【摘要】：第一部分 光化學(xué)療法的體外抗血管新生作用研究 目的 光化學(xué)療法已被廣泛應(yīng)用于銀屑病的治療中,然而其治療機(jī)制尚未明了。銀 屑病已經(jīng)被確定為一種血管新生相關(guān)性疾病,近來的研究提示抗血管新生效應(yīng)可 能為光化學(xué)療法有效治療銀屑病的潛在機(jī)制,在角質(zhì)形成細(xì)胞中的研究發(fā)現(xiàn)光化 學(xué)療法可下調(diào)多種促血管新生因子的表達(dá),然而其對內(nèi)皮細(xì)胞的直接作用尚未研 究。本研究的目的在于觀察光化學(xué)療法對于內(nèi)皮細(xì)胞的直接作用并闡明其抗血管 新生機(jī)制。 方法 1. 應(yīng)用MTT法和細(xì)胞周期分析觀察了光化學(xué)療法對于內(nèi)皮細(xì)胞增殖的影 響。 2. 應(yīng)用遷移試驗(yàn)和體外管腔形成試驗(yàn)觀測了光化學(xué)療法對于內(nèi)皮細(xì)胞遷移 及管腔形成能力的影響。 3. 應(yīng)用流式細(xì)胞技術(shù)觀測了光化學(xué)療法對于內(nèi)皮細(xì)胞凋亡的影響 4. 為觀察光化學(xué)療法對內(nèi)皮細(xì)胞促血管新生因子表達(dá)的影響,我們應(yīng)用 RT-PCR的方法檢測了處理前后內(nèi)皮細(xì)胞整合素αⅤβ3、明膠酶及血管生成 素-2 mRNA的變化。 5. 分別應(yīng)用流失細(xì)胞技術(shù)及酶聯(lián)免疫試驗(yàn)檢測了光化學(xué)療法對于內(nèi)皮細(xì)胞 整合素αⅤβ3和血管生成素-2蛋白表達(dá)的影響,同時(shí)應(yīng)用明膠酶譜法分析 了光化學(xué)療法處理后對于明膠酶活性的影響。 結(jié)果 1. UVA (0.8-5.0 J/cm2)聯(lián)合8-MOP(300ng/ml)可明顯抑制內(nèi)皮細(xì)胞的增殖。 2. 流失細(xì)胞儀分析的結(jié)果證實(shí)經(jīng)UVA (0.8-5.0 J/cm2)和補(bǔ)骨脂素處理后內(nèi) 皮細(xì)胞停滯于G0/G1期同時(shí)伴凋亡增加。 3. 經(jīng)光化學(xué)療法處理的內(nèi)皮細(xì)胞遷移及管腔形成能力明顯下降。 4. UVA (2.0-5.0 J/cm2)聯(lián)合8-MOP(300ng/ml)可下調(diào)整合素αⅤβ3 mRNA及蛋 白的表達(dá)。在 5.0 J/cm2劑量組,對整合素αⅤ表達(dá)抑制率分別為(23.43±8.64) % (bFGF誘導(dǎo)) 和 (26.73±7.99) % (PMA 誘導(dǎo));對整合素β3 mRNA表達(dá) 抑制率分別為(31.15±11.25) % (bFGF誘導(dǎo)) 和 (10.75±8.87) % (PMA 1 WP=6 博士研究生學(xué)位論文 中文摘要 誘導(dǎo));對整合素αⅤβ3蛋白表達(dá)的抑制率分別為(38.75±10.22)% (bFGF誘 導(dǎo)) 和 (72.21±5.47 ) % (PMA 誘導(dǎo))。 5. 光化學(xué)療法可下調(diào)明膠酶的mRNA表達(dá)及活性。在 5.0 J/cm2劑量組,對 明膠酶A mRNA表達(dá)的抑制率分別為(25.48±8.90) % (bFGF誘導(dǎo)) and (38.28±12.66) % (PMA 誘導(dǎo));對明膠酶B mRNA的抑制率分別為 (32.68±12.31) % (bFGF誘導(dǎo)) 和 (27.36±19.24)% (PMA 誘導(dǎo));對明膠酶 A及明膠酶B活性的抑制率為(77.50±5.96)% (PMA 誘導(dǎo))、 (61.57±4.64)% (PMA 誘導(dǎo))。 6. 光化學(xué)療法可抑制血管生成素-2 mRNA及蛋白的表達(dá)。在 5.0 J/cm2劑量 組,對血管生成素-2 mRNA表達(dá)的抑制率為(30.28±10.36) % (PMA 誘 導(dǎo));對血管生成素-2蛋白表達(dá)的抑制率分別為(60.14±6.45)% (PMA 誘 導(dǎo))、 (61.17±4.79)% (PMA 誘導(dǎo))。 結(jié)論 研究結(jié)果表明光化學(xué)療法可在體外抑制內(nèi)皮細(xì)胞的血管新生活性并誘 導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞的凋亡,同時(shí)它還可以下調(diào)bFGF及PMA誘導(dǎo)的促血管新生因子 的表達(dá)。