惡性黑素瘤在世界范圍內(nèi)的發(fā)病有逐年增加的趨勢，其惡性程度極高，臨床缺乏有效治療手段。目前通常采用的治療方案包括手術(shù)切除、生物治療、放射治療及化療效果均不理想。近年來黑素瘤的化學(xué)藥物治療沒有取得突破性進展，臨床化學(xué)藥物治療中最有效的藥物仍是氮酰咪胺(dacarbazine，DTIC)，顯效率約20％，其余依次為卡氮介顯效率18％、甲環(huán)亞硝脲顯效率16％、順鉑(cisplatin)顯效率15％。DTIC聯(lián)用兩種及三種藥物療效提高到24％及31％，但毒性反應(yīng)顯著增加�？偟膩碚f，惡性黑素瘤仍是對現(xiàn)有化療藥物極不敏感的惡性腫瘤之一。因此須尋求更為有效的化療藥物及制定聯(lián)合化療方案。 三氧化二砷是中藥砒石的主要成分，傳統(tǒng)主要用于治療梅毒、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、哮喘、瘧疾、痢疾等病證。低劑量砷劑在臨床較為常用，其中最常用于惡性腫瘤的治療，包括外用治療惡性黑素瘤等。三氧化二砷還用于治療白癜風(fēng)、花斑癬、銀屑病等皮膚病。微量三氧化二砷還有刺激造血及促進細胞增殖作用。西方曾采用含亞砷酸的溶液治療腫瘤，但一直未受重視。 20世紀70年代后，張亭棟等發(fā)現(xiàn)單用的As_2O_3注射液對急性早幼粒細胞白血病(APL)的療效顯著，此后得到多位學(xué)者證買。1996年陳國強、陳竺等證實三氧化二砷是通過誘導(dǎo)腫瘤細胞分化和凋亡而發(fā)揮抗瘤效應(yīng)，臨床治療濃度是相對安全的。近年三氧化二砷對各種腫瘤包括實體瘤的作用及機制研究進展較快。但對黑素瘤的作用及其機制尚未見相關(guān)報道。因此非常有必要研究三氧化二砷對黑素瘤的抗腫瘤作用，為黑素瘤的治療提供新的有效藥物，并拓寬三氧化二砷的 南京醫(yī)科大學(xué)博1學(xué)位論文 疾病譜。 本研究觀察三氧化二砷及其聯(lián)用抗氧化劑維生素C對小鼠 黑素瘤細胞增殖、凋亡、分化的影響，并在小鼠皮膚黑素瘤模 型，檢測三氧化二砷對小鼠移植性腫瘤的生長、體積及瘤重影 響，探討其治療黑素瘤的機制。共分二部分論述: 一、三氧化二砷對小鼠黑素瘤細胞Cloudman 591的作用 分別以不同濃度三氧化二砷作用小鼠黑素瘤Cloudman 591細 胞，顯示其對黑素瘤細胞的作用隨濃度高低而影響不同，高濃度時誘 導(dǎo)腫瘤細胞凋亡，中濃度時主要抑制腫瘤細胞生長，低濃度促進細胞 增殖細胞形態(tài)發(fā)生改變，并向成熟細胞分化。 合成黑素是黑素細胞功能的體現(xiàn)，591是黑素含量極低的黑素瘤 細胞，檢測低濃度三氧化二砷對黑素瘤細胞黑素含量及酪氨酸酶活性 發(fā)現(xiàn)，黑素瘤細胞在增殖的同時，細胞形態(tài)發(fā)生改變、黑素含量增加， 酪氨酸酶活性增強，該作用可被長時程PKC激活劑TPA所阻斷。這 些結(jié)果提示黑素瘤細胞在低劑量三氧化二砷作用下可向正常黑素細 胞分化，該過程與PKC途徑密切相關(guān)。 由于黑素瘤細胞對三氧化二砷誘導(dǎo)凋亡的敏感性顯著低于APL， 本研究進一步觀察了聯(lián)合應(yīng)用維生素C對黑素瘤生長抑制及細胞凋 亡的影響，發(fā)現(xiàn)聯(lián)用維生素C明顯增強其抑制黑素瘤細胞生長，凋 亡率顯著增加，三氧化二砷聯(lián)合應(yīng)用維生素C為臨床治療惡性黑素 瘤細胞提供了新途徑。 二、三氧化二砷對黑素瘤荷瘤鼠作用的實驗研究 為進一步證實三氧化二砷對黑素瘤的體內(nèi)抗腫瘤作用，本研究選 擇小鼠移植性腫瘤黑素瘤模型，以不同劑量三氧化二砷腹腔注射給 藥，連續(xù)用藥Zld，以順鉑為陽性對照藥，結(jié)果顯示sm創(chuàng)k留d三氧 南京醫(yī)科大學(xué)博廠學(xué)位論文 化二砷可明顯抑制黑素瘤生長，Zmg眾g/d及l(fā)m留k留d三氧化二砷顯 著抑制腫瘤生長，并顯著延長荷瘤鼠生存期。 lmg/k留d三氧化二砷與維生素C(40mg/k留d)聯(lián)用可明顯增強 三氧化二砷對荷瘤鼠的腫瘤抑制作用，其抑瘤效應(yīng)與smg爪g/d三氧 化二砷組相當，但生存期明顯延長。