目的:本研究基于IL-22介導(dǎo)的角質(zhì)形成細(xì)胞中miRNAs及mRNAs的差異表達(dá),在miRNA及mRNA表達(dá)譜芯片前期研究的基礎(chǔ)上,檢測miR-548a-3p對角質(zhì)形成細(xì)胞的生物學(xué)功能及其靶基因,進(jìn)而從表觀遺傳學(xué)角度進(jìn)一步探究IL-22誘導(dǎo)下microRNA對角質(zhì)形成細(xì)胞增殖作用的分子機(jī)制。方法:（1）將人永生化角質(zhì)形成細(xì)胞（HaCaT細(xì)胞株）分為實驗組和對照組,分別給予100 ng/ml的IL-22刺激24h和零刺激,實驗重復(fù)3次。而后使用RNAiso Plus試劑提取細(xì)胞總RNA,并檢測其濃度和純度,以確�？稍诖撕髮嶒炛惺褂�;（2）從表達(dá)譜芯片結(jié)果中選取某目標(biāo)差異miRNA,并選擇U6為內(nèi)參照,對此目標(biāo)差異miRNA的芯片結(jié)果,通過實時熒光定量PCR（RT-qPCR）法進(jìn)行驗證,以2-△△Ct法計算數(shù)據(jù)相對表達(dá)量,分別進(jìn)行3次獨立實驗;根據(jù)入選標(biāo)準(zhǔn),選擇6例尋常型銀屑病患者及6例正常人對照,分別對其皮損和皮膚組織樣本,采用RT-qPCR法進(jìn)行rniRNA的分子表達(dá)檢測,同樣用2-△△Ct法表示;（3）向HaCaT細(xì)胞中,分別加入模擬物、抑制物、模擬物和抑制物的陰性對照進(jìn)行轉(zhuǎn)染,并實... 

【文章來源】：山東大學(xué)山東省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：59 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖１：?ＲＴ－ｑＰＣＲ結(jié)果表明，ＩＬ－２２刺激ＨａＣａＴ細(xì)胞２４ｈ后可使ｍｉＲ－５４８ａ－３ｐ表達(dá)水??平顯著上調(diào)，明顯高于對照組（Ｐ＜〇．〇５）

圖２：?ＲＴ－ｑＰＣＲ結(jié)果也表明，可使６例尋常型銀屑病患者皮損中ｍｉＲ－５４８ａ－３ｐ表達(dá)??水平較６例正常對照顯著上調(diào)（Ｐ＜０．０５）

圖３：用ｍｉＲ－５４８ａ－３ｐ?ｍｉｍｉｃｓ和ｍｉｍｉｃｓ?ＮＣ轉(zhuǎn)染ＨａＣａＴ細(xì)胞，分別于轉(zhuǎn)染后２４ｈ、??４８ｈ、７２ｈ收集細(xì)胞，采用ｑＲＴ－ＰＣＲ法檢測ｍｉＲ－５４８ａ－３ｐ的表達(dá)情況，以驗證轉(zhuǎn)染??是否成功。結(jié)果表明，ｍｉｍｉｃｓ組ｍｉＲ－５４８ａ－３ｐ表達(dá)與轉(zhuǎn)染ｍｉｍｉｃｓ?ＮＣ組相比明顯增??加，其中４８ｈ時轉(zhuǎn)染效果最好（Ｐ＜０．０５）。??

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]銀屑病的流行病學(xué)與危險因素[J]. 張建中.  實用醫(yī)院臨床雜志. 2013(01)
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博士論文
[1]C/EBPα調(diào)控角質(zhì)形成細(xì)胞增殖和分化在尋常型銀屑病皮損形成中的作用[D]. 馬偉元.山東大學(xué) 2014

碩士論文
[1]miR-122-5p通過靶向Sprouty2在IL-22介導(dǎo)角質(zhì)形成細(xì)胞增殖中的作用[D]. 江萌.山東大學(xué) 2016



本文編號：3232776