目前,關(guān)于慢性炎癥與腫瘤之間的關(guān)系已達(dá)成比較一致的認(rèn)識,慢性炎癥不僅作為一些腫瘤發(fā)生的土壤,而且在與腫瘤共同存在時,它還會作為一種促進(jìn)腫瘤發(fā)展的因素。慢性炎癥與腫瘤相關(guān)炎癥有許多相似之處,如固有免疫細(xì)胞的浸潤、基質(zhì)金屬蛋白酶活性升高、血管生成和微血管密度提高,從而,依賴腫瘤浸潤性T細(xì)胞或內(nèi)皮淋巴細(xì)胞細(xì)胞毒性的免疫系統(tǒng)監(jiān)督功能增強,是早期抑制腫瘤發(fā)展的關(guān)鍵。炎癥反應(yīng)過程如血管生成和巨噬細(xì)胞、中性粒細(xì)胞的浸潤是細(xì)菌感染的有效防御機制,但是這個調(diào)節(jié)通路似乎對于腫瘤的預(yù)防并不合適,反而為腫瘤提供了一個保護(hù)性環(huán)境,其中細(xì)胞因子的表達(dá)不僅能幫助組織重建和血管生成,還能保護(hù)腫瘤免于免疫系統(tǒng)的抵抗。因此,慢性炎癥在與腫瘤共存環(huán)境中對其產(chǎn)生的作用,與炎癥部位細(xì)胞因子的釋放密切相關(guān)。本研究在實驗室前期建立慢性炎癥黑色素瘤復(fù)合動物模型的基礎(chǔ)上,對小鼠血清中部分腫瘤發(fā)展相關(guān)細(xì)胞因子的含量進(jìn)行了檢測,結(jié)合對腫瘤組織中微血管的計數(shù),分析白細(xì)胞介素(IL)-6、IL-17、IL-23、血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)與腫瘤組織中微血管密度(MVD)的相關(guān)性,并選取炎癥因子IL-23進(jìn)行體外實驗,觀察其對B16F10細(xì)胞增殖、遷移、侵襲以及血管生成擬態(tài)能力的影響,主要研究內(nèi)容如下： 第一部分：小鼠血清中部分腫瘤發(fā)展相關(guān)細(xì)胞因子含量的檢測與分析 本部分研究選取小鼠血清(取自實驗室前期建立的慢性炎癥-黑色素瘤復(fù)合動物模型)作為檢測對象,通過酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)對其中部分細(xì)胞因子進(jìn)行檢測與分析,結(jié)合前期實驗中對腫瘤組織進(jìn)行的微血管計數(shù)進(jìn)行了相關(guān)性分析。 得出結(jié)果如下：炎癥腫瘤組小鼠血清白細(xì)胞介素(IL)-6、IL-17、IL-23、血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子(VEGF)均明顯大于單純腫瘤組(P0.05)。炎癥腫瘤組小鼠血清中IL-6、IL-17、IL-23、VEGF水平均與MVD呈正相關(guān)(P0.05或P0.01)。且炎癥腫瘤組組小鼠血清中IL-17、IL-23水平與VEGF呈正相關(guān)(P0.01),IL-6與VEGF無相關(guān)性(P0.05)。 根據(jù)以上實驗結(jié)果,結(jié)合關(guān)于上述三種白介素類炎癥因子與腫瘤發(fā)生發(fā)展關(guān)系的研究現(xiàn)狀。目前達(dá)成的共識為：IL-23可以通過增強機體免疫功能產(chǎn)生IFN-γ、TNF-α等發(fā)揮抗腫瘤效應(yīng)；IL-23通過調(diào)節(jié)免疫監(jiān)視等功能,對腫瘤微環(huán)境中的免疫系統(tǒng)進(jìn)行編輯,打破機體平衡狀態(tài),起到誘導(dǎo)腫瘤發(fā)生的作用。而關(guān)于IL-23與腫瘤血管生成方面的研究關(guān)注度相對不夠,因此,本研究選取IL-23作為下一步體外實驗的研究對象。 第二部分：IL-23對小鼠黑色素瘤細(xì)胞體外增殖、遷移、侵襲以及管道形成能力的影響 為了進(jìn)一步觀察單一炎癥因子對腫瘤細(xì)胞增殖、遷移、侵襲以及管道形成能力的影響,本部分選擇IL-23和小鼠來源的黑色素瘤B16F10細(xì)胞進(jìn)行體外實驗研究,通過培養(yǎng)腫瘤細(xì)胞,施加IL-23進(jìn)行作用,觀察其對B16F10細(xì)胞增殖、遷移、侵襲及管道形成能力產(chǎn)生的影響。 四甲基偶氮唑鹽(MTT)比色法實驗結(jié)果表明：IL-23干預(yù)組腫瘤細(xì)胞增殖率高于對照組,OD值差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),說明IL-23可促進(jìn)小鼠黑色素瘤B16F10細(xì)胞的生長。且給予IL-23處理時,黑色素瘤細(xì)胞伸出細(xì)長的偽足,表現(xiàn)出與對照組不同的形態(tài)。 劃痕實驗顯示,加入不同濃度IL-23后,小鼠黑色素瘤B16F10細(xì)胞向劃痕中央遷移的距離明顯大于正常對照組(P0.05)。 