應(yīng)用細(xì)胞內(nèi)PCR技術(shù)克隆白癜風(fēng)自身抗體基因的研究
發(fā)布時(shí)間:2020-08-31 22:03
白癜風(fēng)的病因和發(fā)病機(jī)理尚未完全闡明,有證據(jù)表明,抗黑素細(xì)胞自身抗體的產(chǎn)生在白癜風(fēng)的發(fā)生與發(fā)展過(guò)程中起重要作用。受研究方法的限制,迄今對(duì)白癜風(fēng)相關(guān)自身抗體基因的認(rèn)識(shí)十分有限。噬菌體抗體庫(kù)技術(shù)是抗體研究領(lǐng)域的重要突破,通過(guò)擴(kuò)增免疫球蛋白基因并使其在噬菌體表面展示而構(gòu)建抗體庫(kù),可以方便地篩選到特異性抗體。然而獲得的抗體基因是體外的隨機(jī)組合,并不是體內(nèi)原本的輕重鏈搭配,在自身抗體基因的研究上存在較大的局限性。細(xì)胞內(nèi)PCR(In-Cell PCR)技術(shù)可獲得親本配對(duì)的抗原結(jié)合單位,從而得到編碼抗體基因的準(zhǔn)確信息,對(duì)于自身免疫性抗體的研究具有極廣闊的前景。 在本課題中,我們培養(yǎng)了大量正常人的黑素細(xì)胞,經(jīng)相差顯微鏡觀(guān)察細(xì)胞形態(tài),多巴染色鑒定,保證較高的黑素細(xì)胞純度,將其作為抗原,以活細(xì)胞ELISA法和Westonblot法對(duì)50余名白癜風(fēng)患者的血
【學(xué)位單位】:第四軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】:碩士
【學(xué)位年份】:2005
【中圖分類(lèi)】:R758.41
【部分圖文】:
第四軍醫(yī)大學(xué)碩士學(xué)位論文黑素細(xì)胞(X10)黑素細(xì)胞(x20)圖2黑素細(xì)胞相差顯微鏡下形態(tài)學(xué)觀(guān)察黑素細(xì)胞(x20)黑素細(xì)胞(X40)圖3黑素細(xì)胞爬片多巴染色陽(yáng)性12血清篩選結(jié)果50份白癱風(fēng)血清中,29例是1:40陽(yáng)性,其中1:80陽(yáng)性的是18例,達(dá)到1:160陽(yáng)性只有7例。這7例患者均為尋常型,從白斑表面積來(lái)看,大面積1例,中等面積2例,小面積4例。正常對(duì)照只有1:40滴度出現(xiàn)1例。選擇這7例抗黑素細(xì)胞膜的強(qiáng)陽(yáng)性glG進(jìn)行westnoblot檢測(cè)抗體的特異性。.33特異性血清篩選結(jié)果黑素細(xì)胞可溶性抗原加入蛋白酶抑制劑
黑素細(xì)胞(x20)黑素細(xì)胞(X40)圖3黑素細(xì)胞爬片多巴染色陽(yáng)性12血清篩選結(jié)果50份白癱風(fēng)血清中,29例是1:40陽(yáng)性,其中1:80陽(yáng)性的是18例,達(dá)到1:160陽(yáng)性只有7例。這7例患者均為尋常型,從白斑表面積來(lái)看,大面積1例,中等面積2例,小面積4例。正常對(duì)照只有1:40滴度出現(xiàn)1例。選擇這7例抗黑素細(xì)胞膜的強(qiáng)陽(yáng)性glG進(jìn)行westnoblot檢測(cè)抗體的特異性。.33特異性血清篩選結(jié)果黑素細(xì)胞可溶性抗原加入蛋白酶抑制劑,經(jīng)SDS一APGE按其分子量大小予以分離,
10%505一尸AGE。,:標(biāo)準(zhǔn)低分子人黑素細(xì)胞抗體的白癱風(fēng)血清通滴度陽(yáng)性血清患者均有陽(yáng)性條帶,條帶,白癱風(fēng)患者明顯高于對(duì)照陽(yáng)性gIG血清的患者的B淋巴
