【摘要】：背景與目的:黑色素瘤是比較常見的皮膚軟組織惡性腫瘤,近年來發(fā)病率不斷升高。黑色素瘤惡性程度很高,轉(zhuǎn)移早,預(yù)后差。盡管黑色素瘤的免疫治療、靶向治療等均取得了一些進(jìn)展,但仍存在部分患者無效、腫瘤細(xì)胞耐藥、費(fèi)用高等問題,因此繼續(xù)探索其他的治療方案仍然十分必要。淋巴管轉(zhuǎn)移是黑色素瘤主要轉(zhuǎn)移方式,腫瘤周圍及瘤體內(nèi)淋巴管的形成是腫瘤經(jīng)淋巴管轉(zhuǎn)移的前提。因此,通過抑制腫瘤周圍及瘤體內(nèi)的淋巴管形成,減少腫瘤周圍和瘤體內(nèi)的淋巴管數(shù)量,理論上可以推遲、延緩腫瘤經(jīng)淋巴管轉(zhuǎn)移,從而延長患者的生存時(shí)間。雷帕霉素(又稱為西羅莫司)作為哺乳動(dòng)物雷帕霉素靶分子(Mammalian target of rapamycin,mTOR)抑制劑,最初被用作抗腎移植術(shù)后的免疫排斥反應(yīng)。由于mTOR信號(hào)通路的作用廣泛,關(guān)于雷帕霉素的其他作用也不斷地被發(fā)現(xiàn),其中就包括了抗脈管形成作用。體內(nèi)、體外實(shí)驗(yàn)證實(shí)能抑制正常淋巴管形成和某些腫瘤內(nèi)的淋巴管形成。因此,我們?cè)O(shè)想雷帕霉素也可能抑制黑色素瘤瘤體及其周圍的淋巴管形成,從而成為治療黑色素的有效藥物。本研究通過建立黑色素瘤的裸鼠移植瘤模型,并應(yīng)用模型進(jìn)行雷帕霉素干預(yù),觀察移植瘤周圍和瘤體中的淋巴管形成是否受到影響,并探討其影響機(jī)制。本研究的目的是為應(yīng)用雷帕霉素治療黑色素瘤提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法:(1)實(shí)驗(yàn)分組:體外培養(yǎng)擴(kuò)增A375人黑色素瘤細(xì)胞,將細(xì)胞注入裸鼠背部兩側(cè)皮下建立移植瘤模型,2周后形成瘤體。以腹腔注射生理鹽水(NS組)和雷帕霉素分別作為正常對(duì)照組和雷帕霉素干預(yù)組。干預(yù)2周后分別取出裸鼠背部兩側(cè)的移植瘤標(biāo)本。所有標(biāo)本分為兩部分,一部分用4%甲醛固定、石蠟包埋,用于后續(xù)的H-E染色、常規(guī)免疫組化和免疫熒光染色等;另一部分置于液氮中保存,用于后續(xù)的PCR和Western-blot等檢測。(2)常規(guī)免疫組化、免疫熒光染色觀察移植瘤瘤周及瘤體內(nèi)淋巴管及其數(shù)量的變化。(3)免疫組化染色觀察移植瘤中mTORCl/p70S6K/4EBP1的表達(dá),并行Western Blot檢測mTORCI/p70S6K/p-p70S6K/4EBP1/P-4EBP1及淋巴管形成相關(guān)因子和受體VEGF-C/VEGFR-3的表達(dá)。(4)實(shí)時(shí)定量PCR檢測移植瘤中淋巴管形成相關(guān)基因VEGF-C/VEGFR-3的表達(dá)。結(jié)果:(1)H-E染色見移植瘤為典型的黑色素瘤樣病理結(jié)構(gòu)。常規(guī)免疫組化和免疫熒光染色顯示移植瘤瘤周及瘤體內(nèi)均可見LYVE-1(+)淋巴管。(2)免疫組化染色顯示雷帕霉素組移植瘤瘤周及瘤體內(nèi)平均淋巴管密度顯著低于生理鹽水對(duì)照組。(3)免疫組化染色及Western Blot檢測提示雷帕霉素組移植瘤內(nèi)非磷酸化mTOR/p70S6K/4EBP1蛋白水平與生理鹽水對(duì)照組相比無明顯差異,p-p70S6K/p-4EBP1蛋白水平顯著低于生理鹽水對(duì)照組。(4)Western Blot檢測以及實(shí)時(shí)定量PCR檢測顯示雷帕霉素組移植瘤中VEGF-C/VEGFR-3蛋白及基因表達(dá)均明顯低于生理鹽水對(duì)照組。結(jié)論:雷帕霉素能抑制黑色素瘤的裸鼠移植瘤瘤周以及瘤體內(nèi)的淋巴管形成,降低移植瘤瘤周以及瘤體內(nèi)的淋巴管密度。其可能機(jī)制是阻斷mTOR信號(hào)通路,進(jìn)一步抑制VEGF-C/VEGFR-3的表達(dá),從而抑制淋巴管形成。本研究結(jié)果可作為應(yīng)用雷帕霉素治療黑色素瘤的初步實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
【學(xué)位授予單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R739.5
【圖文】：

接種４周后取出瘤體行病理學(xué)觀察，ＨＥ染色下見瘤體內(nèi)黑色素瘤細(xì)胞逡逑排列緊密，極性消失，胞漿寬窄不一，核大畸形、深染，異型性明顯，逡逑可見病理性核分裂象；瘤體周圍有完整纖維包膜。（見圖１－２）。逡逑Ａ邐＿邐Ｇｒｏｗｔｈ邋ｃｕｒｖｅ逡逑？邋

本文編號(hào)：2788395