Transwell實驗結(jié)果顯示,加入IL-23組的小鼠黑色素瘤B16F10細(xì)胞穿膜數(shù)明顯多于正常對照組(P0.05)。 明膠酶譜實驗結(jié)果顯示,加入IL-23后小鼠黑色素瘤B16F10細(xì)胞基質(zhì)金屬蛋白酶MMP-2、MMP-9表達(dá)活性增強(P0.05)。 三維管道形成實驗結(jié)果顯示,加入IL-23后小鼠黑色素瘤B16F10細(xì)胞形成管道能力明顯增強。 Western blot結(jié)果顯示加入IL-23后小鼠黑色素瘤B16F10細(xì)胞的NF-κB表達(dá)增強(P0.05)； 綜上所述,本研究通過酶聯(lián)免疫吸附(ELISA)實驗,對動物模型中小鼠血清細(xì)胞因子進(jìn)行檢測和分析,尋找細(xì)胞因子濃度與腫瘤微血管密度之間的關(guān)聯(lián)性,并選擇炎癥因子白細(xì)胞介素-23進(jìn)行體外實驗,運用MTT試驗、劃痕試驗Transwell侵襲試驗、明膠酶譜分析、三維培養(yǎng)等技術(shù),觀察IL-23對小鼠黑色素瘤細(xì)胞增殖、遷移、侵襲以及管道形成能力的影響,得出以下結(jié)論： 1、慢性炎癥與惡性黑色素瘤共存動物模型中,部分白細(xì)胞介素類炎癥因子的釋放能夠促進(jìn)黑色素瘤內(nèi)皮血管的生長：分析細(xì)胞因子的含量與腫瘤微血管密度的結(jié)果表明,IL-17、IL-23、VEGF的含量均與MVD呈正相關(guān),且IL-17、IL-23與VEGF呈正相關(guān),說明IL-17和IL-23很可能會通過促進(jìn)VEGF的分泌,繼而促進(jìn)內(nèi)皮血管的生成。 2、白細(xì)胞介素-23對小鼠黑色素瘤B16F10細(xì)胞擬態(tài)血管形成的影響：通過MTT試驗、劃痕試驗、Transwell侵襲實驗、三維培養(yǎng)試驗以及明膠酶譜分析,結(jié)果顯示IL-23可以促進(jìn)B16F10細(xì)胞的增殖、遷移、侵襲和管道形成能力,說明IL-23的誘導(dǎo)作用能夠增強小鼠黑色素瘤細(xì)胞體外擬態(tài)血管的形成能力。
【學(xué)位單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2013
【中圖分類】：R739.5
【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
縮略語
前言
    研究現(xiàn)狀、成果
    研究目的、方法
一、小鼠血清中部分腫瘤發(fā)展相關(guān)細(xì)胞因子含量的檢測與分析
    1.1 對象和方法
        1.1.1 實驗動物和細(xì)胞系
        1.1.2 主要實驗原料與試劑
        1.1.3 主要實驗器材與儀器
        1.1.4 主要實驗步驟
        1.1.5 統(tǒng)計方法
    1.2 結(jié)果
        1.2.1 各組小鼠血清中IL-6、IL-17、IL-23、VEGF含量的比較
        1.2.2 血清中四種細(xì)胞因子含量與腫瘤組織MVD的相關(guān)性分析
        1.2.3 血清中IL-6、IL-17、IL-23與VEGF含量的相關(guān)性分析
    1.3 討論
    1.4 小結(jié)
二、IL-23對小鼠黑色素瘤細(xì)胞體外增殖、遷移、侵襲以及管道形成能力的影響
    2.1 對象和方法
        2.1.1 實驗動物和細(xì)胞系
        2.1.2 主要實驗原料與試劑
        2.1.3 主要實驗器材與儀器
        2.1.4 主要溶液配制
        2.1.5 主要實驗步驟
    2.2 結(jié)果
        2.2.1 IL-23對小鼠黑色素瘤B16F10細(xì)胞增殖能力的影響
        2.2.2 IL-23對小鼠黑色素瘤B16F10細(xì)胞遷移能力的影響
        2.2.3 IL-23對小鼠黑色素瘤B16F10細(xì)胞侵襲能力的影響
        2.2.4 明膠酶譜實驗
        2.2.5 IL-23對小鼠黑色素瘤細(xì)胞管道形成能力的影響
        2.2.6 Western blot
    2.3 討論
    2.4 小結(jié)
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
發(fā)表論文和參加科研情況說明
綜述
    綜述參考文獻(xiàn)
致謝

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本文編號：2850432