遺傳性對稱性色素異常癥（Dyschromatosis Symmetrica Hereditaria，DSH；MIM#127400）又稱Dohi對稱性肢端色素沉著，是一種常染色體顯性遺傳性皮膚病。在日本人中報道較多，我國也有病例發(fā)現(xiàn)。我們發(fā)現(xiàn)的4個家系癥狀與既往報道相符，主要表現(xiàn)為為兩側(cè)手足背有對稱性色素脫失斑和色素增加的褐黑色斑，部分病人可以向肢體近端發(fā)展延及前臂和小腿，腕、肘、膝關(guān)節(jié)也偶有累及，面部可有雀斑樣損害。疾病通常起自幼年，平均發(fā)病年齡為6歲。日曬后皮損加重，一般無自覺癥狀。國內(nèi)張學(xué)軍等首先將DSH致病基因定位于染色體1q11-q21，日本學(xué)者新近證明DSH是由該區(qū)ADAR基因突變所致。 ADAR是一種雙鏈RNA特異性腺苷酸脫氨酶，主要生物學(xué)功能包括RNA編輯和誘導(dǎo)蛋白質(zhì)在核內(nèi)的翻譯。它能夠作用于特定雙鏈RNA結(jié)構(gòu)和mRNA前體，將特殊位點上的腺苷（A）去氨基轉(zhuǎn)變?yōu)榇吸S嘌呤（I），導(dǎo)致雙鏈RNA結(jié)構(gòu)不穩(wěn)定及mRNA的降解。它廣泛參與胚胎發(fā)育、中樞神經(jīng)系統(tǒng)的神經(jīng)遞質(zhì)傳遞、造血系統(tǒng)的發(fā)育、機(jī)體的免疫及抗病毒等各種發(fā)育、生理及病理過程。ADAR基因全長約30kb，共有15個外... 

【文章來源】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院北京市 211工程院校 985工程院校

【文章頁數(shù)】：108 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
目錄
中文摘要
ABSTRACT
第一部分 遺傳性對稱性色素異常癥致病基因的定位研究
    前言
    材料與方法
        一、實驗材料
            1. 家系資料
            2. 主要材料、試劑及配制
            3. 主要儀器設(shè)備
        二、實驗方法
            1. 基因組 DNA的提取
            2. 短串聯(lián)重復(fù)序列的PCR擴(kuò)增
            3. 變性聚丙烯酞胺凝膠電泳及銀染
            4. STR等位片段的分析
            5. 兩點連鎖分析
            6. 確定連鎖標(biāo)記在物理圖譜中的位置
    實驗結(jié)果
        一、遺傳性對稱性色素異常癥家系臨床資料
        二、遺傳性對稱性色素異常癥致病基因的定位
            1. 個體的等位基因型
            2. 兩點連鎖分析
            3. 單體型的構(gòu)建
            4. 1號染色體微衛(wèi)星標(biāo)記在物理圖譜中的再定位
    討論
第二部分 遺傳性對稱性色素異常癥致病基因的突變研究
    前言
    材料與方法
        一、實驗材料
            1. 家系資料
            2. 主要材料與試劑
        二、實驗方法
            1. 外周血白細(xì)胞基因組DNA的提取
            2. ADAR基因全部外顯子區(qū)及內(nèi)含子-外顯子交界區(qū)的擴(kuò)增
            3. PCR擴(kuò)增產(chǎn)物的純化
            4. 純化結(jié)果的定量檢測
            5. 目的DNA片段測序
            6. DNA測序結(jié)果分析
            7. 4個家系中ADAR基因突變的酶切分析驗證
    實驗結(jié)果
        一、家系臨床資料
        二、4個DSH家系中ADAR基因突變分析
    討論
第三部分 遺傳性對稱性色素異常癥的遺傳學(xué)致病機(jī)制研究
    前言
    材料與方法
        一、外周血中單個核細(xì)胞的分離
        二、RNA的提取和反轉(zhuǎn)錄
        三、RT-PCR反應(yīng)
            1. 外顯子跳躍（exon skipping）的檢測
            2. cDNA水平的突變檢測
            3. 實時定量RT-PCR
    實驗結(jié)果
        一、RNA質(zhì)量鑒定
        二、外顯子跳躍的檢測
        三、基因組DNA與cDNA水平突變的比較
        四、患者單個核細(xì)胞中ADAR基因表達(dá)的相對定量
            1. 倍比稀釋實驗
            2. DSH患者ADAR基因相對表達(dá)量
    討論
        一、遺傳性對稱性色素異常癥的發(fā)病機(jī)制
        二、實時定量PCR的應(yīng)用和分析
第四部分 ADAR基因在UVB誘導(dǎo)人黑色瘤細(xì)胞凋亡過程中的作用分析
    前言
    材料與方法
        一、實驗材料
            1. 細(xì)胞系
            2. 菌株和質(zhì)粒
            3. 主要試劑及試劑盒
            4. 主要器皿和儀器
        二、實驗方法
            1. 質(zhì)粒的構(gòu)建與篩選
            2. 細(xì)胞培養(yǎng)
            3. 脂質(zhì)體介導(dǎo)的A375細(xì)胞轉(zhuǎn)染
            4. UVB處理轉(zhuǎn)染后A375細(xì)胞
            5. RNA干擾操作過程
            6. 轉(zhuǎn)導(dǎo)細(xì)胞的DNA結(jié)構(gòu)分析
            7. ADAR基因抑制效率檢測
            8. UVB處理誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡
            9. Western印跡
    實驗結(jié)果
        一、A375細(xì)胞中ADAR基因轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物的檢測
        二、ADAR蛋白的亞細(xì)胞定位
        三、ADAR蛋白在UVB處理的轉(zhuǎn)染后 A375細(xì)胞內(nèi)的定位
        四、逆轉(zhuǎn)錄病毒介導(dǎo)的ADAR基因特異性 RNA干擾質(zhì)粒的鑒定
        五、抗性細(xì)胞克隆庫形成
        六、實時定量 RT-PCR檢測 ADAR基因抑制效率
        七、UVB誘導(dǎo)對 ADAR基因抑制后細(xì)胞凋亡的影響
    討論
        一、ADAR蛋白的細(xì)胞定位
        二、ADAR基因表達(dá)抑制對UVB誘導(dǎo)A375細(xì)胞凋亡的影響
            1. 逆轉(zhuǎn)錄病毒載體介導(dǎo)的RNA干擾（RNA interference，RNAi）技術(shù)
            2. UVB誘導(dǎo)的A375-siADAR細(xì)胞凋亡研究
學(xué)位論文總結(jié)
參考文獻(xiàn)
文獻(xiàn)綜述
附錄一 英漢名詞對照及縮寫
附錄二 分析軟件及常用網(wǎng)址
個人簡歷
致謝



本文編號：2971863