【摘要】：目的:探討血小板源性生長(zhǎng)因子受體α(PDGFRα)對(duì)過(guò)氧化氫(H_2O_2)誘導(dǎo)的黑素細(xì)胞凋亡的影響。方法:以黑素細(xì)胞PIGI為研究對(duì)象,分別用不同濃度的H_2O_2作用后,用MTT法檢測(cè)細(xì)胞活力,并計(jì)算半數(shù)抑制濃度。經(jīng)H_2O_2處理的PIGI細(xì)胞轉(zhuǎn)染空載體p CMV6或PDGFRα過(guò)表達(dá)載體p CMV6-PDGFRα,以不做轉(zhuǎn)染的細(xì)胞為空白對(duì)照,RT-q PCR和Western blot檢測(cè)轉(zhuǎn)染效率。用半數(shù)抑制濃度的H_2O_2作用于過(guò)表達(dá)PDGFRα的PIGI細(xì)胞,MTT法檢測(cè)細(xì)胞活力,繪制細(xì)胞生長(zhǎng)曲線;流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡情況;Western blot檢測(cè)細(xì)胞中p38、磷酸化p38(p-p38)和cleaved caspase-3的蛋白水平;二氯二氫熒光素二乙酸酯(DCDHF-DA)法檢測(cè)細(xì)胞中活性氧簇(ROS)水平。結(jié)果:H_2O_2作用后PIGI細(xì)胞生長(zhǎng)減慢,細(xì)胞凋亡率升高,細(xì)胞中ROS水平、p-p38和cleaved caspase-3蛋白水平升高(P0.05),H_2O_2的半數(shù)抑制濃度為0.7 mmol/L。PDGFRα過(guò)表達(dá)載體能夠成功上調(diào)PIGI細(xì)胞中PDGFRα的mRNA和蛋白水平(P0.05)。過(guò)表達(dá)PDGFRα后經(jīng)過(guò)H_2O_2處理的PIGI細(xì)胞存活率升高(P0.05),細(xì)胞凋亡率下降(P0.05),細(xì)胞中的ROS水平下降(P0.05),p-p38和cleaved caspase-3蛋白水平降低(P0.05)。結(jié)論:PDGFRα能夠抑制H_2O_2誘導(dǎo)的黑素細(xì)胞凋亡,部分逆轉(zhuǎn)H_2O_2對(duì)黑素細(xì)胞增殖的抑制作用,降低細(xì)胞中的ROS水平,其作用機(jī)制可能與p-p38和cleaved caspase-3蛋白水平的變化有關(guān)。
【圖文】：

＜0.01);PDGFＲα組凋亡率明顯低于control組(P＜0.01)，見(jiàn)圖4。這提示H2O2處理后細(xì)胞凋亡增多，而過(guò)表達(dá)PDGFＲα能夠抑制H2O2誘導(dǎo)的PIGI細(xì)胞凋亡。Figure3．TheeffectofPDGFＲαonthecellproliferation．A:thecellgrowthcurve;B:thechangesofcellviability．Mean±SD．n=3．＆P＜0.05vsnormalgroup;*P＜0.05vscontrolgroup．圖3PDGFＲα對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)的影響Figure4．TheeffectofPDGFＲαontheapoptosisofPIGIcells．Mean±SD．n=3．＆P＜0．05vsnormalgroup;*P＜0.05vscontrolgroup．圖4PDGFＲα對(duì)細(xì)胞凋亡的影響5PDGFＲα對(duì)細(xì)胞中ＲOS水平的影響Normal組、control組、negative組和PDGFＲα組的ＲOS水平依次為1.01±0.14、3.30±0.25、3.31±1.10和2.79±0.14。Control組、negative組和PDGFＲα組的ＲOS水平均高于normal組(P＜0.01);PDGFＲα組水平低于control組(P＜0.05)，見(jiàn)圖5。這表明過(guò)表達(dá)PDGFＲα能夠部分抑制H2O2導(dǎo)致的ＲOS水平升高。6PDGFＲα對(duì)細(xì)胞中p38、p-p38和cleavedcaspase-3蛋白水平的影響Westernblot結(jié)果顯示，control組p-p38和cleavedcaspase-3的蛋白水平明顯高于normal組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);PDGFＲα組p-p38和cleavedcaspase-3的蛋白水平明顯低于control組，差·2063·

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本文編號(hào)：2793437