目的：①研究臨床常見致病真菌馬拉色菌、念珠菌、絲狀菌等在紫外光照射下的自發(fā)熒光特性；②探討真菌在酸堿性環(huán)境中、存活和死亡狀態(tài)下自發(fā)熒光質(zhì)和量的變化規(guī)律；③建立真菌自發(fā)熒光檢測、記錄的最佳條件；④探討通過檢測真菌的自發(fā)熒光進(jìn)行真菌病早期、快速診斷的可行性。 方法：選用糠秕馬拉色菌和日本馬拉色菌2株標(biāo)準(zhǔn)菌，接種在Dixon培養(yǎng)基32℃培養(yǎng)，分別在培養(yǎng)的第2、4、6、8、10天挑取菌落放在TCS-SP2型激光掃描共聚焦顯微鏡(Leica TCS-SP2 LSCM)下觀察、測定其自發(fā)熒光；分別用3％戊二醛溶液、pH4.0鹽酸溶液、10％氫氧化鉀溶液、1280μg／mL和64μg／mL氟康唑溶液、0.3％美藍(lán)溶液處理后觀察馬拉色菌自發(fā)熒光的變化；選擇白念珠菌、申克孢子絲菌、紅色毛癬菌、斷發(fā)毛癬菌、土曲霉、煙曲霉等用沙堡葡萄糖瓊脂培養(yǎng)后觀察其自發(fā)熒光的特點(diǎn)。 結(jié)果：糠秕馬拉色菌和日本馬拉色菌2株標(biāo)準(zhǔn)株的自發(fā)熒光強(qiáng)度分別在培養(yǎng)第4和8天時(shí)最強(qiáng)，菌落的自發(fā)熒光在1小時(shí)內(nèi)逐漸減弱；3％戊二醛溶液、pH4.0鹽酸溶液、1280μg／mL和64μg／mL氟康唑溶液、3％美藍(lán)溶液處理后馬拉色菌自發(fā)熒光都增強(qiáng)，10％氫氧化鉀溶液中的馬拉色菌在開始時(shí)熒光增強(qiáng)，2天后減弱；白念珠菌、申克孢子絲菌、紅色毛癬菌、斷發(fā)毛癬菌、土曲霉、煙曲霉等在培養(yǎng)條件下有自發(fā)熒光，但都較馬拉色菌弱。 結(jié)論：①不同菌屬、不同菌株的自發(fā)熒光不相同；②同一菌株在相同培養(yǎng)條件下不同時(shí)間自發(fā)熒光不同；③弱酸性和弱堿性環(huán)境可使馬拉色菌的自發(fā)熒光增強(qiáng)，10％氫氧化鉀溶液可使馬拉色菌的自發(fā)熒光在開始時(shí)增強(qiáng)，2天后減弱；④真菌的自發(fā)熒光與菌體的存活與否沒有關(guān)系；⑤白念珠菌、申克孢子絲菌、紅色毛癬菌、斷發(fā)毛癬菌、土曲霉、煙曲霉等具有自發(fā)熒光，強(qiáng)度較馬拉色菌弱；⑥絲狀菌的孢子比菌絲的自發(fā)熒光強(qiáng)。
【學(xué)位單位】：四川大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2007
【中圖分類】：R756
【部分圖文】：

32℃士臺養(yǎng)第2人，左:可見光卜圖像:‘1，:熒光圖像:右:兩圖介;i，)與七女f}放人了i芥數(shù)K60O)。圖2視」，f以培作第糠批‘今拉色l有C13S1878(了!)和}}木‘鄉(xiāng)拉色菌C359974(丫l)，抱護(hù))紅有自發(fā)熒光，}司l}}{貞/2分鐘的JI描速度進(jìn)行連續(xù)jl描，丫r_l小l{、」內(nèi)l‘l發(fā)熒光逐漸減弱〔Di、0.1」;;了補(bǔ)比，1人，共:31，}j貞夕I王成

1小時(shí)內(nèi)熒光均有所增強(qiáng)，表現(xiàn)為自發(fā)熒光弱的菌體、同一菌體內(nèi)自發(fā)熒光弱的部分逐漸增強(qiáng)，本來自發(fā)熒光強(qiáng)的菌體也有所增強(qiáng)。其中pH4.O鹽酸溶液的菌懸液增強(qiáng)最明顯(圖8，余略)。第2、5、10、20天時(shí)以1幀/30秒鐘的掃描速度對同一視野連續(xù)掃描5分種。取同時(shí)間的生理鹽水菌懸液及各菌懸液處理當(dāng)時(shí)的自發(fā)熒光強(qiáng)度作參照，pH4.0鹽酸溶液、0.3%堿性美藍(lán)溶液處理過馬拉色菌的熒光強(qiáng)度均有增強(qiáng)，10%氫氧化鉀溶液處理當(dāng)時(shí)自發(fā)熒光增強(qiáng)，之后熒光變?nèi)?圖9)。3%戊二醛溶液、1280林留mL和64林留mL氟康哇溶液均可以使馬拉色菌抱子的自發(fā)熒光增強(qiáng)(圖10)。2.馬拉色菌經(jīng)處理后自發(fā)熒光強(qiáng)度:馬拉色菌經(jīng)過上述方法處理當(dāng)時(shí)及處理后2、5、10、20天的熒光強(qiáng)度應(yīng)用 LeicaTCS一 SPZLSCM軟件測量，計(jì)算各觀察時(shí)間點(diǎn)馬拉色菌自發(fā)熒光強(qiáng)度的平均值(表4)，繪制自發(fā)熒光的變化趨勢(圖11)。

圖g糠桃馬拉色菌CBS1878(Dixon士高養(yǎng)基32℃培養(yǎng)，原始放大倍數(shù)x600)經(jīng)A‘聲}尹}‘鹽水)、B(pH4刃鹽酸)、C(03%堿性美藍(lán))、D(10%氖氧化鉀溶液)處理后O、2、5、10、2()天[}、jl‘]發(fā)熒光變化特點(diǎn)。

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2829733