發(fā)布時(shí)間：2020-08-29 11:09

　　 研究背景及目的黑色素瘤(melanoma)是一種起源于外胚葉神經(jīng)嵴黑素細(xì)胞的高度惡性的腫瘤,在所有惡性腫瘤中約占1.5%,四肢、皮膚、肛門、外陰是發(fā)生率較高的部位。我國(guó)黑色素瘤發(fā)生部位以皮膚最為常見,其次為黏膜來源,其他部位相對(duì)少見。皮膚黑色素瘤(cutaneous melanoma,CM)是源于表皮正常黑素細(xì)胞或原有痣細(xì)胞的一種惡性程度極高的腫瘤,早期易發(fā)生局部淋巴結(jié)的轉(zhuǎn)移,晚期可通過血流途徑轉(zhuǎn)移至遠(yuǎn)處皮膚、肝、腦及肺等,對(duì)放化療均不敏感,預(yù)后差。由于皮膚惡性黑色瘤的預(yù)后差,高發(fā)病率和死亡率,嚴(yán)重影響人類的健康和生存質(zhì)量。臨床實(shí)驗(yàn)研究證實(shí)黑色素瘤的發(fā)生、發(fā)展涉及多種分子和信號(hào)傳導(dǎo)途徑參與的復(fù)雜病理機(jī)制,并有環(huán)境因素參與其中。研究皮膚黑色素瘤的相關(guān)發(fā)病因素和具體機(jī)制,將為其臨床診治提供可靠的理論依據(jù)。Notch基因因1919年在果蠅體內(nèi)發(fā)現(xiàn)該基因的部分功能缺失會(huì)在果蠅翅膀的邊緣造成缺口(notch)而得名,Notch信號(hào)傳導(dǎo)通路由4種Notch基因受體(Notchl,2,3,4)、5種配體(DLL1、DLL3、DLL4、JAG1、JAG2)和CSL(一類DNA結(jié)合蛋白)組成。當(dāng)Notch配體和相鄰細(xì)胞的受體結(jié)合后,蛋白酶體切割Notch基因并釋放具有核定位信號(hào)的胞質(zhì)區(qū)(intracellular domain of Notch,ICN),隨后進(jìn)入細(xì)胞核內(nèi)與CLS(一類DNA結(jié)合蛋白)結(jié)合,從而調(diào)節(jié)基因表達(dá)。近年的研究發(fā)現(xiàn),Notch信號(hào)通路改變與代謝性疾病、內(nèi)分泌疾病、遺傳性疾病以及腫瘤(包括黑色素瘤)等多種疾病的發(fā)生發(fā)展有密切關(guān)系。腫瘤血管新生因可以滿足腫瘤生長(zhǎng)的代謝需要并為遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移提供血管通路,被認(rèn)為參與腫瘤的進(jìn)展、侵襲和轉(zhuǎn)移,并且通常被接受為腫瘤預(yù)后的指標(biāo),VEGF及其受體VEGFR被公認(rèn)是血管新生過程中最有特征性和代表性的調(diào)節(jié)信號(hào),通過多個(gè)信號(hào)通路調(diào)控血管基底膜分解及足體環(huán)的形成、促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞增殖和遷移、參與血管網(wǎng)絡(luò)的形成與成熟重構(gòu)等一系列復(fù)雜的血管生成過程發(fā)揮作用。微血管密度(MVD)是定量衡量腫瘤中血管生成程度的指標(biāo),作為侵襲性腫瘤生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移的真實(shí)預(yù)測(cè)因子影響患者的生存,用CD34單克隆抗體標(biāo)記可以準(zhǔn)確預(yù)測(cè)微血管數(shù)。Notch1和VEGF之間可能存在單向信號(hào)調(diào)控或環(huán)狀調(diào)控通路,協(xié)調(diào)促進(jìn)黑色素瘤的血管生成�？赡軝C(jī)制為:VEGF激活VEGFR1、VEGFR2后,通過下游PI3K/Akt信號(hào)級(jí)聯(lián)通路,上調(diào)Notch1和Dll4的表達(dá);而Dll4/Notch可能通過HSER1(HEY1)調(diào)節(jié)內(nèi)皮細(xì)胞膜上的VEGFR2受體數(shù)量來負(fù)反饋調(diào)節(jié)VEGF信號(hào)通路。另外,有報(bào)告指出缺氧可上調(diào)Notch1的表達(dá),Notch1基因與缺氧誘導(dǎo)因子1α(IF-1α)基因(一種在缺氧期間穩(wěn)定的轉(zhuǎn)錄因子)簇合,該轉(zhuǎn)錄因子激活了幾種VEGF等幾種血管生成基因。但是,二者具體機(jī)制仍未闡明。Notch1和VEGF在黑色素瘤的發(fā)生發(fā)展中具有協(xié)同作用,在一定程度上提示黑色素瘤的生物學(xué)行為,可能為黑色素瘤的不良預(yù)后因子。目前,已有多項(xiàng)關(guān)于Notch1及Notch信號(hào)通路與皮膚黑色素瘤關(guān)系的研究,但是,人們對(duì)于皮膚黑色素瘤中Notch1的作用觀點(diǎn)并不一致,仍需進(jìn)一步探討和明確。另外,關(guān)于Notch1和VEGF在黑色素瘤中的表達(dá)相關(guān)性及與血管新生的關(guān)系報(bào)道相對(duì)較少。本研究擬通過檢測(cè)Notch1、VEGF及MVD計(jì)數(shù)在皮膚黑色素瘤和皮內(nèi)痣中的表達(dá),旨在明確Notch1與VEGF、MVD計(jì)數(shù)在皮膚黑色素瘤組織中的相關(guān)性及其與臨床病理特征關(guān)系,探討其在黑色素瘤臨床治療中的意義。方法1.采用免疫組化SP方法分別檢測(cè)Notch1、VEGF在78例CM組織、40例皮內(nèi)痣組織中的表達(dá)以及CD34標(biāo)記的MVD(CD34-MVD)計(jì)數(shù)情況;2.