本實(shí)驗(yàn)依據(jù)培養(yǎng)小鼠淋巴細(xì)胞的B16F10腫瘤上清中所含靈芝多糖濃度不同進(jìn)行分組,并以RPMI1640完全培養(yǎng)基為對(duì)照組,探討靈芝多糖拮抗B16F10腫瘤上清對(duì)同基因小鼠脾淋巴細(xì)胞分泌IL-2、IFN-γTNF-α的抑制作用。 方法： 1.細(xì)胞來源：本實(shí)驗(yàn)采用的B16F10細(xì)胞是一種來源于C57BL/6j小鼠的高轉(zhuǎn)移性黑素瘤細(xì)胞系。 2.實(shí)驗(yàn)分組及干預(yù)：實(shí)驗(yàn)依據(jù)培養(yǎng)小鼠淋巴細(xì)胞的B16F10腫瘤上清中所含靈芝多糖濃度不同進(jìn)行分組,設(shè)0μg/ml、0.2μg/ml、0.8μg/ml、3.2μg/ml、12.8μg/ml五個(gè)實(shí)驗(yàn)組,并以RPMI1640完全培養(yǎng)基為對(duì)照組。 3.采用免疫細(xì)胞化學(xué)染色方法,檢測(cè)各組細(xì)胞IL-2、IFN-γ、TNF-α蛋白的表達(dá)情況。 4.采用蛋白印跡(Western-blot)技術(shù),檢測(cè)各組細(xì)胞IL-2、IFN-γ、TNF-α在蛋白水平的表達(dá)差異。 5.采用RT-PCR技術(shù),檢測(cè)各組細(xì)胞IL-2、IFN-γ、TNF-α在基因轉(zhuǎn)錄水平的表達(dá)差異。 6.數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析：應(yīng)用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件,對(duì)結(jié)果進(jìn)行單因素方差分析,P0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)果： 1.靈芝多糖拮抗B16F10腫瘤上清對(duì)同基因小鼠淋巴細(xì)胞分泌IL-2的抑制作用：用免疫細(xì)胞化學(xué)染色檢測(cè)工L-2陽(yáng)性程度,腫瘤上清組遠(yuǎn)低于RPMI1640培養(yǎng)基對(duì)照組,隨著靈芝多糖濃度的增加,IL-2的陽(yáng)性信號(hào)逐漸升高；應(yīng)用蛋白印跡(Western-blot)技術(shù)檢測(cè),腫瘤上清組工L-2的表達(dá)量明顯低于RPMI1640培養(yǎng)基對(duì)照組(P0.05),且隨靈芝多糖濃度的增高而逐漸升高,呈現(xiàn)一定的劑量依賴關(guān)系,經(jīng)方差分析差異有顯著性(F=10.326,P0.01)。各靈芝多糖組分別與0u g/ml組比較差異均有顯著性(P0.05)；RT-PCR技術(shù)檢測(cè)顯示,IL-2mRNA的表達(dá)水平腫瘤上清組明顯低于RPMI1640培養(yǎng)基對(duì)照組(P0.05),隨靈芝多糖濃度的增高,IL-2mRNA表達(dá)水平逐漸升高,呈現(xiàn)一定的劑量依賴關(guān)系。經(jīng)方差分析,差異有顯著性(F=13.675,P0.01)。各靈芝多糖組分別與0u g/ml組比較除0.2μg/ml組外差異均有顯著性(P0.05) 2.靈芝多糖對(duì)B16F10腫瘤上清抑制同基因小鼠淋巴細(xì)胞分泌IFN-γ的拮抗作用：免疫細(xì)胞化學(xué)染色檢測(cè)顯示,IFN-γ陽(yáng)性程度,腫瘤上清組遠(yuǎn)低于RPMI1640培養(yǎng)基對(duì)照組,隨著腫瘤上清中靈芝多糖濃度的增加,陽(yáng)性信號(hào)逐漸升高；蛋白印跡(Western-blot)檢測(cè)顯示,腫瘤上清組IFN-γ的表達(dá)明顯低于RPMI1640培養(yǎng)基對(duì)照組(P0.05),隨靈芝多糖濃度的增高,IFN-γ表達(dá)量逐漸升高,呈現(xiàn)一定的劑量依賴關(guān)系,經(jīng)方差分析,差異有顯著性(F=5.171,P0.01),各靈芝多糖組分別與0μg/ml組比較,12.8μ g/ml組差異有顯著性(P0.05)；RT-PCR技術(shù)檢測(cè)顯示,IFN-γ mRNA的表達(dá)水平腫瘤上清組明顯低于RPMI1640培養(yǎng)基對(duì)照組(P0.05),隨靈芝多糖濃度的增高,IFN-γ mRNA逐漸升高,呈現(xiàn)一定的劑量依賴關(guān)系,經(jīng)方差分析,差異有顯著性(F=13.240,P0.01)。各靈芝多糖組分別與0μg/ml組比較,除0.2μg/ml組外差異均有顯著性(P0.05)。 3.靈芝多糖對(duì)B16F10腫瘤上清抑制同基因小鼠淋巴細(xì)胞分泌TNF-α的拮抗作用：免疫細(xì)胞化學(xué)染色顯示,TNF-α日性程度,腫瘤上清組遠(yuǎn)低于RPMI1640培養(yǎng)基對(duì)照組,隨著靈芝多糖濃度的增加,TNF-α的陽(yáng)性程度逐漸升高；應(yīng)用蛋白印跡(Western-blot)技術(shù)檢測(cè),腫瘤上清組TNF-α的表達(dá)明顯低于RPMI1640培養(yǎng)基對(duì)照組(P0.05),隨靈芝多糖濃度的增高,TNF-α表達(dá)量逐漸升高,呈現(xiàn)一定的劑量依賴關(guān)系,經(jīng)方差分析,差異有顯著性(F=5.143,P0.01),各靈芝多糖組分別與0μg/ml組比較,除0.2μg/ml、0.8μg/ml組差異均有顯著性(P0.05)；RT-PCR技術(shù)檢測(cè)顯示,TNF-α mRNA的表達(dá)水平腫瘤上清組明顯低于RPMI1640培養(yǎng)基對(duì)照組(P0.05),隨靈芝多糖濃度的增高,TNF-α mRNA逐漸升高,呈現(xiàn)一定的劑量依賴關(guān)系,經(jīng)方差分析,差異有顯著性(F=8.143,P0.01)。各靈芝多糖組分別與0μg/ml組比較,除0.8μg/ml組外差異均有顯著性(P0.05)。 結(jié)論： 1.B16F10黑素瘤細(xì)胞培養(yǎng)上清可抑制小鼠淋巴細(xì)胞分泌IL-2、IFN-γ、TNF-α。 2.靈芝多糖可拮抗B16F10腫瘤上清對(duì)同基因小鼠淋巴細(xì)胞分泌IL-2、IFN-γ、TNF-α的抑制作用。
【關(guān)鍵詞】：靈芝多糖 拮抗 黑素瘤 工L-2 IFN-γ TNF-α
【學(xué)位授予單位】：承德醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R739.5
【目錄】：

• 摘要6-9
• ABSTRACT9-13
• 英文縮寫13-14
• 前言14-16
• 材料與方法16-31
• 結(jié)果31-34
• 附圖34-47
• 附表47-48
• 討論48-52
• 結(jié)論52-53
• 參考文獻(xiàn)53-57
• 綜述57-65
• 參考文獻(xiàn)62-65
• 致謝65-66
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷66

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前5條

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5 崔o，

本文編號(hào)：375513