TGF-β超家族分子在調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖、譜系分化、遷移、黏附和凋亡過程中具有重要作用。Smad4分子是TGF-β超家族分子信號(hào)通路的中心介導(dǎo)者。為了進(jìn)一步深入研究TGF-β超家族分子在皮膚發(fā)育過程中的功能,我們利用Cre-loxP系統(tǒng)研制了角質(zhì)細(xì)胞特異性Smad4剔除小鼠。 利用Southern Blot和ROSA26報(bào)告小鼠研究了角質(zhì)細(xì)胞特異性Cre重組酶（K5-Cre）轉(zhuǎn)基因小鼠中Cre重組酶表達(dá)的組織特異性。結(jié)果顯示,Cre重組酶表達(dá)于所有含有角質(zhì)細(xì)胞的組織中,表明角質(zhì)細(xì)胞特異性Cre重組酶轉(zhuǎn)基因小鼠可以作為在角質(zhì)細(xì)胞進(jìn)行基因剔除的工具小鼠。將該小鼠和Smad4條件基因打靶小鼠交配,得到角質(zhì)細(xì)胞特異性Smad4剔除小鼠。半定量RT-PCR結(jié)果顯示,在基因剔除小鼠的表皮幾乎檢測(cè)不到Smad4的轉(zhuǎn)錄本,說明K5-Cre介導(dǎo)的重組在角質(zhì)細(xì)胞中有效地阻斷了Smad4的表達(dá)。 Smad4剔除小鼠從出生后第20天開始進(jìn)行性毛發(fā)脫落。系統(tǒng)的組織病理學(xué)分析結(jié)果顯示Smad4剔除小鼠皮膚基底層明顯增厚、毛囊肥大且不能進(jìn)入退化期。TUNEL檢測(cè)結(jié)果顯示,Smad4剔除小鼠退化期角質(zhì)細(xì)胞不能發(fā)... 

【文章來源】：中國人民解放軍軍事科學(xué)院北京市

【文章頁數(shù)】：57 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
引言
    1.1 皮膚、毛囊結(jié)構(gòu)及毛囊周期循環(huán)
    1.2 TGF-β超家族分子信號(hào)傳導(dǎo)途徑
    1.3 TGF-β超家族分子在毛囊周期循環(huán)中的作用
    1.4 TGF-β與生長(zhǎng)控制
    1.5 TGF-β與凋亡
    1.6 TGF-β與腫瘤
        1.6.1 TGF-β在腫瘤發(fā)生過程中扮演兩種截然不同的角色
        1.6.2 腫瘤中TGF-β受體的突變
        1.6.3 腫瘤中Smad的突變
    1.7 研究的目的和意義
第一部分 角質(zhì)細(xì)胞特異性Smad4剔除小鼠的獲得
    1 材料和方法
        1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        1.2 小鼠基因組DNA的制備
        1.3 基因型鑒定
        1.4 LacZ染色
        1.5 石蠟包埋、切片及復(fù)染
        1.6 角質(zhì)細(xì)胞特異性Smad4剔除小鼠的獲得和基因型鑒定
        1.7 Southern Blot
        1.8 RT-PCR
    2 結(jié)果
        2.1 K5-Cre轉(zhuǎn)基因小鼠中Cre重組酶的表達(dá)分布
        2.2 角質(zhì)細(xì)胞特異性Smad4剔除小鼠的獲得
    3 討論
第二部分 角質(zhì)細(xì)胞特異性Smad4剔除小鼠脫毛并發(fā)生皮膚癌
    1 材料和方法
        1.1 HE染色和免疫組織化學(xué)
        1.2 BrdU摻入法檢測(cè)增殖
        1.3 普通原位雜交
    2 結(jié)果
        2.1 角質(zhì)細(xì)胞特異性Smad4剔除小鼠發(fā)生進(jìn)行性脫毛
        2.2 角質(zhì)細(xì)胞特異性Smad4剔除小鼠毛囊不能進(jìn)入退化期
        2.3 角質(zhì)細(xì)胞特異性Smad4剔除小鼠表皮和毛囊過度增生
        2.4 角質(zhì)細(xì)胞特異性Smad4剔除小鼠發(fā)生皮膚癌
    3 討論
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
在讀期間發(fā)表的論文
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]角質(zhì)細(xì)胞特異性表達(dá)Cre重組酶轉(zhuǎn)基因小鼠的建立[J]. 毛春明,楊曉,程萱,呂婭歆,周江,黃翠芬.  遺傳學(xué)報(bào). 2003(05)



本文編號(hào)：3160415