本文關(guān)鍵詞：沙利度胺對(duì)體外培養(yǎng)的人正常真皮成纖維細(xì)胞增殖活性、膠原合成及MMP-1、TIMP-1表達(dá)的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的：真皮成纖維細(xì)胞是皮膚真皮層中最重要的細(xì)胞，它在分泌以及合成纖維和細(xì)胞外基質(zhì)（以膠原為主）中飾演重要角色，這對(duì)于正常真皮結(jié)締組織的構(gòu)成、皮膚創(chuàng)傷修復(fù)和真皮纖維化疾病等的發(fā)生具有極其重要的意義。皮膚纖維化是因?yàn)檎嫫こ衫w維細(xì)胞活動(dòng)反常致使以膠原蛋白為主要成分的細(xì)胞外基質(zhì)（extracellular matrix，ECM）在皮膚組織中過(guò)量堆積，很難被機(jī)體降解的異常增生現(xiàn)象。纖維化性疾病包括累及多種器官的疾病，例如間質(zhì)性肺纖維化、硬皮病、肝纖維化（肝硬化）、腎臟纖維化等，雖然它們的發(fā)病機(jī)制大多數(shù)不明以及臨床表現(xiàn)也各有不同，但它們有一個(gè)共同特點(diǎn)就是受損組織中細(xì)胞外基質(zhì)（以膠原為主）過(guò)度沉積。越來(lái)越多的研究證明沙利度胺具有抑制動(dòng)物纖維化模型或人肺、肝、心等器官纖維化的作用。如外文文獻(xiàn)研究報(bào)道[1]，沙利度胺可以通過(guò)抑制肺組織成纖維細(xì)胞的增殖以及減少膠原的合成，從而起到抑制小鼠肺間質(zhì)纖維化的作用。雖然近年來(lái)不斷有關(guān)于沙利度胺對(duì)動(dòng)物或人肺、滑膜、骨髓等成纖維細(xì)胞的研究報(bào)道，但沙利度胺對(duì)正常人皮膚成纖維細(xì)胞有什么樣影響尚未見(jiàn)報(bào)道。 本實(shí)驗(yàn)通過(guò)體外培養(yǎng)人正常真皮成纖維細(xì)胞，觀察沙利度胺對(duì)體外培養(yǎng)的人正常真皮成纖維細(xì)胞的增殖情況、膠原合成以及表達(dá)基質(zhì)金屬蛋白酶-1（MMP-1）、基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑-1（TIMP-1）的影響。目的在初步探討沙利度胺對(duì)人正常真皮成纖維細(xì)胞的作用機(jī)制，希望為其臨床應(yīng)用于皮膚纖維化性疾病的可能性以及更進(jìn)一步的研究提供可靠的理論依據(jù)。 方法： 1通過(guò)酶聯(lián)合消化法體外培養(yǎng)人正常真皮成纖維細(xì)胞，并利用免疫組化法對(duì)細(xì)胞進(jìn)行鑒定，取第五代細(xì)胞進(jìn)行試驗(yàn)。 2將不同濃度的沙利度胺加入體外培養(yǎng)的人正常真皮成纖維細(xì)胞，待沙利度胺作用24小時(shí)后，通過(guò)MTT比色法檢測(cè)不同濃度組沙利度胺(10-3～10-11mol/L，共9組)對(duì)人正常真皮成纖維細(xì)胞增殖活性的影響，然后篩查出沙利度胺對(duì)成纖維細(xì)胞作用的有效濃度，為后續(xù)實(shí)驗(yàn)分組所用。 3依據(jù)MTT結(jié)果分為實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組，通過(guò)堿水解法檢測(cè)沙利度胺作用24小時(shí)后人正常真皮成纖維細(xì)胞羥脯氨酸的含量，間接反應(yīng)膠原合成的情況。 4依據(jù)MTT結(jié)果分為實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組，通過(guò)熒光定量PCR法檢測(cè)沙利度胺對(duì)正常人真皮成纖維細(xì)胞表達(dá)MMP-1mRNA，TIMP-1mRNA的影響。 5統(tǒng)計(jì)學(xué)分析：采用SPSS15.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)首先經(jīng)正態(tài)性檢驗(yàn)，符合正態(tài)分布的可采用單因素方差分析，否則按照非參數(shù)檢驗(yàn)中的Mann-Whitney檢驗(yàn)，P＜0.05有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 6實(shí)驗(yàn)步驟嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。 