目的:慢性蕁麻疹是常見的慢性過敏性疾病,其發(fā)病率高,病程長,發(fā)病時(shí)伴有劇烈瘙癢,給患者工作、生活帶來極大困擾。該病病因復(fù)雜,可由多種因素引起,因此查找過敏原就成為了防治關(guān)鍵。屋塵螨普遍存在于居住環(huán)境中,是引發(fā)慢性蕁麻疹的重要過敏原之一。血清過敏原特異性Ig E(s Ig E)檢測(cè)作為一種安全、有效、便捷的檢測(cè)手段,廣泛應(yīng)用于過敏性疾病的診斷。然而,在臨床診療中我們發(fā)現(xiàn)目前的過敏原檢測(cè)系統(tǒng)的檢測(cè)結(jié)果常與患者的臨床表現(xiàn)不相符。本研究旨在分析引起患者慢性蕁麻疹的屋塵螨致敏蛋白組分,初步分離純化屋塵螨致敏蛋白組分,提高屋塵螨過敏原檢測(cè)準(zhǔn)確性,進(jìn)而正確指導(dǎo)過敏原特異性免疫治療(Allergen immunotherapy,AIT)。方法:1對(duì)2018.01-2019.01就診于河北醫(yī)科大學(xué)第四醫(yī)院皮膚科門診患有過敏性疾病并且行了血清過敏原s Ig E檢測(cè)的患者進(jìn)行流行病學(xué)調(diào)查,對(duì)檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行分析。2屋塵螨粗提取液進(jìn)行聚丙烯酰胺凝膠電泳(sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)分析其蛋白組分。3選取臨床診斷為慢性蕁麻疹且塵螨s Ig E及對(duì)粉塵臨床表現(xiàn)均為陽性的患者的血清池為“探針”,對(duì)屋塵螨粗提取液進(jìn)行免疫印跡實(shí)驗(yàn)(western-blot,WB),分析其致敏蛋白組分。4屋塵螨粗提取液進(jìn)行高效液相色譜實(shí)驗(yàn)(high performance liquid chromatography,HPLC),接取各峰液,濃縮后進(jìn)行SDS-PAGE及WB實(shí)驗(yàn)。5選取臨床診斷為慢性蕁麻疹且塵螨s Ig E結(jié)果與對(duì)粉塵臨床表現(xiàn)不相符的患者血清,分別以屋塵螨粗提取液、主峰2作為包被抗原進(jìn)行狹縫免疫印跡實(shí)驗(yàn)(slot-blot,SB)及酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA),對(duì)比以上兩種方法與艾康法所得結(jié)果的異同。結(jié)果:1就診于我院皮膚科門診的患有過敏性疾病的患者,其過敏原主要是塵螨組合、雞蛋白和牛奶。2流行病學(xué)調(diào)查2.1 2018.01-2019.01就診于河北醫(yī)科大學(xué)第四醫(yī)院皮膚科門診的患過敏性疾病且已進(jìn)行血清過敏原s Ig E檢測(cè)患者共2665例,其中男性1032例,女性1633例,平均年齡為33.4±10.5歲。病種以蕁麻疹、皮炎、濕疹為主,慢性蕁麻疹患者644例,居首位。慢性蕁麻疹患者中,疑對(duì)塵螨過敏的患者235例,所占比例最高。2.2將以上235例慢性蕁麻疹患者的流行病學(xué)調(diào)查結(jié)果與血清塵螨s Ig E檢測(cè)結(jié)果對(duì)比后我們發(fā)現(xiàn):有87例患者臨床調(diào)查結(jié)果與血清塵螨s Ig E檢測(cè)結(jié)果不符。3屋塵螨SDS-PAGE結(jié)果可見16條較清晰的蛋白條帶,相對(duì)分子量分別為:129k Da、117k Da、105k Da、59.1k Da、56.8k Da、49.0k Da、43.7k Da、39.1k Da、35.5k Da、28.6k Da、25.7k Da、22.4k Da、19.6k Da、18.9k Da、15.5k Da、13.9k Da。4 10例臨床診斷為慢性蕁麻疹,塵螨s Ig E及臨床表現(xiàn)均為陽性患者血清池為“探針”對(duì)屋塵螨粗提取液進(jìn)行WB檢測(cè),在59.1k Da、49.0k Da-39.1k Da、35.5k Da、28.6k Da、25.7k Da、22.4k Da、15.5k Da處可見陽性反應(yīng)條帶,根據(jù)相對(duì)分子量推測(cè)對(duì)應(yīng)的組分分別為Der p4、Der p9、Der p10、Der p7、Der p1、Der p3、Der p2。5屋塵螨粗提取液HPLC結(jié)果:色譜圖可見7個(gè)主峰,各峰液進(jìn)行SDS-PAGE及WB檢測(cè),結(jié)果示:主峰2在61.6k Da、45.5k Da、35.8k Da、32.6k Da、26.5k Da、24.2k Da、16.3k Da可見較為明顯的陽性反應(yīng)條帶,根據(jù)相對(duì)分子量推測(cè)對(duì)應(yīng)Der p4、Der p9、Der p10、Der p7、Der p1、Der p3、Der p2。6應(yīng)用主峰2作為包被抗原,無論是SB法還是ELISA法均可提高慢性蕁麻疹患者屋塵螨過敏原檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。結(jié)論:1.就診于我院皮膚科門診的患有過敏性疾病的患者,其過敏原主要是塵螨組合、雞蛋白和牛奶。2.引起慢性蕁麻疹的屋塵螨的主要蛋白組分可能為Der p4、Der p9、Der p10、Der p7、Der p1、Der p3、Der p2。3.采用HPLC純化的屋塵螨粗提取液作為包被抗原,結(jié)合SB或ELISA檢測(cè)方法均可達(dá)到提高慢性蕁麻疹患者屋塵螨過敏診斷的準(zhǔn)確率。
【學(xué)位單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：R758.24
【部分圖文】：

圖 1 過敏原 sIgE 所占比例Fig.1 proportion of allergen sIgE行病學(xué)調(diào)查共入選患者 2665 例，男性 1032 例，女性 1633 例，平均年±10.5 歲。病種以蕁麻疹、濕疹、皮炎為主，慢性蕁麻疹患者居首位。慢性蕁麻疹患者中，對(duì)塵螨過敏 235 例，所占比例對(duì)慢性蕁麻疹患者進(jìn)行分析，將臨床表現(xiàn)陽性（自覺對(duì)粉塵

SDS-PAGE 結(jié)果：1 列為 mf crude extract from house du: crude extract from house du臨床表現(xiàn)均為陽性患者的血WB 檢測(cè)結(jié)果：在 61.6kDa25.7kDa、22.4kDa、15.5kD推測(cè)對(duì)應(yīng)的組分分別為 Derr p3、Der p2，如下圖：

液 SDS-PAGE 結(jié)果：1 列為 mas of crude extract from house dust e 2: crude extract from house dust 及臨床表現(xiàn)均為陽性患者的血清 WB 檢測(cè)結(jié)果：在 61.6kDa、a、25.7kDa、22.4kDa、15.5kDa 量推測(cè)對(duì)應(yīng)的組分分別為 Der p4Der p3、Der p2，如下圖：

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2832007