本文編號(hào):2809382
【學(xué)位單位】:第四軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】:碩士
【學(xué)位年份】:2005
【中圖分類(lèi)】:R758.41
【部分圖文】:
第四軍醫(yī)大學(xué)碩士學(xué)位論文黑素細(xì)胞(X10)黑素細(xì)胞(x20)圖2黑素細(xì)胞相差顯微鏡下形態(tài)學(xué)觀(guān)察黑素細(xì)胞(x20)黑素細(xì)胞(X40)圖3黑素細(xì)胞爬片多巴染色陽(yáng)性12血清篩選結(jié)果50份白癱風(fēng)血清中,29例是1:40陽(yáng)性,其中1:80陽(yáng)性的是18例,達(dá)到1:160陽(yáng)性只有7例。這7例患者均為尋常型,從白斑表面積來(lái)看,大面積1例,中等面積2例,小面積4例。正常對(duì)照只有1:40滴度出現(xiàn)1例。選擇這7例抗黑素細(xì)胞膜的強(qiáng)陽(yáng)性glG進(jìn)行westnoblot檢測(cè)抗體的特異性。.33特異性血清篩選結(jié)果黑素細(xì)胞可溶性抗原加入蛋白酶抑制劑
黑素細(xì)胞(x20)黑素細(xì)胞(X40)圖3黑素細(xì)胞爬片多巴染色陽(yáng)性12血清篩選結(jié)果50份白癱風(fēng)血清中,29例是1:40陽(yáng)性,其中1:80陽(yáng)性的是18例,達(dá)到1:160陽(yáng)性只有7例。這7例患者均為尋常型,從白斑表面積來(lái)看,大面積1例,中等面積2例,小面積4例。正常對(duì)照只有1:40滴度出現(xiàn)1例。選擇這7例抗黑素細(xì)胞膜的強(qiáng)陽(yáng)性glG進(jìn)行westnoblot檢測(cè)抗體的特異性。.33特異性血清篩選結(jié)果黑素細(xì)胞可溶性抗原加入蛋白酶抑制劑,經(jīng)SDS一APGE按其分子量大小予以分離,
10%505一尸AGE。,:標(biāo)準(zhǔn)低分子人黑素細(xì)胞抗體的白癱風(fēng)血清通滴度陽(yáng)性血清患者均有陽(yáng)性條帶,條帶,白癱風(fēng)患者明顯高于對(duì)照陽(yáng)性gIG血清的患者的B淋巴
【參考文獻(xiàn)】
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1 李濤;Cre/loxP系統(tǒng)與時(shí)空特異性基因打靶[J];國(guó)外醫(yī)學(xué).遺傳學(xué)分冊(cè);2001年04期
2 康向東,陳順樂(lè),鮑春德,顧越英,沈南,薛峰,俞憧昭;SLE患者自身抗體單鏈?zhǔn)删w抗體庫(kù)構(gòu)建及抗體活性檢測(cè)[J];上海免疫學(xué)雜志;1999年01期
3 袁清安,韓素文,俞煒源,孔德清,賀秉坤;細(xì)胞內(nèi)PCR法克隆抗體可變區(qū)基因[J];生物技術(shù)通訊;2001年02期
4 康向東,鄭捷;噬菌體展示技術(shù)構(gòu)建尋常型天皰瘡患者橋粒芯糖蛋白3抗體文庫(kù)[J];中華皮膚科雜志;2001年01期
5 李強(qiáng),高天文,李春英,盧濤,王秋楓;白癜風(fēng)相關(guān)黑素細(xì)胞膜抗原的檢測(cè)及分析[J];中華皮膚科雜志;2003年02期
本文編號(hào):2809382
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