【摘要】： 細胞的自穩(wěn)是通過對細胞內(nèi)成分合成和降解的精確調(diào)節(jié)而實現(xiàn)。細胞內(nèi)降解物質(zhì)的途徑有兩類,一類是蛋白酶體途徑,主要降解短壽命蛋白質(zhì),還有一類就是自噬途徑,主要降解長壽命蛋白質(zhì)及細胞器。自噬存在于所有的真核細胞中,它對于保持細胞內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定很重要。自噬可分為三類:巨自噬(macroautophagy)、微自噬(microautophagy)和分子伴侶介導的自噬(chaprone mediated autophagy)。巨自噬是胞漿內(nèi)成份進行循環(huán)的主要途徑,通常所說的自噬就是指巨自噬。大量證據(jù)證明,自噬功能會隨著年齡增長而衰退,這種衰退可能是由于年齡相關(guān)的細胞結(jié)構(gòu)改變及功能下降所致。研究發(fā)現(xiàn),自噬在生物體的老化過程中起著關(guān)鍵作用。而皮膚組織作為生物體有機整體的一部分,其老化也可能與自噬有關(guān),另外,皮膚的老化程度受紫外線(UV)照射所致光老化的影響。從信號轉(zhuǎn)導途徑分析,UV可能通過活化PI3K/AKT/mTOR途徑或者通過抑制紫外線抵抗相關(guān)基因(UVRAG)來下調(diào)自噬表達。本研究初步探討了UVB對人皮膚成纖維細胞自噬功能的影響,并通過人為誘導細胞自噬變化,觀察人皮膚成纖維細胞活性及分泌MMP(基質(zhì)金屬蛋白酶)-1和MMP-3水平的相應(yīng)變化,討論自噬在皮膚光老化進程中的作用,并探索引發(fā)光老化的一種新的機制。全文分為三個部分: 第一部分UVB光損傷對人皮膚成纖維細胞自噬功能的影響 通過MDC[單丹(磺)酰戊二胺]法檢測,發(fā)現(xiàn)UVB導致的急性光損傷在100m J/cm~2、200 m J/cm~2劑量組會引起人皮膚成纖維細胞自噬表達的上調(diào),與正常對照組存在顯著差異(p＜0.01),隨著照射劑量進一步加大至300 m J/cm~2、400m J/cm~2,細胞形態(tài)發(fā)生變形、皺縮,其自噬表達水平高于正常對照組(p＜0.05),但較100 m J/cm~2、200 m J/cm~2劑量組有一定程度的下降(p＜0.05)。同時觀察了200 m J/cm~2UVB照射后12、24、48h各不同時間點細胞自噬的表達,發(fā)現(xiàn)隨著時間推移,被激活的自噬功能逐漸發(fā)生下降,各組之間差異具有顯著性(p＜0.01)。結(jié)論:輕中度的光損傷可以上調(diào)自噬水平,而重度的光損傷則可嚴重影響細胞的形態(tài),并出現(xiàn)一定程度自噬水平的下調(diào);被急性光損傷激活的自噬功能隨著時間的推移會逐漸恢復(fù)正常水平。 第二部分UVB誘導人皮膚成纖維細胞光老化對自噬功能的影響研究 通過UVB重復(fù)照射制造光老化人皮膚成纖維細胞模型,顯微鏡下發(fā)現(xiàn),光老化細胞的形態(tài)發(fā)生明顯變化,細胞增殖停滯。用半乳糖苷酶測定法檢測發(fā)現(xiàn)光老化細胞與正常對照組相比藍染的老化細胞明顯增多,二組之間差異存在顯著性(p＜0.01)。同時,細胞的自噬水平也明顯下降,差異同樣具有顯著性(p＜0.01),其自噬的下降水平與其老化程度相一致。結(jié)論:光老化人皮膚成纖維細胞的自噬表達較正常細胞明顯下降,其下降程度與細胞老化程度相關(guān)。 第三部分細胞自噬功能的變化與光老化的關(guān)系研究 通過自噬誘導劑雷帕霉素和自噬抑制劑3-MA處理,檢測人皮膚成纖維細胞自噬體的表達后發(fā)現(xiàn),隨著雷帕霉素濃度的上升,自噬的表達呈現(xiàn)同步上調(diào);而3-MA濃度增加時,則自噬的表達呈相應(yīng)下降趨勢。用MTT法分別檢測細胞的活性后發(fā)現(xiàn),自噬表達輕度增高時能提高細胞的活性,與正常對照組相比有顯著差異(p＜0.01),而表達顯著增高時活性反而降低,當自噬表達較正常明顯降低時,細胞的活性則呈相應(yīng)的下降,與正常對照組相比有顯著差異(p＜0.01)。用ELISA方法檢測細胞MMP-1和MMP-3的水平后發(fā)現(xiàn),隨著自噬表達的下調(diào),細胞MMP-1和MMP-3的水平上升,與正常對照組存在差異(p＜0.05)。適度上調(diào)自噬表達后,MMP-1和MMP-3的水平與正常對照組差異不顯著(p＞0.05),自噬表達顯著升高時,MMP-1和MMP-3的水平則有明顯上升,與正常對照組相比有顯著差異(p＜0.01)。結(jié)論:抑制自噬的表達可以降低人皮膚成纖維細胞的活性,并加速細胞老化;適度上調(diào)自噬的表達可以提高人皮膚成纖維細胞的活性,對細胞老化的影響尚不明確;自噬表達顯著上調(diào)時,人皮膚成纖維細胞的活性降低,加速細胞老化。
【學位授予單位】：中國協(xié)和醫(yī)科大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2008
【分類號】：R751
【圖文】：

