目的對(duì)絲氨酸水解酶家族1（FSH1）蛋白在犬小孢子菌中進(jìn)行亞細(xì)胞定位分析。方法以前期構(gòu)建的犬小孢子菌FSH1質(zhì)粒及載體pCAMBIA-LRP-增強(qiáng)型綠色熒光蛋白（EGFP）為模板, PCR擴(kuò)增FSH1基因及EGFP基因;同時(shí)利用SnaBI/KpnI對(duì)pCAMBIA-LRP-EGFP質(zhì)粒雙酶切獲得載體DNA, 將擴(kuò)增的EGFP基因克隆至酶切好的載體DNA中獲得EGFP表達(dá)載體;將擴(kuò)增的FSH1基因及EGFP基因克隆至酶切好的載體DNA中獲得融合載體Ptrcp-FSH1-EGFP-Ttrcp。通過根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)的遺傳轉(zhuǎn)化方法, 用重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化犬小孢子菌, 使融合基因FSH1-EGFP在真菌通用啟動(dòng)子（Ptrpc）和終止子（Ttrpc）調(diào)控下在犬小孢子菌中整合型表達(dá), 利用激光共聚焦顯微鏡觀察融合蛋白的細(xì)胞定位。結(jié)果成功構(gòu)建根癌農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化系統(tǒng)及犬小孢子菌EGFP表達(dá)載體;融合基因FSH1-EGFP在犬小孢子菌中獲得整合型表達(dá)。激光共聚焦顯微鏡顯示FSH1-EGFP融合蛋白的熒光信號(hào)呈顆粒狀或團(tuán)塊狀集中于犬小孢子菌的細(xì)胞質(zhì)及細(xì)胞核中。結(jié)論 FSH1-EGFP融合蛋白成功定位于犬小孢子菌的細(xì)胞質(zhì)... 

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【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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