目的探討粒細(xì)胞單核巨噬細(xì)胞集落刺激因子（GM-CSF）對人皮膚成纖維細(xì)胞表達(dá)基質(zhì)金屬蛋白酶2和基質(zhì)金屬蛋白酶9（MMP2/MMP9）的影響及其相關(guān)機(jī)制。方法 ELISA法和明膠酶譜檢測不同GM-CSF濃度（0、10、50、100和500 ng/m L）刺激下成纖維細(xì)胞上清液內(nèi)MMP2/MMP9的濃度及活性;Western blotting和real-time PCR分別用于檢測GM-CSF或SP600125+GM-CSF處理組成纖維細(xì)胞后MMP2/MMP9/JNK/p-JNK/c-Jun/p-c-Jun的蛋白水平以及MMP2/MMP9的mRNA水平;ELISA法檢測GM-CSF或SP600125+GM-CSF處理成纖維細(xì)胞不同時(shí)間（6、12、24和48 h）后細(xì)胞上清內(nèi)MMP2/MMP9的濃度。結(jié)果 GM-CSF可以顯著誘導(dǎo)人皮膚成纖維細(xì)胞MMP2/MMP9的表達(dá)與分泌（P<0.05）,且分泌的MMP2/MMP9濃度及活性與GM-CSF濃度呈正相關(guān);GM-CSF處理成纖維細(xì)胞后,JNK及c-Jun蛋白的磷酸化水平和MMP2/MMP9的mRNA水平均高于對照組（P<0.05）... 

【文章來源】：上海交通大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版). 2015,35(07)北大核心CSCD

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不同濃度GM-CSF刺激下成纖維細(xì)胞上清內(nèi)MMP2和MMP9的濃度

?赴鸐MP2/MMP9的表達(dá)GM-CSF濃度(0、10、50、100和500ng/mL)刺激成纖維細(xì)胞24h，通過ELISA法檢測細(xì)胞上清內(nèi)MMP2/MMP9濃度，明膠酶譜法檢測MMP2/MMP9活性。不同GM-CSF濃度(0、10、50、100和500ng/mL)處理細(xì)胞后，MMP2及MMP9的濃度及活性均較0ng/mL增強(qiáng);隨GM-CSF濃度增高，MMP2/MMP9在成纖維細(xì)胞培養(yǎng)上清液內(nèi)的濃度及活性呈劑量依賴性增加(圖1、2)。圖1不同濃度GM-CSF刺激下成纖維細(xì)胞上清內(nèi)MMP2和MMP9的濃度Fig1ConcentrationsofMMP2andMMP9insupernatantoffibroblaststreatedbyCM-CSFofdifferentconcentrations圖2不同濃度GM-CSF刺激下成纖維細(xì)胞上清內(nèi)MMP2和MMP9的活性Fig2ActivityofMMP2andMMP9insupernatantoffibroblaststreatedbyCM-CSFofdifferentconcentrations2．1．2MMP2/MMP9的蛋白表達(dá)量用100ng/mL濃度的GM-CSF刺激人皮膚成纖維細(xì)胞，24h后細(xì)胞內(nèi)MMP2/MMP9的相對蛋白表達(dá)量與空白對照組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)(圖3)。2．2GM-CSF促進(jìn)成纖維細(xì)胞內(nèi)c-Jun和JNK蛋白的磷酸化且JNK是AP-1的上游信號GM-CSF處理后的成纖維細(xì)胞內(nèi)磷酸化JNK蛋白及磷酸化c-Jun蛋白的表達(dá)較空白對照組增強(qiáng)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，SP600125+GM-CSF組c-Jun的磷酸化被顯著抑制，與GM-CSF組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)(圖4)。注:A．Westernblotting法檢測MMP2/MMP9蛋白表達(dá);B．MMP2蛋白相對表達(dá)量;C．MMP9蛋白相對表達(dá)量。1．空白對照組;2．100ng/mLGM-CSF組。①P＜0.05與空白對照組比較。圖3GM-CSF處理后成纖維細(xì)胞MMP2和MMP9蛋白的表達(dá)Fig3ProteinexpressionsofMMP2andMMP9offibroblaststreatedbyCM-CSF注:A．Westernblotting法檢測JNK蛋白表達(dá);B．Westernblotting法檢測c-Jun蛋白表達(dá);C．磷酸化JNK蛋白相對表達(dá)量;D．磷?

白表達(dá)量與空白對照組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)(圖3)。2．2GM-CSF促進(jìn)成纖維細(xì)胞內(nèi)c-Jun和JNK蛋白的磷酸化且JNK是AP-1的上游信號GM-CSF處理后的成纖維細(xì)胞內(nèi)磷酸化JNK蛋白及磷酸化c-Jun蛋白的表達(dá)較空白對照組增強(qiáng)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，SP600125+GM-CSF組c-Jun的磷酸化被顯著抑制，與GM-CSF組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)(圖4)。注:A．Westernblotting法檢測MMP2/MMP9蛋白表達(dá);B．MMP2蛋白相對表達(dá)量;C．MMP9蛋白相對表達(dá)量。1．空白對照組;2．100ng/mLGM-CSF組。①P＜0.05與空白對照組比較。圖3GM-CSF處理后成纖維細(xì)胞MMP2和MMP9蛋白的表達(dá)Fig3ProteinexpressionsofMMP2andMMP9offibroblaststreatedbyCM-CSF注:A．Westernblotting法檢測JNK蛋白表達(dá);B．Westernblotting法檢測c-Jun蛋白表達(dá);C．磷酸化JNK蛋白相對表達(dá)量;D．磷酸化c-Jun蛋白相對表達(dá)量。1．空白對照組;2．GM-CSF組;3．SP600125+GM-CSF組。①P＜0.05與空白對照組比較;②P＜0.05與GM-CSF組比較。圖4GM-CSF處理后成纖維細(xì)胞p-JNK和p-c-Jun的表達(dá)Fig4Expressionsofp-JNKandp-c-JunoffibroblaststreatedbyCM-CSF·936·

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]ERK通路在單核巨噬細(xì)胞集落刺激因子調(diào)控成纖維細(xì)胞血管內(nèi)皮生長因子表達(dá)中的作用[J]. 李曉光,方勇,姚敏,胡孝輝,徐鵬,俞為榮.  上海交通大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版). 2010(11)



本文編號：3333926