目的:惡性腫瘤的進展往往伴隨著轉移,特別是肺轉移,其頻率及相關的死亡率很高,但腫瘤細胞是如何向肺部定植并轉移的仍然不清楚。我們在之前的研究中發(fā)現(xiàn)來自腫瘤細胞的微顆粒（microparticles,MPs）在腫瘤的轉移過程中發(fā)揮了一定作用,但是具體機制未知。因此,我們將在本文探討黑色素瘤通過微顆粒向肺部轉移的機制。方法:（1）提取B16-F10、4T-1和LLC細胞微顆粒,用NS300納米粒度儀檢測微顆粒的粒徑分布。（2）為研究B16-F10細胞微顆粒處理對黑色素瘤肺轉移有無促進作用,用PBS或B16-F10微顆粒尾靜脈注射處理B16-F10黑色素瘤荷瘤小鼠21天,HE染色比較肺轉移情況。（3）為探究巨噬細胞是否在B16-F10微顆粒促黑色素瘤肺轉移中發(fā)揮作用,將黑色素瘤小鼠用氯膦酸鹽脂質體（clodronate liposome,一種巨噬細胞清除劑）預處理三天后尾靜脈注射微顆粒的同時氯膦酸鹽脂質體處理21天,觀察腫瘤肺轉移情況。（4）用PKH-26染料標記的B16-F10細胞的微顆粒靜脈注射小鼠,24h后觀察微顆粒能否進入肺部并與巨噬細胞共定位;流式和熒光顯微鏡檢測B16-F10細胞微... 

【文章來源】：華中科技大學湖北省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

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【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

16-MPs能促進黑色素瘤肺轉移

五天后小鼠用 B16-F10 細胞微顆粒處理每隔一天一次一共三個星期，同時長出的黑色素瘤體積（圖 2A），發(fā)現(xiàn)注射了 B16-F10 微顆粒的小鼠的黑色素生長比對照組相比并沒有明顯變化，說明微顆粒對原發(fā)部位腫瘤生長速度沒響。于是我們將研究重點轉向了腫瘤轉移的肺部，肺部含有豐富的肺泡和間噬細胞，而巨噬細胞是腫瘤轉移前微環(huán)境中的主要細胞。有研究表明巨噬細腫瘤的轉移相關[22]。于是我們在小鼠腹側皮下接種 5×105的 B16-F10 細胞后，用巨噬細胞清除劑給一部分小鼠滴鼻清除小鼠肺部巨噬細胞，為便于操作小鼠麻醉后，通過鼻腔給與 60μl 的氯膦酸鹽脂質體，60μl 分為六次每次 1鼻以防止小鼠窒息，每天一次一共處理三天。然后給荷瘤小鼠尾靜脈注16-MPs，每次 50μg 隔天一次，共 10 次。同時每個星期兩次與之前操作相同氯膦酸鹽脂質體處理。三個星期后取小鼠肺臟我們發(fā)現(xiàn)注射 B16-F10 微顆粒鼠肺部的瘤結節(jié)明顯多于對照組，而氯膦酸鹽脂質體可以抑制轉移（圖 2B說明在微顆粒促進黑色素瘤肺轉移的過程中巨噬細胞必不可少。

包括 DNA,RNA,蛋白質等，一旦巨噬細胞吞噬微顆粒，物就有可能被釋放出來，對巨噬細胞產(chǎn)生影響。為了證明這H-26 標記的 B16-MPs 微顆粒注射小鼠后，取小鼠肺臟免疫記巨噬細胞，結果發(fā)現(xiàn)了巨噬細胞和微顆粒的共定位（圖 3胞會吞噬進入肺部的微顆粒。吞噬微顆粒后微顆粒可能會對響。我們用 B16-MPs 和脾細胞微顆粒通過尾靜脈處理小鼠，共 10 次，然后取小鼠肺臟，消化處理為單個細胞后用流式瘤部位除腫瘤細胞外還存在大量的免疫細胞，它們也會釋放影響我們使用了脾臟細胞提取的微顆粒做對照。通過流式發(fā)胞在 B16-F10 細胞微顆粒處理后明顯增多而在脾細胞微顆的變化(圖 3B)。然后我們將小鼠的肺臟用組織固定劑固定，80 標記巨噬細胞免疫熒光染色(圖 3C)，在共聚焦顯微鏡下觀


本文編號：3580012