目的:研究達(dá)斡爾族IL-36Ra缺陷�。―ITRA）一家系中IL36RN的突變情況。方法:2例患者分別為48歲和51歲同胞兄弟,家族中無類似疾病患者。以168例健康漢族人作為對照組,采用聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）擴(kuò)增2例患者及其4例健康家族成員IL36RN基因的全部外顯子及其側(cè)翼序列并測序。結(jié)果:例1系嬰兒期發(fā)病,發(fā)病時(shí)皮疹泛發(fā)全身,病情重;例2系50歲發(fā)病,皮疹局限于軀干,病情較輕。2例患者均發(fā)生了IL36RN c.1 15+6T>C純合突變,4例健康家族成員該位點(diǎn)發(fā)生了雜合突變,168例對照組中有7例該位點(diǎn)發(fā)生雜合突變。結(jié)論:IL36RN c.115+6T>C純合突變可能是2例患者發(fā)生DITRA的原因。. 

【文章來源】：臨床皮膚科雜志. 2014,43(09)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：5 頁

【部分圖文】：

泛發(fā)性膿皰性銀屑病患者（n,)皮損及皮損組織病理像(HE染色）

534 臨床皮膚科雜志2014年43卷第9期JClinDermatol,September2014，Vol.43,No.9度，〉20ng/pL進(jìn)行PCR擴(kuò)增。體檢中心隨機(jī)抽取了168例無關(guān)健康漢族人外周血基因組DNA作為對照。 f：■1.2.2PCR擴(kuò)增及測序IL36RN來源于GenBank網(wǎng) 漂■站(NM_012275),用引物設(shè)計(jì)軟件PRIMER3對此基 25�！鲆蛉�5個(gè)外顯子及外顯子-內(nèi)含子交界區(qū)設(shè)計(jì)擴(kuò)增引物，共設(shè)計(jì)了7對引物（因外顯子5過大含2291個(gè) M:標(biāo)準(zhǔn)參照物;1~7:分別為第1~5.3號外顯子PCR擴(kuò)增產(chǎn)物堿基對故拆分為3部分分別設(shè)計(jì)引物）。引物由上海 圖4IL36RN1-5.3號外顯子PCR擴(kuò)增產(chǎn)物生工生物工程公司合成,合成量均為20D(表1)。以提 2%瓊脂糖凝膠電？永圖取外周血基因組DNA為模板，反應(yīng)體系總體積50|jlL,包括2xEasyTaqPCRSuperMix25|jlL,DNA4 aaag、ttggcgatpL,正向引物2|xL，反向引物2jjiL，ddH2017|xL0擴(kuò) ?增條件：94t預(yù)變性5min后,94t變性30s，60弋退火30s,72t延伸1min,共35個(gè)循環(huán)，72t延伸7min。2%瓊脂糖凝膠電泳檢測PCR產(chǎn)物，在紫外線燈 I ：：下觀察結(jié)果，在預(yù)計(jì)分子量位置出現(xiàn)條帶者確定為陽性結(jié)果。PCR擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)凝膠電泳回收純化后由上海 AAA(5JTTGGT/CGAT美吉生物公司完成DNA測序，對外顯子5.1、5.2和 @ (5.3擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行雙向測序,對所有發(fā)生IL36RN突變產(chǎn)物均進(jìn)行歡向測序。 !\丨；I'\. 口州曰z 一油口丨糾十幻um■防乂電 - -iL li'''■v表1IL36RN1~5?外顯子PCR擴(kuò)增引物序列及片段長度 AAAG6TTGGTGAT 外顯子 mi 產(chǎn)物大小(bp)1 上游引物(5’-3’）AGTGCTrCTGGCGACTTAGG276 ?下游引物(5’-3’）GGAGAGAGAGGCTGAGTTGG A.12 上游引物(5’-3’）CTGACCCCAGACCCAGAATC261 A M\：下游引物(5

3’）AGCTGGACAACGGGTCTATC II,\\II3 上游引物(5'-3')GTTACTTCTGGCACAGTAGG 392 I\j|....../{/\]\..下游引物(5’-3’）CACnTGCTGAGAGGTGTAG4 上游弓丨物(5’-3’）TCATGACAGCTGCTGAGAAG 386 A:患者II,和II2發(fā)生IL36RNc.115+6T>C純合突變；B:4例家族下游引物(5’-3’）AGCTGCCATCAACAGAATCC正常成員12、II3、n5、IE,及7例無關(guān)正常人對照中發(fā)生IL36RNc.5.1上游引物(5’-3’）AGATGCTGAGCCTACTGAAG950 115+6T>C雜合突變；C:161例無關(guān)正常人對照中未檢測到此突變下游引物(5’-3’）TCTGACATCAGCACCTCCTC 圖5泛發(fā)性膿抱性銀屑病患者及正常人5.2 上游引物(5’-3’）TAGAGTCAGGGATCTATGGC 940 IL36RN突變位點(diǎn)測序圖下游引物(5’-3')GTGTCCTCTCCTTTTCATAC5.3 上游引物(5，-3，）CAAATTCACATCCTTCTTGG 917下游引物(5’-3’）GGGTAAATGAAGGATAGTTG 3MTt根據(jù)II,及II2兩例臨床表現(xiàn)為泛發(fā)性水腫性紅“^ 斑基礎(chǔ)上發(fā)生膿皰,伴發(fā)熱、血沉快、C反應(yīng)蛋白升高所有引物在基因組DNA中均擴(kuò)增出預(yù)期長度的 等，其中一患者組織病理檢查見Kogoj膿腫，2例患者片段(圖4),產(chǎn)物純化后測序，將患者及家族中正常人 均符合GPP診斷;同時(shí)檢測發(fā)現(xiàn)IL36RNC.115+6T>C全部外顯子直接測序結(jié)果與UCSC網(wǎng)站（http:// 純合突變，故DITRA診斷成立。本家系符合常染色體genome.ucsc.edu/)所公布的序列進(jìn)行比對�；颊逫I,和 隱性遺傳病規(guī)律（圖1),進(jìn)一步支持DITRA診斷。H2IL36RN第3內(nèi)含子剪切位點(diǎn)發(fā)生1個(gè)純合突變， Farooq等[5征實(shí)c.l15+6T>C雜合突變可造成IL-36RN即IL36RNC.115+6T>C(圖5A)，反向測序亦證實(shí)此突 轉(zhuǎn)錄過程中外顯子3被異常剪切，導(dǎo)致外顯子2和外變。4例健康家族成員12、Ih、115和歷，發(fā)生IL36RN 顯子4直接拼接，從而發(fā)生移碼突?

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]白介素36與銀屑病[J]. 舒丹,蘇飛,晉紅中.  中華皮膚科雜志. 2013 (07)



本文編號：3122381