發(fā)布時間：2020-11-04 09:49

　　 非淋菌性尿道炎(NGU)是目前最常見的性傳播疾病,而其中30%～40%是由C.t感染所致。C.t的流行在國內(nèi)外均產(chǎn)生了相當(dāng)重的社會負(fù)擔(dān),C.t生殖道感染同時還增加了HIV感染的危險性。但是至今為止,C.t導(dǎo)致泌尿生殖道感染的致病機制仍然沒有完全弄清楚,尤其是局部感染導(dǎo)致的系統(tǒng)性疾病。建立C.t的小鼠生殖道感染動物模型對更深一步了解C.t感染的致病機制、免疫、免疫病理、疾病進(jìn)展過程以及對該病原體所致NGU的藥物治療療效及毒性觀察,疫苗研制和疫苗免疫效果評定等各方面均有一定的幫助價值。C.t疫苗的研制是C.t防治史上非常重要的一頁,而建立在動物模型基礎(chǔ)上的疫苗免疫效果評定是疫苗研制進(jìn)程中必不可缺的一步。 目的:通過陰道接種途徑建立C.t E血清型的小鼠生殖道感染模型,同時監(jiān)測小鼠陰道清除C.t E血清型時間,并在有限時間內(nèi)初步了解小鼠單次C.t E血清型生殖道感染后抗C.t IgG抗體的變化規(guī)律,為C.t疫苗的研制奠定扎實的動物試驗基礎(chǔ)。 方法:在細(xì)胞培養(yǎng)的基礎(chǔ)上通過多種方法提高C.t培養(yǎng)的感染率,成功培養(yǎng)C.t E型株,然后用高速離心提純C.t EB并定量(以IFU/mL表示),同時用考馬斯亮藍(lán)法進(jìn)行C.t EB蛋白定量。選擇6-7周性成熟BALB/c雌性小鼠,通過陰道接種C.t感染小鼠,接種前10d、3d股部肌肉注射黃體酮以增加小鼠對C.t感染的敏感性。感染后相應(yīng)時間通過陰道-宮頸口拭子PER、衣原體單克隆抗體免疫熒光、C.t分離培養(yǎng)以及ELISA方法檢測血液中抗C.t IgG抗體來證實感染的存在。實驗通過C.t分離培養(yǎng)觀察小鼠陰道清除C.t E血清型時間,并通過自行摸索ELISA實驗條件來檢測、觀察感染后不同時間點小鼠血清中抗C.t IgG抗體滴度及其變化。
【學(xué)位單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2005
【中圖分類】：R759
【部分圖文】：

1、正常MCcoy細(xì)胞的觀察實驗中，McCoy細(xì)胞生長狀態(tài)對實驗結(jié)果影響很大，而細(xì)胞的接種濃度又影響著其生長狀態(tài)。我們接種的細(xì)胞濃度為2x105加工(見圖2一)l，對生長良好的細(xì)胞倒置顯微鏡下進(jìn)行了形態(tài)學(xué)觀察。傳代48h后，細(xì)胞貼壁良好，生長旺盛，分布均勻，系雙極或三極，呈紡錘形，層次感強，胞體較大，胞漿豐富，有雙極樹突狀結(jié)構(gòu)。2x105/mL密度的細(xì)胞4h8后形成致密單層。(見圖2一2)圖2一1剛俏化完的McCoy細(xì)胞，細(xì)胞圖2一2致密單層細(xì)胭，貼壁良好，生長旺懸浮在液體中，樹枝狀突皺縮，胞體變圓盛，分布均勻，呈紡錘形，層次感強，有雙極樹突狀結(jié)構(gòu)2、C.t感染的McC0y細(xì)胞形態(tài)觀察McCoy細(xì)胞接種入C.tE型標(biāo)準(zhǔn)株后

碩士研究生學(xué)位論文結(jié)果圖2一3C.t感染后6h的細(xì)胞，細(xì)胞形態(tài)仍呈梭形，突觸明顯。圖2一C.t感染后2h4的細(xì)胞，細(xì)胞已較前變圓，突觸消失，細(xì)胞呈橢圓形。圖2一5C.t感染后44h的細(xì)胞，細(xì)胞已經(jīng)成近圓形，未見突觸，少量細(xì)胞己死亡。3、盧戈氏碘液染色法觀察培養(yǎng)結(jié)果碘液染色后顯微鏡下觀察結(jié)果。陽性標(biāo)本可看到McCoy細(xì)胞呈黃色或淡黃色，包涵體呈棕褐色(見圖2一6、圖2一7)。由圖可發(fā)現(xiàn)90%以上的細(xì)胞23

結(jié)果100X200X圖2一6顯微鏡下可見染成棕褐色的包涵體圖2一7顯微鏡下可見染成棕褐色的包涵體在實驗中我們發(fā)現(xiàn)未染色的標(biāo)本在顯微鏡下也可以觀察到包涵體，400倍鏡下可以看到感染了包涵體的細(xì)胞體積變大，細(xì)胞核被擠向一側(cè)，包涵體占據(jù)了細(xì)胞體積的大部分，呈球形、空泡狀，轉(zhuǎn)動細(xì)螺旋有立體感(見圖2一8)。400X圖2一8鏡下未染色的包涵體呈近球形，二、C.tEB濃度定量及蛋白定量1、C.tEB濃度定量孵育44一48小時后的標(biāo)本風(fēng)干、甲醇固定24占據(jù)了細(xì)胞體積的大部分10分鐘后碘染，計數(shù)每孔包涵
【參考文獻(xiàn)】

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1 閆玲,馮樹異,周勁松,王雙元;應(yīng)用McCoy細(xì)胞及Hep-2細(xì)胞培養(yǎng)沙眼衣原體D型株[J];北京醫(yī)科大學(xué)學(xué)報;1997年01期

2 陳木開,韓建德,陳小紅,涂裕英;MoPn沙眼衣原體致小鼠生殖道感染模型的初步研究[J];中國人獸共患病雜志;2004年08期

本文編號：2869942