研究背景及目的:白癜風(fēng)是由表皮黑素細(xì)胞減少或功能障礙引起的獲得性皮膚色素脫失癥,全球范圍內(nèi)的發(fā)病率為0.5%～1%,是引起皮膚色素脫失最常見的原因之一。白癜風(fēng)的發(fā)病機(jī)制目前尚不清楚,主要包括遺傳因素、自身免疫、神經(jīng)精神因素、微量元素缺乏等。作為損容性皮膚病的一種,白癜風(fēng)常伴發(fā)抑郁、焦慮等心理問題及社會適應(yīng)不良,嚴(yán)重影響患者生活質(zhì)量。目前白癜風(fēng)的治療主要以外用糖皮質(zhì)激素及紫外線光療為主,對于一些藥物抵抗的白癜風(fēng)類型,治療仍比較棘手。促進(jìn)皮損處殘存的黑素細(xì)胞合成黑素或補(bǔ)充正常黑素細(xì)胞是治療白癜風(fēng)的重要策略。黑素合成是酪氨酸在黑素細(xì)胞的黑素小體內(nèi)經(jīng)歷一系列化學(xué)反應(yīng)生成黑素多聚物,轉(zhuǎn)運(yùn)至周圍角質(zhì)形成細(xì)胞核表面,從而抵御細(xì)胞內(nèi)部及外界刺激的過程,是皮膚光保護(hù)和諸多色素性皮膚病發(fā)生的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。黑素合成主要受到來自體內(nèi)外多種因素的調(diào)節(jié),其中外部因素主要為紫外線等,內(nèi)部因素來自黑素細(xì)胞自身（包括酪氨酸酶及酪氨酸酶相關(guān)蛋白等）、周圍細(xì)胞（主要是角質(zhì)形成細(xì)胞）、內(nèi)分泌、神經(jīng)及免疫方面。調(diào)節(jié)黑素合成的信號通路包括c AMP/PKA（Cyclic Adenosine Monophosphate/Protein... 

【文章來源】：中國人民解放軍海軍軍醫(yī)大學(xué)上海市 211工程院校

【文章頁數(shù)】：72 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

黑素合成大致過程

小分子化合物I942對PIG1黑素細(xì)胞黑素合成功能的影響及機(jī)制研究-13-至周圍的角質(zhì)形成細(xì)胞，呈帽狀沉積在角質(zhì)形成細(xì)胞核表面，完成皮膚的色素沉著以保護(hù)細(xì)胞免受紫外線等有害因素的損傷[11]。同時，黑素細(xì)胞的生物學(xué)功能又反過來受到周圍細(xì)胞各種分泌因子的調(diào)節(jié)，這些來自角質(zhì)形成細(xì)胞、成纖維細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞等分泌的調(diào)節(jié)因子一同形成了黑素合成的旁分泌調(diào)節(jié)網(wǎng)絡(luò)[12]。角質(zhì)形成細(xì)胞是最為直接的調(diào)節(jié)成分，可通過分泌α-黑素細(xì)胞刺激素（α-Melanocytestimulatefactor,α-MSH）、干細(xì)胞生長因子（Stemcellfactor,SCF）、轉(zhuǎn)化生長因子β（Transforminggrowthfactorβ,TGF-β）等調(diào)節(jié)黑素合成[13]。EPAC下游的Rap蛋白參與了調(diào)節(jié)角質(zhì)形成細(xì)胞炎癥因子分泌的磷脂酶C通路[14]，近期的研究表明I942可通過EPAC1通路調(diào)節(jié)人臍帶血管內(nèi)皮細(xì)胞中多種炎癥因子基因的表達(dá)而參與炎癥反應(yīng)[15]，我們前期的研究表明，I942還可促進(jìn)角質(zhì)形成細(xì)胞角蛋白19的分泌及角質(zhì)形成細(xì)胞的遷移，我們猜想I942可能通過EPAC改變角質(zhì)形成細(xì)胞炎癥因子等分泌，進(jìn)一步影響黑素細(xì)胞的黑素合成。本課題中，我們擬對小分子化合物I942對PIG1黑素細(xì)胞黑素合成的影響及相關(guān)分子機(jī)制進(jìn)行研究。并使用小分子化合物I942處理HaCaT細(xì)胞，再通過HaCaT細(xì)胞培養(yǎng)液離心后的上層清夜培養(yǎng)PIG1黑素細(xì)胞的形式，研究I942通過角質(zhì)形成細(xì)胞對PIG1黑素細(xì)胞黑素合成功能的影響及相關(guān)的分子機(jī)制。從而探索小分子化合物I942用于白癜風(fēng)藥物治療及改進(jìn)現(xiàn)有黑素細(xì)胞體外培養(yǎng)技術(shù)的可能性。圖2小分子化合物I942化學(xué)結(jié)構(gòu)式及化學(xué)性質(zhì)Fig.2ConstitutionandpropertiesofsmallmolecularcompoundI942

小分子化合物I942對PIG1黑素細(xì)胞黑素合成功能的影響及機(jī)制研究-19-凋亡試驗，（3）CCK8法檢測細(xì)胞活力，從培養(yǎng)箱中取出待測孔板，無菌條件下向每孔加入19μlCCK-8試劑，繼續(xù)放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，約3~4h后，放入酶聯(lián)免疫檢測儀檢測各孔在波長為450nm處的光密度（OD）值。（三）統(tǒng)計學(xué)處理使用SPSS22.0軟件對CCK8試驗結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析，所獲取的數(shù)據(jù)表示為均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）。不同分組之間比較使用單因素方差分析，所有實驗至少重復(fù)3次，P<0.05為具有統(tǒng)計學(xué)意義。四、實驗結(jié)果（四）PIG1黑素細(xì)胞培養(yǎng)及鑒定采用多巴染色法對黑素細(xì)胞系PIG1進(jìn)行鑒定（見圖1.1），正常培養(yǎng)條件下處于對數(shù)生長期的PIG1黑素細(xì)胞中（圖1.1A），可見黑素細(xì)胞呈梭形或多角形貼壁生長，該視野中大部分細(xì)胞呈梭形，少數(shù)細(xì)胞呈多角形，多數(shù)細(xì)胞具有2~3個樹突，少數(shù)具有3個及多個樹突，胞質(zhì)內(nèi)部隱約可見淺棕色色素顆粒。將相同條件下的PIG1黑素細(xì)胞使用0.1%的多巴溶液進(jìn)行染色后（見圖1.1B），大約30min時，PIG1黑素細(xì)胞顏色開始逐漸變深，3~4h被完全染成棕黑色，圖示為多巴染色2h后的PIG1黑素細(xì)胞，可見大部分細(xì)胞呈現(xiàn)棕色，少數(shù)細(xì)胞呈深棕色及黑色。AB圖1.1PIG1黑素細(xì)胞的鑒定結(jié)果（20×）Fig1.1IdentificationofPIG1melanocytes（20×）.

【參考文獻(xiàn)】：
碩士論文
[1]江西地區(qū)兒童白癜風(fēng)及成人白癜風(fēng)的臨床特征分析[D]. 萬辰.南昌大學(xué) 2018



本文編號：3563064