目的對絲氨酸水解酶家族1（FSH1）蛋白在犬小孢子菌中進行亞細胞定位分析。方法以前期構(gòu)建的犬小孢子菌FSH1質(zhì)粒及載體pCAMBIA-LRP-增強型綠色熒光蛋白（EGFP）為模板, PCR擴增FSH1基因及EGFP基因;同時利用SnaBI/KpnI對pCAMBIA-LRP-EGFP質(zhì)粒雙酶切獲得載體DNA, 將擴增的EGFP基因克隆至酶切好的載體DNA中獲得EGFP表達載體;將擴增的FSH1基因及EGFP基因克隆至酶切好的載體DNA中獲得融合載體Ptrcp-FSH1-EGFP-Ttrcp。通過根癌農(nóng)桿菌介導的遺傳轉(zhuǎn)化方法, 用重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化犬小孢子菌, 使融合基因FSH1-EGFP在真菌通用啟動子（Ptrpc）和終止子（Ttrpc）調(diào)控下在犬小孢子菌中整合型表達, 利用激光共聚焦顯微鏡觀察融合蛋白的細胞定位。結(jié)果成功構(gòu)建根癌農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化系統(tǒng)及犬小孢子菌EGFP表達載體;融合基因FSH1-EGFP在犬小孢子菌中獲得整合型表達。激光共聚焦顯微鏡顯示FSH1-EGFP融合蛋白的熒光信號呈顆粒狀或團塊狀集中于犬小孢子菌的細胞質(zhì)及細胞核中。結(jié)論 FSH1-EGFP融合蛋白成功定位于犬小孢子菌的細胞質(zhì)... 

【文章頁數(shù)】：6 頁

【參考文獻】：
期刊論文
[1]杭州某醫(yī)院2015—2017年頭癬病原菌分析[J]. 智慧林,夏修蛟,劉澤虎,沈宏,許愛娥.  中華皮膚科雜志. 2019 (03)
[2]犬小孢子菌絲氨酸水解酶FSH1全長cDNA的克隆及序列分析[J]. 張芙蓉,徐宇,劉洋,楊國玲.  中國皮膚性病學雜志. 2017(01)
[3]兒童頭皮與包皮組織誘導前后犬小孢子菌FSH1的表達[J]. 祝逸平,張振穎,龐娟,楊國玲.  中華皮膚科雜志. 2011 (06)
[4]犬小孢子菌在光滑皮膚和頭皮組織誘導條件下差異表達基因分析[J]. 張淵,張振穎,楊國玲,金禮吉.  中國皮膚性病學雜志. 2009(12)



本文編號：3651568