[目的]研究衣原體蛋白pGP3及其M段通過(guò)結(jié)合LL-37抑制小鼠銀屑病樣皮炎的進(jìn)展及對(duì)小鼠體內(nèi)炎性因子IL-17、IL-22、IFN-γ水平的影響。[方法]通過(guò)GST-pulldown實(shí)驗(yàn)體外檢測(cè)pGP3與LL-37的結(jié)合及其結(jié)合點(diǎn)。通過(guò)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究pGP3及其M段對(duì)IMQ造模的小鼠銀屑病樣皮炎的抑制作用及對(duì)部分炎性因子水平的影響。將48只體重18-20g、6-8周齡的BALB/c雌性小鼠隨機(jī)均分6組,包括正常組、IMQ組,pGP3局部外涂組、pGP3局部多點(diǎn)皮下注射組,pGP3M局部外涂組、pGP3M局部多點(diǎn)皮下注射組。每組每日早上除正常組小鼠外,均定時(shí)定量涂抹IMQ。每組均每日傍晚除正常組及IMQ組外,均定時(shí)定量應(yīng)用蛋白干預(yù)。連續(xù)干預(yù)7天,觀察小鼠每日皮損變化并拍照,依據(jù)PASI評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)對(duì)小鼠皮損嚴(yán)重程度評(píng)分。對(duì)IMQ組及pGP3、pGP3M外涂組小鼠右耳IMQ造模并外涂相應(yīng)蛋白,每日測(cè)量小鼠耳朵厚度。于蛋白干預(yù)后的第8天處死小鼠取小鼠皮損組織,一部分組織制備石蠟切片,HE染色評(píng)估病理表現(xiàn),另一部分組織留做RT-PCR檢測(cè)IL-17、IL-22、IFN-γmRNA水平。最后統(tǒng)計(jì)所有結(jié)果數(shù)據(jù),分析比較不同干預(yù)方法對(duì)銀屑病皮損的影響。[結(jié)果]所有IMQ造模的小鼠均出現(xiàn)典型銀屑病樣皮損及病理組織學(xué)表現(xiàn)。與IMQ組相比,4組蛋白干預(yù)組皮損、病理表現(xiàn)改善程度及PASI評(píng)分下降更明顯,且到第5-6天時(shí)皮損開(kāi)始消退,而IMQ組皮損會(huì)持續(xù)發(fā)展至第7-8天。外涂pGP3、pGP3M組測(cè)得的耳朵厚度也比IMQ組增厚緩慢且更早開(kāi)始恢復(fù),這2組蛋白干預(yù)組之間無(wú)明顯差別。但4組蛋白干預(yù)組皮損對(duì)比,Ext-pGP3組皮損改善程度及PASI評(píng)分下降不如其余3組更顯著。皮損內(nèi)IL-17、IL-22、IFN-γ表達(dá)水平,4組蛋白干預(yù)組均較IMQ組下降顯著(P0.05)。但I(xiàn)nj-pGP3組較Ext-pGP3組IL-17、IL-22、IFN-γ表達(dá)水平下降更顯著(P0.05)。Inj-pGP3M組較Ext-pGP3M組IL-17、IL-22、IFN-γ表達(dá)水平下降無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。[結(jié)論]衣原體蛋白pGP3及其M段蛋白通過(guò)結(jié)合LL-37下調(diào)皮損內(nèi)IL-17A、IL-22、IFN-γ表達(dá),有效改善IMQ造模的小鼠銀屑病樣皮損。
【學(xué)位單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：R758.63
【部分圖文】：

1 pGP3 的凝膠電泳條帶 圖 2 pGP3M 的凝膠電泳條帶 pull down 實(shí)驗(yàn)結(jié)果-pGP3、GST-pGP3N、GST-pGP3M、GST-pGP3C 的 GST pul1、LL-37：7kDa 處可見(jiàn)單一條帶，提示抗 LL-37 抗體特異、GST beads+LL-37：無(wú)條帶出現(xiàn)，提示 GST 不能與 LL-37 ST-pGP3fl：主要出現(xiàn) 2 條條帶，下面的 1 條代表抗 LL-37 抗L-37，上面的 1 條代表 LL-37+GST-pGP3fl 形成的穩(wěn)定復(fù)合ST-pGP3N：無(wú)條帶出現(xiàn)，提示 LL-37 不能與 GST-pGP3N 結(jié)、LL-37+GST-pGP3M：主要出現(xiàn) 2 條條帶，下面的 1 條代表性識(shí)別的 LL-37，上面的 1 條代表 LL-37+GST-pGP3M 形成LL-37+GST-pGP3C：無(wú)條帶出現(xiàn)，提示 LL-37 不能與 GST-

1 pGP3 的凝膠電泳條帶 圖 2 pGP3M 的凝膠電泳條帶 pull down 實(shí)驗(yàn)結(jié)果-pGP3、GST-pGP3N、GST-pGP3M、GST-pGP3C 的 GST pul1、LL-37：7kDa 處可見(jiàn)單一條帶，提示抗 LL-37 抗體特異、GST beads+LL-37：無(wú)條帶出現(xiàn)，提示 GST 不能與 LL-37 ST-pGP3fl：主要出現(xiàn) 2 條條帶，下面的 1 條代表抗 LL-37 抗L-37，上面的 1 條代表 LL-37+GST-pGP3fl 形成的穩(wěn)定復(fù)合ST-pGP3N：無(wú)條帶出現(xiàn)，提示 LL-37 不能與 GST-pGP3N 結(jié)、LL-37+GST-pGP3M：主要出現(xiàn) 2 條條帶，下面的 1 條代表性識(shí)別的 LL-37，上面的 1 條代表 LL-37+GST-pGP3M 形成LL-37+GST-pGP3C：無(wú)條帶出現(xiàn)，提示 LL-37 不能與 GST-

GSTpulldown結(jié)果
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本文編號(hào)：2837731