目的:惡性腫瘤的進(jìn)展往往伴隨著轉(zhuǎn)移,特別是肺轉(zhuǎn)移,其頻率及相關(guān)的死亡率很高,但腫瘤細(xì)胞是如何向肺部定植并轉(zhuǎn)移的仍然不清楚。我們在之前的研究中發(fā)現(xiàn)來自腫瘤細(xì)胞的微顆粒（microparticles,MPs）在腫瘤的轉(zhuǎn)移過程中發(fā)揮了一定作用,但是具體機(jī)制未知。因此,我們將在本文探討黑色素瘤通過微顆粒向肺部轉(zhuǎn)移的機(jī)制。方法:（1）提取B16-F10、4T-1和LLC細(xì)胞微顆粒,用NS300納米粒度儀檢測微顆粒的粒徑分布。（2）為研究B16-F10細(xì)胞微顆粒處理對黑色素瘤肺轉(zhuǎn)移有無促進(jìn)作用,用PBS或B16-F10微顆粒尾靜脈注射處理B16-F10黑色素瘤荷瘤小鼠21天,HE染色比較肺轉(zhuǎn)移情況。（3）為探究巨噬細(xì)胞是否在B16-F10微顆粒促黑色素瘤肺轉(zhuǎn)移中發(fā)揮作用,將黑色素瘤小鼠用氯膦酸鹽脂質(zhì)體（clodronate liposome,一種巨噬細(xì)胞清除劑）預(yù)處理三天后尾靜脈注射微顆粒的同時氯膦酸鹽脂質(zhì)體處理21天,觀察腫瘤肺轉(zhuǎn)移情況。（4）用PKH-26染料標(biāo)記的B16-F10細(xì)胞的微顆粒靜脈注射小鼠,24h后觀察微顆粒能否進(jìn)入肺部并與巨噬細(xì)胞共定位;流式和熒光顯微鏡檢測B16-F10細(xì)胞微... 

【文章來源】：華中科技大學(xué)湖北省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：54 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

16-MPs能促進(jìn)黑色素瘤肺轉(zhuǎn)移

五天后小鼠用 B16-F10 細(xì)胞微顆粒處理每隔一天一次一共三個星期，同時長出的黑色素瘤體積（圖 2A），發(fā)現(xiàn)注射了 B16-F10 微顆粒的小鼠的黑色素生長比對照組相比并沒有明顯變化，說明微顆粒對原發(fā)部位腫瘤生長速度沒響。于是我們將研究重點(diǎn)轉(zhuǎn)向了腫瘤轉(zhuǎn)移的肺部，肺部含有豐富的肺泡和間噬細(xì)胞，而巨噬細(xì)胞是腫瘤轉(zhuǎn)移前微環(huán)境中的主要細(xì)胞。有研究表明巨噬細(xì)腫瘤的轉(zhuǎn)移相關(guān)[22]。于是我們在小鼠腹側(cè)皮下接種 5×105的 B16-F10 細(xì)胞后，用巨噬細(xì)胞清除劑給一部分小鼠滴鼻清除小鼠肺部巨噬細(xì)胞，為便于操作小鼠麻醉后，通過鼻腔給與 60μl 的氯膦酸鹽脂質(zhì)體，60μl 分為六次每次 1鼻以防止小鼠窒息，每天一次一共處理三天。然后給荷瘤小鼠尾靜脈注16-MPs，每次 50μg 隔天一次，共 10 次。同時每個星期兩次與之前操作相同氯膦酸鹽脂質(zhì)體處理。三個星期后取小鼠肺臟我們發(fā)現(xiàn)注射 B16-F10 微顆粒鼠肺部的瘤結(jié)節(jié)明顯多于對照組，而氯膦酸鹽脂質(zhì)體可以抑制轉(zhuǎn)移（圖 2B說明在微顆粒促進(jìn)黑色素瘤肺轉(zhuǎn)移的過程中巨噬細(xì)胞必不可少。

包括 DNA,RNA,蛋白質(zhì)等，一旦巨噬細(xì)胞吞噬微顆粒，物就有可能被釋放出來，對巨噬細(xì)胞產(chǎn)生影響。為了證明這H-26 標(biāo)記的 B16-MPs 微顆粒注射小鼠后，取小鼠肺臟免疫記巨噬細(xì)胞，結(jié)果發(fā)現(xiàn)了巨噬細(xì)胞和微顆粒的共定位（圖 3胞會吞噬進(jìn)入肺部的微顆粒。吞噬微顆粒后微顆�？赡軙䦟憽Ｎ覀冇� B16-MPs 和脾細(xì)胞微顆粒通過尾靜脈處理小鼠，共 10 次，然后取小鼠肺臟，消化處理為單個細(xì)胞后用流式瘤部位除腫瘤細(xì)胞外還存在大量的免疫細(xì)胞，它們也會釋放影響我們使用了脾臟細(xì)胞提取的微顆粒做對照。通過流式發(fā)胞在 B16-F10 細(xì)胞微顆粒處理后明顯增多而在脾細(xì)胞微顆的變化(圖 3B)。然后我們將小鼠的肺臟用組織固定劑固定，80 標(biāo)記巨噬細(xì)胞免疫熒光染色(圖 3C)，在共聚焦顯微鏡下觀


本文編號：3580012