目的在前期研究的基礎(chǔ)上進(jìn)一步驗(yàn)證miR-148a-3p通過促凋亡蛋白Bim對(duì)銀屑病發(fā)病機(jī)制中T細(xì)胞亞群分化的影響及相關(guān)免疫應(yīng)答機(jī)制的調(diào)控。方法培養(yǎng)人T淋巴白血病（Jurkat）細(xì)胞;Bim siRNA、miR-148a-3p mimics、miR-148a-3p inhibitor,分別電轉(zhuǎn)CD4⁺T細(xì)胞,RT-qPCR檢測(cè)miR-148a-3p和Bim mRNA,Western blot檢測(cè)Bim蛋白;通過ELISA檢測(cè)培養(yǎng)上清中細(xì)胞因子含量。結(jié)果 Bim siRNA、miR-148a-3p mimics、miR-148a-3p inhibitor分別電轉(zhuǎn)CD4⁺T細(xì)胞（Jurkat細(xì)胞）,電轉(zhuǎn)效率可達(dá)84.5%。與空白組相比,過表達(dá)的miR-148a-3p可有效抑制靶基因Bim mRNA及其蛋白的表達(dá),ELISA檢測(cè)培養(yǎng)上清中IFN-γ及IL-17均明顯升高,IL-4及IL-10均明顯降低（P均<0.05）;而抑制miR-148a-3p時(shí)Bim mRNA及其蛋白的表達(dá)升高,IFN-γ明顯減少（P均<0.05）,而IL-17表達(dá)... 

【文章來源】：中國(guó)皮膚性病學(xué)雜志. 2020,34(07)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：5 頁

【部分圖文】：

Western blot檢測(cè)Bim

為進(jìn)一步探索CD4+T細(xì)胞中miR-148a-3p對(duì)Bim的調(diào)控機(jī)制,本研究在Jurkat細(xì)胞中模擬miR-148a-3p的表達(dá)以進(jìn)一步觀察其在銀屑病發(fā)病機(jī)制中可能的作用。Jurkat細(xì)胞屬于急性T細(xì)胞白血病細(xì)胞系的一種懸浮細(xì)胞,通常用于研究T細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)以及易感病毒進(jìn)入的各種趨化因子受體,其比原代細(xì)胞繁殖速度快,易培養(yǎng)。但由于T細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率低下,本實(shí)驗(yàn)綜合各方面條件對(duì)比之后選擇電轉(zhuǎn),前期預(yù)實(shí)驗(yàn)通過Cy3-siRNA電轉(zhuǎn)Jurkat細(xì)胞效率檢測(cè)可達(dá)84.5%。本研究發(fā)現(xiàn),在正常CD4+T細(xì)胞中過表達(dá)miR-148a-3p時(shí),Bim mRNA及蛋白的表達(dá)水平顯著低于對(duì)照組,且Th1細(xì)胞相關(guān)因子IFN-γ及Th17相關(guān)細(xì)胞因子IL-17均顯著升高,Th2細(xì)胞相關(guān)細(xì)胞因子IL-4及Treg相關(guān)細(xì)胞因子IL-10均明顯降低。在正常CD4+T細(xì)胞中沉默Bim的表達(dá),IFN-γ及IL-17亦顯著升高。而在CD4+T細(xì)胞中抑制miR-148a-3p的表達(dá)時(shí)Bim mRNA及蛋白的表達(dá)水平明顯上調(diào),同時(shí)IFN-γ明顯降低,IL-4及IL-10均明顯升高。這說明在銀屑病患者中高表達(dá)的miR-148a-3p可導(dǎo)致Th1、Th17細(xì)胞異�；罨�,Th2細(xì)胞活化及Treg細(xì)胞免疫抑制功能減弱,抑制其表達(dá)可有效控制Th1過度活化并提高Treg細(xì)胞的免疫抑制功能,這進(jìn)一步證實(shí)miR-148a-3p可能作為治療銀屑病的新靶點(diǎn),為后續(xù)miR-148a-3p靶向干預(yù)尋常性銀屑病病情提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

與mimic NC組相比,miR-148a-3p mimics組CD4+T細(xì)胞分泌的IFN-γ和IL-17顯著升高(t=-12.03,-10.7;P<0.05);與無關(guān)對(duì)照(scr-siRNA)組相比,Bim siRNA組CD4+T細(xì)胞分泌的IFN-γ和IL-17也顯著升高(t=-9.91,-7.92;P<0.05)。而與mimic NC組相比,miR-148a-3p mimics組IL-10及IL-4的表達(dá)水平顯著下降(t=13.76,16.07;P<0.05);與無關(guān)對(duì)照(scr-siRNA)組相比,Bim siRNA組與NC組相比,IL-10及IL-4的表達(dá)水平也顯著下降(t=17.15,10.02;P<0.05)。與inhibitor NC組相比,miR-148a-3p inhibitor組的IFN-γ表達(dá)顯著下降(t=10.77,P<0.01),IL-17表達(dá)水平下降但不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,IL-10及IL-4的表達(dá)水平顯著升高(t=-10.66,-30.19;P<0.01),見圖5。圖2 miR-148a-3p的變化對(duì)miR-148a-3p()、Bim mRNA()的表達(dá)水平影響


本文編號(hào)：3369819