光化學(xué)療法對內(nèi)皮細(xì)胞血管新生活性及促血管新生因子表達(dá)的下調(diào) 可能與其有效治療銀屑病密切相關(guān)。 第二部分 全反式維甲酸的體外抗血管新生作用研究 目的 探討全反式維甲酸(All-trans ratinoid,ATRA)對內(nèi)皮細(xì)胞血管新生活性及 明膠酶表達(dá)的影響,明確其抗血管新生作用機(jī)制。 方法 1. 利用塞唑蘭(MTT)法測定了 ATRA 對于內(nèi)皮細(xì)胞增殖的影響 2. 利用遷移實(shí)驗(yàn)和體外管腔形成實(shí)驗(yàn)觀測了 ATRA 對內(nèi)皮細(xì)胞遷移及管 腔形成能力的影響 3. 應(yīng)用流式細(xì)胞儀檢測了 ATRA 對內(nèi)皮細(xì)胞凋亡的影響 4. 應(yīng)用半定量 RT-PCR 技術(shù)及蛋白印跡雜交技術(shù)分別在 mRNA 及蛋白水 平上檢測了 ATRA 對明膠酶表達(dá)的影響,同時(shí)應(yīng)用明膠酶譜法觀測了 ATRA 對明膠酶表達(dá)及活性的影響。 結(jié)果 1. ATRA 明顯抑制了堿性成纖維細(xì)胞生長因子誘導(dǎo)的內(nèi)皮細(xì)胞增殖, 2 WP=7 博士研究生學(xué)位論文 中文摘要 10.0μmol/L ATRA 處理 72h 時(shí)達(dá)到高峰,抑制率為(69.9±4.4)%。 2. 0.1μmol/L、1.0μmol/L、10.0μmol/L 濃度的 ATRA 可明顯抑制佛波酯 (PMA)誘導(dǎo)的內(nèi)皮細(xì)胞遷移,抑制率分別為(44.68±7.79)%、 (65.20±4.59)%、(78.37±2.58)%。 3. 體外管腔形成試驗(yàn)的結(jié)果證實(shí)了 ATRA 對內(nèi)皮細(xì)胞管腔形成能力的抑 制作用,此作用隨藥物濃度的增加而增強(qiáng)。 4. 流式細(xì)胞儀分析發(fā)現(xiàn) ATRA 處理 20h 后,內(nèi)皮細(xì)胞的凋亡率明顯增加, 在 0.1、1.0、10.0μmol/L 的 ATRA 作用下,內(nèi)皮細(xì)胞凋亡率分別為 (6.33±0.73)%、(13.87±1.89)%及(37.15±2.39)%。 5. ATRA 可影響明膠酶 mRNA 的轉(zhuǎn)錄進(jìn)而下調(diào)其蛋白表達(dá)量及酶活性, 此作用隨濃度增高而增強(qiáng),10.0μmol/L 濃度的 ATRA 對明膠酶 A mRNA、蛋白表達(dá)量及酶活性的抑制率分別為(59.39±7.98)%、 (78.40±3.23)%及(53.02±7.23)%,對明膠酶 B mRNA、蛋白表達(dá)量及酶 活性的抑制率分別為(65.23±3.62)%、(82.49±2.88)%及(47.32±7.72)%。 結(jié)論 1. ATRA 可以直接作
【學(xué)位授予單位】：復(fù)旦大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2004
【分類號】：R758.63
【圖文】：

6:PUVA對內(nèi)皮細(xì)胞遷移能力的影響

7:PUVA對內(nèi)皮細(xì)胞管腔形成能力的影響

1.2.1 PUVA 對內(nèi)皮細(xì)胞整合素αⅤmRNA 表達(dá)的影響M Marker處理組： 1 （0 J/cm2） 2 （2.0 J/cm2） 3（5.0 J/cm2）處理組： 4 （0 J/cm2） 5 （2.0 J/cm2） 6（5.0 J/cm2）內(nèi)皮細(xì)胞整合素αＶ表達(dá)的影響整合素αＶ(PMA 誘導(dǎo)) 整合素αＶ(bFGRNA 的表達(dá)量β-actin 矯正）x±s抑制率（％）x±smRNA 的表達(dá)量（β-actin 矯正）x±s0.994±0.181# 0# 0.971±0.123*# .754±0.113*# 24.18±0.35*# 0.770±0.066*# .761±0.085*# 23.43±8.64*# 0.711±0.077*# F=4.229 F=8.68比較 P<0.05，各組間存在差異； * LSD 與對照組相比 P<0.05

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前4條

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本文編號：2788885