目的:惡性黑素瘤是一種高度惡性的皮膚腫瘤,其對常規(guī)化療藥物的耐藥性嚴重影響其預后,因而逆轉腫瘤細胞的耐藥性,以提高化療療效,是治療惡性黑素瘤的重要課題。目前認為惡性黑素瘤耐藥的主要機制是凋亡抑制,越來越多研究證實特異性下調(diào)某些凋亡抑制基因以促進腫瘤細胞凋亡,可以增加惡性黑素瘤對化療藥物的敏感性。WT1基因最早發(fā)現(xiàn)作為一種抑癌基因參與Wilm’s瘤的發(fā)生,近年來研究證實WT1基因在多種實體瘤細胞中高表達,具有抑制腫瘤細胞凋亡作用,發(fā)揮癌基因的作用。國外研究發(fā)現(xiàn)WT1基因在80%以上惡性黑素瘤中表達,而在良性色素痣和正常皮膚中未見表達,下調(diào)WT1基因可以抑制惡性黑素瘤細胞增殖,促進細胞凋亡。但抑制WT1基因表達能否逆轉惡性黑素瘤細胞的耐藥性尚未見報道。RNA干擾技術是近年來發(fā)展起來的基因沉默新技術,能高效,特異地抑制目的基因的表達,因此很快成為研究基因功能的重要工具。本研究旨在探討利用RNA干擾沉默WT1基因對人轉移性惡性黑素瘤WM451細胞生長,凋亡及其對順鉑敏感性的影響,為惡性黑素瘤的基因治療提供理論依據(jù)。方法:1.構建針對WT1基因的siRNA真核表達載體;2.利用脂質(zhì)體將siRNA... 

【文章來源】：大連醫(yī)科大學遼寧省

【文章頁數(shù)】：33 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

熒光顯微鏡顯示轉染W(wǎng)T1siRNA質(zhì)粒24h后成功轉染細胞

2.倒置顯微鏡觀察轉染前后細胞形態(tài)的變化：轉染前，細胞貼壁較好，呈扁平多角形，中間有圓形的核，核內(nèi)有一至多個核仁，轉染后24小時，細胞變圓，貼壁不佳，細胞突起消失（見圖2）。A:正常 WM451細胞 B:轉染 WT1siRNA質(zhì)粒的 WM541細胞圖2 倒置顯微鏡顯示轉染前后細胞形態(tài)的變化3． RT-PCR檢測 RNA干擾對 WM451細胞 WT1基因 mRNA的影響：細胞轉染48小時后，實驗組與空白對照組比較：實驗組WT1mRNA表達水平下降了67%，實驗組與陰性對照組比較：實驗組WT1mRNA表達水平下降了60%，空白對照組與陰性對照組之間未見顯著差異（見圖3）。

1 2 3 4檢測RNA 干擾對WM451細胞WT1基因mRNA arker 2 空白對照 3 陰性對照 4 試驗組ot檢測 RNA干擾對 WM451細胞 WT1蛋白表組比較：WT1蛋白表達水平下降了67%。蛋白表達水平下降了63%,空白對照組與陰見圖4）。1 2 3

【參考文獻】：
期刊論文
[1]WT1基因與惡性腫瘤靶向免疫治療[J]. 顧偉英,陳子興.  腫瘤. 2007(03)
[2]RNA干擾的研究方法[J]. 楊宗照,帥江冰,Mudasser Habib.  中國獸藥雜志. 2005(11)



本文編號：2913783