銀屑病是一種多基因遺傳背景下內(nèi)外因素失衡導(dǎo)致的慢性炎癥性皮膚病,盡管目前對(duì)許多觸發(fā)銀屑病發(fā)生的確切機(jī)制仍未闡明,大量臨床及實(shí)驗(yàn)研究顯示T淋巴細(xì)胞在銀屑病發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮重要作用。國(guó)內(nèi)外研究表明銀屑病的免疫異常不僅涉及T淋巴細(xì)胞,而且其它多種血細(xì)胞如B細(xì)胞、單核細(xì)胞、中性粒細(xì)胞甚至紅細(xì)胞及血小板的數(shù)量及活性異常均參與銀屑病發(fā)病,由于所有血細(xì)胞均來(lái)源于骨髓,國(guó)內(nèi)學(xué)者首先提出骨髓的異常在銀屑病發(fā)病中起到重要作用。最近一些研究主要集中于銀屑病患者骨髓造血干細(xì)胞的生物學(xué)活性,但對(duì)銀屑病患者骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(bone mesenchymal stem cell,BMSC)的生物學(xué)特性及由其分化來(lái)的骨髓基質(zhì)細(xì)胞所組成的造血微環(huán)境是否存在異常罕見(jiàn)報(bào)道。 目的:研究銀屑病患者BMSC的細(xì)胞形態(tài),表面標(biāo)志和生長(zhǎng)曲線等生物學(xué)特性,檢測(cè)銀屑病患者外周血和骨髓中造血抑制因子IFN-γ,TNF-α水平,及IFN-γ,TNF-α水平與病情活動(dòng)程度,病程的關(guān)系,試圖探討銀屑病患者BMSC有無(wú)異常,骨髓微環(huán)境的改變及其在銀屑病發(fā)病中的可能作用。 方法:密度梯度離心法分離培養(yǎng)骨髓單個(gè)核細(xì)胞,貼壁純化法得到BMSC,鏡下觀察BMSC形態(tài),密度,生長(zhǎng)情況,流式細(xì)胞儀鑒定BMSC表面抗原,MTT法繪出生長(zhǎng)曲線。設(shè)立對(duì)照組用雙抗體夾心(ELISA)法分別檢測(cè)銀屑病患者外周血血漿,外周血單個(gè)核細(xì)胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)培養(yǎng)上清,骨髓上清液及骨髓基質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)上清中IFN-γ,TNF-α水平,采用SPSS12.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行t檢驗(yàn)。銀屑病外周血,骨髓IFN-γ,TNF-α水平與PASI評(píng)分和病程之間進(jìn)行相關(guān)分析(Spearman Rank Order Correlation)。 結(jié)果:正常對(duì)照和銀屑病患者BMSC原代細(xì)胞在細(xì)胞形態(tài)上無(wú)明顯差異,但銀屑病組骨髓細(xì)胞貼壁晚,融合速度慢,培養(yǎng)時(shí)間長(zhǎng)。傳代后細(xì)胞形態(tài)沒(méi)有顯示出差異。經(jīng)鑒定兩者BMSC細(xì)胞表面CD29表達(dá)均為陽(yáng)性,CD34,CD45表達(dá)均為陰性。從生長(zhǎng)曲線上可以看出,銀屑病患者BMSC P2代第4d起較正常對(duì)照表現(xiàn)出較低的增殖活性。與正常人相對(duì)照,銀屑病外周血血漿,PBMC培養(yǎng)上清,骨髓上清液及骨髓基質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)上清中造血抑制因子IFN-γ水平明顯升高,而TNF-α除在骨髓基質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)上清沒(méi)有差異(P0.05),在其余三組中的水平都較對(duì)照組升高。 結(jié)論: 1銀屑病患者BMSC細(xì)胞顯示出較低的增殖活性,BMSC的形態(tài)與對(duì)照組沒(méi)有顯著性差異。 2銀屑病患者骨髓微環(huán)境中造血抑制因子IFN-γ,TNF-α較正常對(duì)照組升高。 3銀屑病患者骨髓微環(huán)境的改變可能與外周血細(xì)胞分泌異常細(xì)胞因子有關(guān)。 4銀屑病外周血,骨髓中IFN-γ,TNF-α水平與病情活動(dòng)程度呈正相關(guān),與病程沒(méi)有相關(guān)性。
【學(xué)位單位】：大連醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2008
【中圖分類】：R758.63
【部分圖文】：

對(duì)照組 銀屑病組圖 2 對(duì)照組和銀屑病組 BMSC 原代培養(yǎng) 10d(×100 倍)，圖中圓形細(xì)胞減少，細(xì)胞多變形為梭形細(xì)胞并開(kāi)始呈集落生長(zhǎng)，較對(duì)照組銀屑病患者組細(xì)胞形態(tài)沒(méi)有差別，但細(xì)胞稀疏，尚沒(méi)有集落生長(zhǎng)。對(duì)照組 銀屑病組圖 3 對(duì)照組和銀屑病組 BMSC 原代培養(yǎng) 20d(×100 倍)，細(xì)胞基本融合，呈漩渦狀排列，有明顯的方向性，較對(duì)照組銀屑病患者組細(xì)胞沒(méi)有完全融合。

圖 1 對(duì)照組和銀屑病組 BMSC 原代培養(yǎng) 3d(×100 倍)，圖中細(xì)胞呈圓形，扁圓形，少數(shù)細(xì)胞呈短梭形，針尖狀生長(zhǎng),其中較對(duì)照組銀屑病患者細(xì)細(xì)胞形態(tài)相似，但細(xì)胞貼壁晚，變形慢等特點(diǎn)。對(duì)照組 銀屑病組圖 2 對(duì)照組和銀屑病組 BMSC 原代培養(yǎng) 10d(×100 倍)，圖中圓形細(xì)胞減少，細(xì)胞多變形為梭形細(xì)胞并開(kāi)始呈集落生長(zhǎng)，較對(duì)照組銀屑病患者組細(xì)胞形態(tài)沒(méi)有差別，但細(xì)胞稀疏，尚沒(méi)有集落生長(zhǎng)。

對(duì)照組 銀屑病組圖 1 對(duì)照組和銀屑病組 BMSC 原代培養(yǎng) 3d(×100 倍)，圖中細(xì)胞呈圓形，扁圓形，少數(shù)細(xì)胞呈短梭形，針尖狀生長(zhǎng),其中較對(duì)照組銀屑病患者細(xì)細(xì)胞形態(tài)相似，但細(xì)胞貼壁晚，變形慢等特點(diǎn)。對(duì)照組 銀屑病組圖 2 對(duì)照組和銀屑病組 BMSC 原代培養(yǎng) 10d(×100 倍)，圖中圓形細(xì)胞減少，細(xì)胞多變形為梭形細(xì)胞并開(kāi)始呈集落生長(zhǎng)，較對(duì)照組銀屑病患者組細(xì)胞形態(tài)沒(méi)有差

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2819104