應(yīng)用SPSS19.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,認(rèn)為P0.05具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。采用χ~2檢驗(yàn)分析Notch1、VEGF在CM和皮內(nèi)痣中的表達(dá)差異;采用獨(dú)立樣本的T檢驗(yàn)分析CD34-MVD計(jì)數(shù)在CM和皮內(nèi)痣中的表達(dá)差異;采用2×2配對(duì)資料的關(guān)聯(lián)性分析分析CM組織中Notch1和VEGF表達(dá)的相關(guān)性;采用Spearman相關(guān)性分析分析CM中Notch1的表達(dá)和和CD34-MVD計(jì)數(shù)的相關(guān)性;3.應(yīng)用Spearman相關(guān)分析分別分析Notch1、VEGF、CD34-MVD計(jì)數(shù)情況與CM臨床病理特征的關(guān)系。結(jié)果1.皮膚黑色素瘤、皮內(nèi)痣中Notch1、VEGF的表達(dá)和CD34-MVD計(jì)數(shù)情況及差異性分析Notch1以細(xì)胞膜或胞漿出現(xiàn)棕黃色顆粒樣物質(zhì)為表達(dá)陽性,也可少量表達(dá)于黑色素瘤組織細(xì)胞核中;VEGF表達(dá)于黑色素瘤細(xì)胞和少數(shù)血管內(nèi)皮細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì),以胞漿或細(xì)胞膜內(nèi)出現(xiàn)均勻棕黃色顆粒為陽性細(xì)胞;CD34多見于癌組織與周圍組織邊緣浸潤(rùn)區(qū)域,主要著色于血管內(nèi)皮細(xì)胞的胞漿,在腫瘤組織的微血管中表達(dá)較強(qiáng),在皮內(nèi)痣組織也有陽性表達(dá)。Notch1在黑色素瘤、皮內(nèi)痣中表達(dá)的陽性率分別為84.6%(66/78)、27.5%(11/40),χ~2檢驗(yàn)顯示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05);VEGF在黑色素瘤、皮內(nèi)痣中表達(dá)的陽性率分別為69.2%(54/78)、40.0%(16/40),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05);CD34-MVD計(jì)數(shù)在黑色素瘤和皮內(nèi)痣中表達(dá)分別為32.10±8.97、13.05±6.66,獨(dú)立樣本的T檢驗(yàn)顯示CD34-MVD在黑色素瘤和皮內(nèi)痣中的表達(dá)差異同樣具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)2.皮膚黑色素瘤組織中Notch1的表達(dá)和VEGF、CD34-MVD計(jì)數(shù)的相關(guān)性分析2×2配對(duì)資料的關(guān)聯(lián)性分析表明Notch1和VEGF表達(dá)具有相關(guān)性(r=0.283,p=0.012);Spearman相關(guān)性分析表明Notch1和CD34-MVD計(jì)數(shù)相關(guān)(r=0.495,p=0.000)。Notch1的表達(dá)與兩者均為正相關(guān)。3.Notch1、VEGF和CD34-MVD與黑色素瘤臨床病理因素的關(guān)系Spearman相關(guān)性分析顯示與ClarkI~Ⅱ級(jí)黑色素瘤患者相比,Notch1在ClarkⅢ~Ⅳ級(jí)黑色素瘤患者中Notch1陽性表達(dá)率顯著升高(89.1%vs 35.7%,χ2=5.417,p0.05),差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移特征中,Notch1陽性表達(dá)率在轉(zhuǎn)移組較原位組升高(92.2%vs 70.4%,χ2=6.437,p0.05),差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。同樣的,VEGF和CD34-MVD在ClarkⅢ~Ⅳ級(jí)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組和ClarkI~Ⅱ級(jí)、原位組比較有更高表達(dá)率和微血管密度,差異同樣具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。統(tǒng)計(jì)分析顯示Notch1、VEGF和CD34-MVD在性別、年齡、腫瘤部位及直徑方面雖有差異性表達(dá),卻均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。結(jié)論1.Notch1可能與皮膚黑色素瘤的發(fā)生發(fā)展和轉(zhuǎn)移有關(guān);2.在Notch1和VEGF之間可能存在單向信號(hào)調(diào)控或環(huán)狀調(diào)控通路,從而在黑色素瘤血管新生中共同發(fā)揮重要作用;3.活化的Notch1抑制劑可通過阻斷腫瘤相關(guān)的血管形成來提供治療黑色素瘤的策略。
【學(xué)位單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：R739.5
【部分圖文】：

