黑素瘤是惡性程度很高的皮膚腫瘤,預(yù)后不良,其發(fā)生機(jī)制目前仍不十分清楚。腫瘤抑制基因在黑素瘤的發(fā)生、發(fā)展中具有重要的作用。ING4基因是一種新的腫瘤抑制基因,其功能還不完全清楚。目前國(guó)內(nèi)外尚未見(jiàn)有關(guān)其與黑素瘤的研究報(bào)道。本研究旨在探討ING4在黑素瘤發(fā)病機(jī)制中的作用及機(jī)制。（1）ING4在黑素瘤組織中的表達(dá)經(jīng)免疫組化法檢測(cè)發(fā)現(xiàn),ING4在皮膚黑素瘤組織中的表達(dá)明顯下調(diào),與良性色素痣組織對(duì)比,差異有顯著性。（2）ING4重組表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建及細(xì)胞轉(zhuǎn)染通過(guò)RT-PCR法從人的正常組織獲得目的基因片斷,體外構(gòu)建真核表達(dá)載體pCDNA3.1-ING4,經(jīng)PCR及基因測(cè)序證實(shí)重組質(zhì)粒構(gòu)建正確。將其轉(zhuǎn)導(dǎo)入人黑素瘤細(xì)胞株M14,經(jīng)免疫細(xì)胞化學(xué)及蛋白印跡法證實(shí)轉(zhuǎn)染的外源ING4基因可高效表達(dá)ING4蛋白。（3）ING4對(duì)M14細(xì)胞生長(zhǎng)的影響經(jīng)MTT、流式細(xì)胞術(shù)及TUNEL法檢測(cè)發(fā)現(xiàn),轉(zhuǎn)染外源性ING4基因后,M14細(xì)胞的增殖明顯受抑,凋亡增加,并伴有G2/M期阻滯。此外蛋白印跡法還發(fā)現(xiàn),M14細(xì)胞呈現(xiàn)細(xì)胞周期調(diào)控蛋白表達(dá)的變化及凋亡通路的活化。（4）ING4對(duì)M14細(xì)胞侵襲能力的影響經(jīng)重組基底膜侵襲實(shí)驗(yàn)、... 

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【部分圖文】：

黑素瘤組織ING4表達(dá)的免疫組化染色光鏡圖像

penNA3.1一取G4構(gòu)建后，轉(zhuǎn)化入及eh。 riehiaeolinH5a進(jìn)行擴(kuò)增，提取nNA分別采用PCR法及DNA測(cè)序?qū)ζ溥M(jìn)行鑒定。經(jīng)PCR擴(kuò)增及瓊脂糖凝膠電泳后，在750bp處可見(jiàn)目的條帶(圖5)。DNA測(cè)序結(jié)果顯示得到的克隆基因序列與GenBank上已發(fā)表的人ING4序列 (GeneID:51147)一致。表明重組質(zhì)粒構(gòu)建成功。2弓0七p500匕p7印bp1000bp加!刃bp圖5可見(jiàn)重組質(zhì)粒重組質(zhì)粒pcDNA3.l一 ING4PCR擴(kuò)增產(chǎn)物的凝膠電泳分析pcDNA3.1一 ING4PcR擴(kuò)增產(chǎn)物在凝膠上電泳于約750bp處出現(xiàn)單一條帶::Marker;2:peDNA3.l一 INo4PeR擴(kuò)增產(chǎn)物

果RNA，經(jīng)RT.PCR法擴(kuò)增出來(lái)的產(chǎn)物，(約75obp)，大小與預(yù)期值相符(圖4)，在1%未見(jiàn)250bP500bP750bP 1000bP200叻P圖4從正常的人胃粘膜組織分離的ING4基因編碼序列Rl’ -PCR擴(kuò)增產(chǎn)物的凝膠電泳圖象可見(jiàn)RT-PcR擴(kuò)增產(chǎn)物在凝膠上電泳于約750bp處出現(xiàn)單一條帶:卜Marker;2:空泳道;3:RT-PCR擴(kuò)增產(chǎn)物2重組質(zhì)粒pCDNA3.l一INe4的鑒定 penNA3.1一取G4構(gòu)建后，轉(zhuǎn)化入及eh。 riehiaeolinH5a進(jìn)行擴(kuò)增，提取nNA分別采用PCR法及DNA測(cè)序?qū)ζ溥M(jìn)行鑒定。經(jīng)PCR擴(kuò)增及瓊脂糖凝膠電泳后，在750bp處可見(jiàn)目的條帶(圖5)。DNA測(cè)序結(jié)果顯示得到的克隆基因序列與GenBank上已發(fā)表的人ING4序列 (GeneID:51147)一致。表明重組質(zhì)粒構(gòu)建成功。2弓0七p500匕p7印bp1000bp加!刃bp圖5可見(jiàn)重組質(zhì)粒重組質(zhì)粒pcDNA3.l一 ING4PCR擴(kuò)增產(chǎn)物的凝膠電泳分析pcDNA3.1一 ING4PcR擴(kuò)增產(chǎn)物在凝膠上電泳于約750bp處出現(xiàn)單一條帶::Marker;2:peDNA3.l

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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