因此聯(lián)合應(yīng)用維生素C與三氧 化二砷有可能用于臨床黑素瘤的治療，但其劑量、用藥途徑、療程尚 有待探討。 經(jīng)光鏡組織學(xué)研究觀察發(fā)現(xiàn)聯(lián)用維生素與三氧化二砷組瘤組織 明顯減少，瘤組織中瘤細胞數(shù)目明顯減少，瘤細胞體積明顯增大，細 胞結(jié)構(gòu)消失，呈透明狀，細胞核固縮、縮小或消失;流式細胞儀檢測 發(fā)現(xiàn)，聯(lián)用維生素C組凋亡細胞率明顯增加，高于其他各組;電鏡 超微結(jié)構(gòu)觀察可見單用三氧化二砷組黑素瘤細胞核明顯縮小，核/質(zhì) 比明顯降低，核仁減少或消失，黑素體增多，呈典型的分化形態(tài)，聯(lián) 用維生素C及三氧化二砷組細胞呈細胞核固縮、碎裂，染色質(zhì)邊集， 呈典型的凋亡形態(tài)。提示聯(lián)用維生素與三氧化二砷可誘導(dǎo)鼠皮膚黑素 瘤細胞凋亡，并可誘導(dǎo)其向成熟細胞分化。這可能是其抑制黑素瘤生 長的主要機制。
【學(xué)位單位】：南京醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位年份】：2004
【中圖分類】：R739.5
【文章目錄】：
英文縮寫注釋
中文摘要
ABSTRACT
論文正文 三氧化二砷對小鼠黑素瘤的抗腫瘤作用及機制研究
    第一部分 三氧化二砷對小鼠黑素瘤細胞株Cloudman S91的作用
        第一節(jié) 不同濃度三氧化二砷對Cloudman S91的影響
            摘要
            前言
            材料和方法
            結(jié)果
            討論
            小結(jié)
            參考文獻
        第二節(jié) 三氧化二砷聯(lián)用維生素C對Cloudman S91的影響
            摘要
            前言
            材料和方法
            結(jié)果
            討論
            小結(jié)
            參考文獻
        第三節(jié) 三氧化二砷對Cloudman S91黑素瘤細胞酪氨酸酶活性和黑素含量的影響
            摘要
            前言
            材料和方法
            結(jié)果
            討論
            小結(jié)
            參考文獻
    第二部分 三氧化二砷對荷黑素瘤的C57BL/6小鼠的作用及機制
        第一節(jié) 小鼠皮膚黑素瘤模型的建立
            摘要
            前言
            材料和方法
            結(jié)果
            討論
            小結(jié)
            參考文獻
        第二節(jié) 三氧化二砷對小鼠皮膚黑素瘤瘤體的影響
            摘要
            前言
            材料和方法
            結(jié)果
            討論
            小結(jié)
            參考文獻
        第三節(jié) 三氧化二砷抑制小鼠黑素瘤生長的機制研究
            摘要
            前言
            材料和方法
            結(jié)果
            討論
            小結(jié)
            參考文獻
總結(jié)
致謝
綜述一 三氧化二砷由毒藥變良藥
綜述二 黑素細胞特異性基因的研究進展
在讀博士生期間發(fā)表論文及工作

【參考文獻】

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本文編號：2838507