背景黑色素瘤起源于生黑色素細(xì)胞,它是皮膚癌中侵襲能力最強(qiáng)的一類腫瘤。雖然黑色素瘤患者的數(shù)量占皮膚癌患者總量的比例較低,但是在因皮膚癌死亡的患者中絕大部分為黑色素瘤患者。對于轉(zhuǎn)移的且手術(shù)無法摘除的黑色素瘤患者,需要采用其它的一些常規(guī)方法,包括化療、靶向分子藥物治療、免疫治療和放療等。然而,這些手段產(chǎn)生的治療效果通常不佳(3年的生存率低于15%)且病人的臨床反應(yīng)較差。因此,發(fā)展能對黑色素瘤進(jìn)行早期高效診斷和針對轉(zhuǎn)移性黑色素瘤進(jìn)行有效治療的方法尤為重要。目的通過自組裝構(gòu)建超級納米顆粒(Nanoparticles,NP),負(fù)載了光敏劑(prolipid)和靶向殺傷性多肽(α-melittin),可對黑色素瘤進(jìn)行雙模成像(NIR/MRI)和具有靶向的雙模治療(光動(dòng)力作用/殺傷性多肽α-melittin)。以達(dá)到早期檢測,控制腫瘤生長和復(fù)發(fā)的目的。方法1.負(fù)載殺傷性多肽和光敏劑的磁性納米顆粒(α-melittin-pro-NP)的制備及表征將氧化鐵納米顆粒,磷脂和光敏劑溶于氯仿,并混合。采用水合乳化法使其自組裝成為球形納米結(jié)構(gòu),冷卻后并加入改良后的蜂毒肽(α-melittin),置于冰盒,搖床搖3h,形成α-melittin-pro-NP。將制備好的α-melittin-pro-NP通過電鏡和水合粒徑測定α-melittin-pro-NP直徑和UV光譜儀器測其紫外吸收光譜。2.檢測α-melittin-pro-NP的生物安全性和SR-B1受體靶向性驗(yàn)證通過紅細(xì)胞溶血實(shí)驗(yàn)檢測納米材料的生物安全性;通過細(xì)胞流式儀檢測細(xì)胞對α-melittin-pro-NP的攝取情況和Western Blot實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證納米材料具有SR-B1靶向性。3.細(xì)胞實(shí)驗(yàn)通過激光共聚焦觀察藥物在細(xì)胞的分布情況;MTT實(shí)驗(yàn)來檢測α-melittin-pro-NP對細(xì)胞殺傷作用;利用細(xì)胞流式儀檢測α-melittin-pro-NP對細(xì)胞凋亡的影響;體外培養(yǎng)樹突(DC)細(xì)胞,驗(yàn)證α-melittin-pro-NP能夠激活DC細(xì)胞,從而激活T細(xì)胞介導(dǎo)的免疫反應(yīng),從而抑制并殺傷腫瘤細(xì)胞。結(jié)果1.制備的α-melittin-pro-NP溶液均勻,無沉淀,具有良好的穩(wěn)定性;通過透射電鏡和水合粒徑檢測納米材料的平均粒徑分別在在10nm和100nm;UV光譜掃描結(jié)果prolipid和α-melittin-pro-NP在670nm波長均下有特征吸收,證明了光敏劑prolipid已經(jīng)修飾到了α-melittin-NP表面。2.當(dāng)濃度為10μM時(shí),melittin的溶血率接近100%,而α-melittin-pro-NP的溶血率為20%左右;通過對比不同細(xì)胞攝取納米材料和Western Blot結(jié)果,α-melittin-pro-NP高效靶向表達(dá)SR-B1受體的B16-F10細(xì)胞。3.通過激光共聚焦觀察B16-F10細(xì)胞通過內(nèi)吞作用,將α-melittin-pro-NP攝取到細(xì)胞質(zhì)中;MTT實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,當(dāng)α-melittin-pro-NP濃度為1μM時(shí),非光照組和光照組對B16-F10細(xì)胞的增殖抑制率分別為30%和90%;細(xì)胞凋亡實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:對照組,α-melittin-pro-NP組,α-melittin-pro-NP+光照組的細(xì)胞凋亡率分別為3.18%,47.56%,90.8%;體外激活DC細(xì)胞結(jié)果表明當(dāng)α-melittin-pro-NP濃度為10μM時(shí),DC細(xì)胞激活比例比對照組高37%。結(jié)論本課題成功合成了可同時(shí)裝載蜂毒肽α-melittin和光敏劑prolipid的新型納米材料α-melittin-pro-NP,該納米材料具有良好的生物相容性,可以近紅外成像觀察腫瘤位置和大小,還可以通過光動(dòng)力和α-melittin的殺傷性協(xié)同作用來發(fā)揮出良好的抗黑色素瘤活性。
【學(xué)位單位】：新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：TB383.1;R739.5
【部分圖文】：

圖 1 α-melittin-pro-NP 電鏡掃描圖像如圖 1A 和 1B 所示，通過透射電鏡可以看到 α-melittin-pro-NP 形態(tài)為均勻的球狀結(jié)構(gòu)，且直徑在 15nm 左右,有利于細(xì)胞的攝取。

圖 1 α-melittin-pro-NP 電鏡掃描圖像1A 和 1B 所示，通過透射電鏡可以看到 α-melittin-pro-NP 形態(tài)直徑在 15nm 左右,有利于細(xì)胞的攝取。

α-melittin-pro-NPUV光譜掃描圖譜

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 王晶;程永舟;楊小樺;徐寧;劉仔鋒;;新型透空板式防波堤消浪效果試驗(yàn)研究[J];船舶力學(xué);2015年Z1期

本文編號：2832506