圖 1 Notch1、VEGF在皮膚黑色素瘤、皮內(nèi)痣中的表達(dá)（SP×400）Fig1 The expression of Notch1,VEGF in CM and Intradermal nevus(SP×400）注：ⅠA、ⅠB、ⅠC 分別是 Notch1在 CM組織中的陰性表達(dá)、弱陽性表達(dá)、陽性表達(dá)；ⅡA、ⅡB、ⅡC分別是 VEGF在 CM織中的陰性表達(dá)、弱陽性表達(dá)、陽性表達(dá)；ⅢA、ⅢB、ⅢC分別是 Notch1在皮內(nèi)痣組織中的陰性表達(dá)、弱陽性表達(dá)、陽性表達(dá)；ⅣA、ⅣB、ⅣC分別是 VEGF 在皮內(nèi)痣組織中的陰性表達(dá)、弱陽性表達(dá)、陽性表達(dá)；ⅤA、ⅤB分別是 CD34-MVD在 CM 和皮內(nèi)痣中表達(dá)。表 1 Notch1、VEGF和 CD34-MVD在皮膚黑色素瘤、皮內(nèi)痣中的表達(dá)率比較[例(%)]Tab 1 Differential expression of Notch1,VEGF and CD31 in CM and intradermal nevus分組 例數(shù) Notch1 VEGF CD34-MVD黑色素瘤 78 66（84.6） 54（69.2） 32.10±8.97皮內(nèi)痣 40 11（27.5） 16（40.0） 13.05±6.66 2值 38.042 9.362 —P 值 0.000 0.002 0.0002 皮膚黑色素瘤組織中 Notch1 和 VEGF 表達(dá)、CD34-MVD 計(jì)數(shù)的相關(guān)性分析2×2 配對(duì)資料的關(guān)聯(lián)性分析表明黑色素瘤組織中 Notch1 和 VEGF 表達(dá)呈正相

皮膚黑色素瘤是惡性程度最高的皮膚腫瘤，腫瘤細(xì)胞浸潤(rùn)和重要臟器的轉(zhuǎn)是造成死亡的主要原因。黑色素瘤的發(fā)生發(fā)展涉及多種分子和信號(hào)傳導(dǎo)途徑復(fù)雜病理機(jī)制，并有環(huán)境因素參與其中。相關(guān)信號(hào)通路關(guān)鍵分子的基因突變達(dá)是研究的重點(diǎn)。闡明 CM 發(fā)生的分子機(jī)制對(duì)于現(xiàn)有的治療措施是非常必要Notch 信號(hào)通路的異常可以致使機(jī)體功能調(diào)節(jié)紊亂，導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生。在otch 信號(hào)通路中，配體與受體的結(jié)合可導(dǎo)致受體構(gòu)象改變，胞外域（ECN）的壞死因子-α-轉(zhuǎn)化酶（TACE）金屬蛋白酶切割位點(diǎn)暴露，在 TACE作用下發(fā)生，配體表達(dá)細(xì)胞吞噬切割后的 Notch胞外段游離的 N 端裂解片段，在 γ-分泌酶γ-secretase）的作用下進(jìn)一步剪切受體細(xì)胞胞內(nèi)的 C 端裂解片段，釋放出α受化形式（NCID/ICN）并游離于胞質(zhì)中，活化的 NCID轉(zhuǎn)移至細(xì)胞核內(nèi)，與轉(zhuǎn)B 抑制因子 RPB-JK（也稱 CSL/CB-F1）和共活化物 Co-A（MAML、組蛋白乙轉(zhuǎn)移酶 P300/CBP）結(jié)合后，成為轉(zhuǎn)錄活化因子，進(jìn)而活化 Hes1等分化拮抗基招募轉(zhuǎn)錄共抑制因子如 Groucho/TLE等，阻礙細(xì)胞特異性分化效應(yīng)基因的表響細(xì)胞的分化、增殖和凋亡[32]。 Hes1是一種轉(zhuǎn)錄抑制因子，是 Notch1的下基因，可維持細(xì)胞未分化狀態(tài)以保持足夠的增殖細(xì)胞數(shù)目[33]。具體機(jī)制見

23圖 3 Notch 信號(hào)通路受體結(jié)構(gòu)域的差異[8]Figure1 Differences in receptor domains of Notch signaling pathway人的 Notch 同源配體有 Delta 樣配體(Dll1、Dll3、Dll4)和 Serrate 樣配體(Jagged1、Jagged2)[9]，也屬于 I 型單次跨膜蛋白，包含細(xì)胞外和細(xì)胞內(nèi)結(jié)構(gòu)域。胞外域包括一個(gè)保守的 N 端區(qū)域、一個(gè)富含半胱氨酸的 DSL 區(qū)域(Delta,Serratea

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4 鄭e

本文編號(hào)：2808472