惡性黑素瘤是一種高度惡性的黑素細(xì)胞腫瘤,皮膚是其主要累及部位之一。皮膚惡性黑素瘤的發(fā)病率逐年增加,其死亡例數(shù)占所有皮膚腫瘤的80%。BAG-1是一種多功能蛋白,在多種腫瘤的發(fā)生、發(fā)展及放、化療治療反應(yīng)中有重要的生物學(xué)作用。但BAG-1蛋白在皮膚黑素瘤組織中的表達(dá)情況及其臨床意義尚未見報(bào)道,BAG-1在黑素瘤發(fā)生、發(fā)展中的具體作用及其機(jī)制更不清楚。目的探討B(tài)AG-1在皮膚黑素瘤的表達(dá)及其與臨床病理特征的相關(guān)性;RNAi抑制BAG-1基因表達(dá),研究其對(duì)小鼠黑素瘤B16F10細(xì)胞株的細(xì)胞周期、增殖、凋亡及多西紫杉醇治療反應(yīng)的影響。材料與方法第一部分:免疫組化檢測(cè)BAG-1、p53、Bcl-2在皮膚惡性黑素瘤、色素痣、正常人皮膚的表達(dá),結(jié)合患者臨床資料（性別、年齡、Clark分級(jí)等）進(jìn)行分析;檢測(cè)BAG-1在黑素瘤細(xì)胞株M14和B16F10細(xì)胞的表達(dá)。第二部分:以pRNAT-U6.1/Neo為載體,構(gòu)建重組shRNA質(zhì)粒pRNAT-U6.1/Neo-BAG-1-1、-2、-3,酶切及PCR測(cè)序鑒定;利用lipofectamin^TM 2000將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染小鼠黑素瘤B16F... 

【文章來源】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院北京市 211工程院校 985工程院校

【文章頁數(shù)】：84 頁

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

一a:陰性表達(dá);圖3一b:

BAG-1在人黑素瘤細(xì)胞株M14陽性表達(dá)(DAB顯1

限制性內(nèi)切酶BamHI、Hindlll酶切位點(diǎn)，報(bào)告基因eGFp及neom邪in、Ampieillin抗性標(biāo)記(圖l)。質(zhì)粒大小為6380bP，設(shè)計(jì)編碼shRNA的DNA序列為74bP。重組質(zhì)粒擴(kuò)增后，BamHI酶切重組質(zhì)粒，2%瓊脂糖凝膠電泳可見條帶位于6000一8000bP之間(圖2)。PCR測(cè)序證實(shí)目的基因正確插入，序列與設(shè)計(jì)的序列相同(圖3)。三P亡tH一‘幾義︸8卜尸咬眾的ee:勸件亡覓T7p行川自r.曰”日I柳尸faI制川日e日舊，.門舊加廳舊r驪le--補(bǔ)~cc~。~。GcT~~T以了�？凇俺銎叧眉~姜習(xí)到灑“代口，l圖1:質(zhì)粒載體pRNAI’ -u6.1入co骨架圖圖2:重組質(zhì)粒BamHI酶切電泳，條帶位于6000一 8000bp之間，邊緣清晰。


本文編號(hào)：2906030