發(fā)布時(shí)間：2020-09-17 09:59

　　 目的探討c-Jun氨基末端激酶1(JNK1)或JNK2過(guò)表達(dá)對(duì)人皮膚鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞SCL-1增殖和凋亡的影響及分子機(jī)制。方法將JNK1、JNK2分別與pHBAD-EF1-MCS-3flag-CMV-GFP載體結(jié)合,構(gòu)建JNK1和JNK2的重組腺病毒表達(dá)載體,轉(zhuǎn)染SCL-1細(xì)胞,優(yōu)化轉(zhuǎn)染條件,實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)(qPCR)和Western Blot技術(shù)鑒定過(guò)表達(dá)效果;CCK-8(cell counting kit-8)法測(cè)定SCL-1細(xì)胞的增殖活性,細(xì)胞克隆形成實(shí)驗(yàn)反應(yīng)細(xì)胞集落形成能力;細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞融合率;流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡水平;qPCR檢測(cè)JNK1、JNK2、c-Jun mRNA相對(duì)表達(dá)水平;Western blot法檢測(cè)磷酸化c-Jun的蛋白表達(dá)水平。結(jié)果成功構(gòu)建JNK1/JNK2過(guò)表達(dá)腺病毒載體;JNK1、JNK2過(guò)表達(dá)腺病毒載體最佳轉(zhuǎn)染條件為MOI=100,轉(zhuǎn)染48h;轉(zhuǎn)染后,SCL-1細(xì)胞的JNK1和JNK2的表達(dá)水平顯著升高(P0.05);與對(duì)照組相比,Ad-JNK1組細(xì)胞增殖和抗凋亡能力無(wú)顯著影響(P0.05),Ad-JNK2組細(xì)胞增殖和抗凋亡能力明顯增強(qiáng)(P0.05);JNK效應(yīng)蛋白c-Jun磷酸化蛋白表達(dá)水平上調(diào)。結(jié)論過(guò)表達(dá)JNK2可以增強(qiáng)SCL-1人皮膚鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞的增殖能力和抗凋亡能力。
【學(xué)位單位】：寧夏醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類(lèi)】：R739.5
【部分圖文】：

學(xué)碩士學(xué)位論文 清液，加入按 DMSO：FBS=1：9 比例配置的凍存液 1 mL，輕輕吹液裝入凍存管中，標(biāo)記細(xì)胞名稱(chēng)、凍存時(shí)間及操作者的姓名；存管放置 4℃冰箱中 20 min~30 min，隨后放入-20℃冰箱中 90 min0℃冰箱中過(guò)夜，第二天放入液氮罐中，長(zhǎng)期保存。、JNK2 腺病毒過(guò)表達(dá)載體的構(gòu)建重組技術(shù)，將 JNK1、JNK2 分別插入 pHBAD-EF1-MCS-3flag-CMV1 和 JNK2 序列均為人源 mRNA 序列（human JNK1；human JNK2）和目的基因信息

寧夏醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文 集脫落細(xì)胞懸液，用離心機(jī)，2000 rpm，離心 5 min，吸去上清液，加入 6 m培養(yǎng)基+10%FBS+2.5%甘油）的 ST buffer，渦旋震蕩混勻，凍融 3 次，用離心rpm 離心 5 min,收集上清液（P3）。○7 JNK1/JNK2 腺病毒感染性滴度檢測(cè)用改進(jìn)的病毒半數(shù)組織細(xì)胞感染量（5culture infective dose，TCID50）法。TCID50 法步驟如下：a 取細(xì)胞融合至 80%~90%的 293 細(xì)胞，吸去舊培養(yǎng)基，加入 PBS 溶液沖洗細(xì)胞消化細(xì)胞，按照每孔 1×105個(gè)細(xì)胞接種于兩塊 96 孔板中；b 對(duì) JNK1/JNK2 重組腺病毒樣品按梯度稀釋?zhuān)聪聢D在 96 孔板中加入稀釋樣

寧夏醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文 結(jié)果結(jié)果1 成功構(gòu)建JNK1和JNK2基因過(guò)表達(dá)質(zhì)粒并包裝入腺病毒1.1構(gòu)建質(zhì)粒后，漢恒生物科技（上海）公司測(cè)序結(jié)果與目的序列完全匹配，驗(yàn)證JNK1/JNK2目的片段已克隆入載體中（圖3、圖4）

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本文編號(hào)：2820572