結(jié)果： 1MTT結(jié)果顯示：沙利度胺在一定濃度（10-3～10-6mol/L）范圍內(nèi)能抑制成纖維細(xì)胞體外增殖，各濃度實(shí)驗(yàn)組分別與空白對(duì)照組相比均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），各實(shí)驗(yàn)組間兩兩比較，，其中10-3與10-4mol/L兩濃度組抑制最明顯，與其它兩組(10-5與10-6mol/L兩組)相比有顯著差異（P＜0.05）。而10-7～10-11mol/L5個(gè)濃度組與對(duì)照組相比雖有輕微變化，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。 2沙利度胺對(duì)人正常真皮成纖維細(xì)胞上清液中羥脯氨酸含量的影響： 沙利度胺在各個(gè)實(shí)驗(yàn)濃度（10-4、10-5、10-6、10-7mol/L）作用細(xì)胞24小時(shí)后，上清液中羥脯氨酸的含量較對(duì)照組均降低，經(jīng)方差分析各實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。其中10-4mol/L組羥脯氨酸含量最低，與其它實(shí)驗(yàn)組對(duì)比有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。 3PCR法檢測(cè)沙利度胺對(duì)人正常真皮成纖維細(xì)胞表達(dá)MMP-1mRNA的影響： 沙利度胺不同濃度實(shí)驗(yàn)組（10-4、10-5、10-6、10-7mol/L）處理成纖維細(xì)胞24小時(shí)后，MMP-1mRNA表達(dá)均有不同程度的升高，經(jīng)方差分析，各實(shí)驗(yàn)組分別與對(duì)照組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。且四個(gè)實(shí)驗(yàn)組兩兩分別比較，差異也具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。 4PCR法檢測(cè)沙利度胺對(duì)人正常真皮成纖維細(xì)胞表達(dá)TIMP-1mRNA的影響： 沙利度胺不同實(shí)驗(yàn)組（濃度分別為10-4、10-5、10-6、10-7mol/L）干預(yù)成纖維細(xì)胞24小時(shí)后，可見(jiàn)TIMP-1mRNA表達(dá)均有不同程度降低，經(jīng)方差分析，與對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。且各實(shí)驗(yàn)組之間兩兩對(duì)比差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。 結(jié)論： 1本研究證實(shí)沙利度胺在一定濃度范圍內(nèi)可以抑制人正常真皮成纖維細(xì)胞的增殖。 2沙利度胺在一定濃度范圍內(nèi)能夠抑制人正常真皮成纖維細(xì)胞膠原的合成。 3沙利度胺在一定濃度范圍內(nèi)能夠在mRNA水平上上調(diào)人正常真皮成纖維細(xì)胞中MMP-1表達(dá)以及抑制TIMP-1的表達(dá)。 4沙利度胺因其抑制人正常真皮成纖維細(xì)胞增殖活性、膠原合成、TIMP-1表達(dá)以及促進(jìn)MMP-1表達(dá)，為其應(yīng)用于皮膚纖維化性疾病的可能性以及更進(jìn)一步的研究提供可靠的理論依據(jù)。
【關(guān)鍵詞】：成纖維細(xì)胞 沙利度胺 細(xì)胞增殖 膠原合成 MMP-1、TIMP-1
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類(lèi)號(hào)】：R751
【目錄】：

• 摘要4-7
• ABSTRACT7-11
• 前言11-12
• 材料與方法12-22
• 結(jié)果22-25
• 附圖25-29
• 附表29-31
• 討論31-35
• 結(jié)論35
• 參考文獻(xiàn)35-39
• 綜述 沙利度胺與纖維化疾病39-52
• 參考文獻(xiàn)46-52
• 致謝52-53
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷53

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 楊浩,王春婷,吳玉梅,李靜雯,鞠躬;細(xì)胞特性狀態(tài)及細(xì)胞數(shù)與OD值的關(guān)系探討[J];動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展;2002年05期

2 王峙;趙麗丹;張p

本文編號(hào)：323257