目的:探討納秒脈沖電場(chǎng)（nsPEFs）消融惡性黑色素瘤對(duì)系統(tǒng)性免疫及T細(xì)胞殺傷能力的影響。方法:建立C57BL/6惡性黑色素移植瘤模型,經(jīng)過參數(shù)選擇,采用脈沖參數(shù)為電場(chǎng)峰值30 kV/cm、脈寬100 ns、頻率1 Hz、200個(gè)脈沖的nsPEFs電擊荷瘤小鼠,4天后處死小鼠,提取T淋巴細(xì)胞,CCK-8法檢測(cè)T淋巴細(xì)胞活性,流式細(xì)胞儀檢測(cè)CD3⁺CD4⁺T淋巴細(xì)胞、CD3⁺CD8⁺T淋巴細(xì)胞、抑制性T細(xì)胞（Treg）及髓源抑制性細(xì)胞（MDSC）的比例。眼眶采血,提取血清,ELISA法檢測(cè)外周血中TNF-α、IL-2、IL-10、TGF-β,IFN-γ等因子的含量。結(jié)果:黑色素瘤小鼠模型成瘤率100%,nsPEFs處理荷瘤小鼠后,腫瘤體積明顯減小,T淋巴細(xì)胞增殖。其中CD3⁺CD4⁺T淋巴細(xì)胞含量由48%增加至51.2%,CD3⁺CD8⁺T淋巴細(xì)胞含量由39.6%增加至40.4%。Treg細(xì)胞由4.3%減少至2.4... 

【文章來源】：蘭州大學(xué)甘肅省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：52 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

建立荷瘤小鼠模型AB16黑色素瘤細(xì)胞對(duì)數(shù)期顯微鏡下形態(tài)（40）B接種后7天C57小鼠腫瘤生長情況C處死解剖小鼠后腫瘤在皮下的分布狀況

100ns,200 次脈沖處理腫瘤，腫瘤的消融程度更大。A 脈沖裝置治療荷瘤小鼠示意圖 。B 成瘤 4 天后未經(jīng)治療的荷瘤小鼠腫瘤生長狀況 C 30KV,100ns,100 次脈沖治療荷瘤小鼠，4 天之后，腫瘤生長狀況。D 30KV,100ns,200 次脈沖治療荷瘤小鼠，4 天之后，腫瘤生長狀況。根據(jù)腫瘤消融面積顯示 30KV,100ns,200 次脈沖引起腫瘤的消融面積更大。在小鼠耐受范圍之內(nèi)，30KV,100ns,200 次脈沖治療惡性黑色素瘤效果最好。2.9.4 30 KV/cm 100 ns 200 次脈沖處理荷瘤小鼠后 T 淋巴細(xì)胞活性增加30 KV/cm 100 ns 200 次 nsPEFs 處理荷瘤小鼠 4 d 后，經(jīng)脾臟提取 T 淋巴細(xì)胞，細(xì)胞呈懸浮生長（圖 4）。培養(yǎng) 24 h、48 h 后，用 CCK-8 檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，處理組的 OD 值普遍較大。與未處理組相比，脈沖處理 T 淋巴細(xì)胞存活率分別增加 8%、10.2%(P<0.05)，提示經(jīng)過脈沖的治療，T 淋巴細(xì)胞增殖，脈沖處理腫瘤增強(qiáng)了機(jī)體的淋巴細(xì)胞的數(shù)量，招募到了更多免疫細(xì)胞，提高了細(xì)胞的免疫功能。

圖 4 荷瘤小鼠 T 淋巴細(xì)胞：從脾臟提取 T 淋巴細(xì)胞，顯微鏡觀察其形態(tài)。A 脈沖處理組小鼠（n=10）。B 荷瘤小鼠脾臟形態(tài) C 顯微鏡下 T 淋巴細(xì)胞形態(tài)（ 10）圖 5 脈沖電擊荷瘤小鼠后,腫瘤消融,T 淋巴細(xì)胞增殖。相比對(duì)照組，實(shí)驗(yàn)組 24hT 淋巴細(xì)胞存活率增加 8%（P＜0.05）, 48hT 淋巴細(xì)胞存活率增加 10.2% (P<0.05)。

【參考文獻(xiàn)】：
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