目的將樹枝狀聚合物聚酰胺-胺（PAMAM）包載可以表達具有抑制人惡性黑素瘤細(xì)胞A375增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移的miR-34a的質(zhì)粒sh-miR-34a,構(gòu)建聚陽離子納米復(fù)合物PAMAM/sh-miR-34a�？疾煨纬傻膹�(fù)合物的粒徑、zeta電位、細(xì)胞攝取,以及對A375細(xì)胞的抑制作用。方法利用粒度測定儀測定納米復(fù)合物的粒徑和電位,凝膠電泳實驗測定PAMAM對sh-miR-34a的包裹能力;利用羅丹明標(biāo)記的sh-miR-34a考察A375細(xì)胞對納米復(fù)合物的攝取;CCK8法測定PAMAM/shmiR-34a對A375細(xì)胞的抑制作用;Transwell法測定PAMAM/sh-miR-34a抑制A375細(xì)胞遷移和侵襲作用;蛋白質(zhì)印跡法測定PAMAM/sh-miR-34a對A375細(xì)胞中pAkt、pRb、pERK1/2蛋白表達的阻滯作用。結(jié)果 PAMAM包裹sh-miR-34a可形成穩(wěn)定的納米復(fù)合物,在N/P=20時,細(xì)胞對PAMAM/sh-miR-34a的攝取達最高（P<0.05）。PAMAM可以有效攜帶shmiR-34a進入A375細(xì)胞,體外抑制A375細(xì)胞的增殖、侵襲和遷移,并且可以阻滯A... 

【文章來源】：第二軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報. 2016年02期 第191-196頁 北大核心

【文章頁數(shù)】：6 頁

【文章目錄】：
1 材料和方法
    1.1主要儀器和試劑
    1.2 A375人黑素瘤細(xì)胞原代培養(yǎng)
    1.3 PAMAM/sh-miR-34a復(fù)合物的制備及粒徑和zeta電位測定
    1.4復(fù)合物凝膠電泳阻滯分析
    1.5熒光顯微鏡觀察A375細(xì)胞對PAMAM/sh-miR-34a復(fù)合物的攝取
    1.6流式細(xì)胞術(shù)檢測A375細(xì)胞對PAMAM/sh-miR-34a復(fù)合物的攝取
    1.7 CCK8法檢測PAMAM/sh-miR-34a納米復(fù)合物抗惡性黑素瘤細(xì)胞增殖效果
    1.8 PAMAM/sh-miR-34a復(fù)合物抑制A375細(xì)胞遷移和侵襲能力考察
    1.9蛋白質(zhì)印跡法檢測PAMAM/sh-miR-34a納米復(fù)合物對A375細(xì)胞中相關(guān)蛋白的抑制
    1.10統(tǒng)計學(xué)處理
2 結(jié)果
    2.1不同N/P值的PAMAM/sh-miR-34a復(fù)合物粒徑和zeta電位考察
    2.2復(fù)合物凝膠電泳阻滯分析結(jié)果
    2.3定性觀察和定量A375細(xì)胞對PAMAM/sh-miR-34a復(fù)合物的攝取
    2.4 PAMAM/sh-miR-34a復(fù)合物抗A375人黑素瘤細(xì)胞增殖效果
    2.5 PAMAM/sh-miR-34a復(fù)合物抑制A375細(xì)胞遷移
    2.6 PAMAM/sh-miR-34a復(fù)合物抑制A375細(xì)胞侵襲
    2.7 PAMAM/sh-miR-34a復(fù)合物對A375細(xì)胞中pAkt、pRb、pERK1/2蛋白抑制效果
3 討論


【參考文獻】：
期刊論文
[1]U0126對黑素瘤細(xì)胞A375侵襲的抑制作用[J]. 陳辦成,姚勇豐,楊媛慧,鐘綺麗,邵勇,張杰,葉庭路,胡小平,于波.  中國麻風(fēng)皮膚病雜志. 2013 (02)
[2]藥物載體PAMAM樹狀大分子的毒理[J]. 沈楠,朱宏.  材料導(dǎo)報. 2012(19)
[3]人乳腺癌細(xì)胞凋亡與去磷酸化RB蛋白的關(guān)系[J]. 歐陽學(xué)農(nóng),王文武,姜浩.  中國癌癥雜志. 2004(04)



本文編號：2906413