內(nèi)形成小的自噬泡，然后逐漸擴大，其邊緣逐漸融合，形成完整的雙層膜結(jié)構(gòu)的自噬體與細胞內(nèi)物質(zhì)隔開，接著自噬體與溶酶體發(fā)生融合，形成自噬溶酶體來吞入待降解物質(zhì)后與其內(nèi)層膜一起降解(圖1)。日嘆協(xié)以曰.L州瀚。，..0.\、、尸2.與幾、，氣登白一O向栩如娜扣娜介呻.日.dinl.峋，2堿勾卜峋 16L.L口.PE圖1自噬體的形成過程示意圖(摘自Elisabetta民rraro， RaneeseoCeeeoni.Autophagie andaPoPtoticresPonsetostresssignalsinmanllnalianeells.ArchivesofBioehe而stry andBioPhysies，2007，462，210一219)自噬正常情況下在細胞內(nèi)呈低水平表達

可明顯上調(diào)細胞自噬。另外，細胞自噬功能同時受到m型PI3K的調(diào)節(jié)，其可上調(diào)自噬功能l5]。PI3K的抑制劑，如3一A、握曼青霉素、LY294002等可明顯抑制自噬功能(圖2)。InSUlin/!GF圖2自噬細胞信號轉(zhuǎn)導途徑示意圖(摘自wullse址egers，LoewithR， HauMN.ToR signalingingrowthandmetabolism.Cell.200610:124(3):471名4)自噬可以更新細胞內(nèi)結(jié)構(gòu)，使細胞年輕化，因此其在老化過程的作用越來越受到重視。研究己經(jīng)發(fā)現(xiàn)，對所有物種，間斷禁食均可以提高壽命，飲食控制使壽命延長的過程中，自噬的活化至關(guān)重要。實驗證明，在控制小鼠攝入量后，小鼠體細胞自噬體顯著活躍而出現(xiàn)明顯的抗衰老效應(yīng)，但讓其任意進食則會通過升高氨基酸和胰島素血漿濃度，抑制自噬，從而加速其衰老進程l6]。對蠕蟲的研究

通過上述消化法獲得的人皮膚成纖維細胞貼壁后形態(tài)呈長梭形，顯微鏡下折光性良好。細胞生長較為旺盛，約3至5天傳一代，傳至巧代之前未見明顯的活力下降(如圖3)。

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3 歐颯;或許真有“長壽藥”,但真能帶來快樂？[N];新華每日電訊;2009年

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9 實習生 李娜　本報記者 袁志勇;新發(fā)現(xiàn)可以阻斷腫瘤通路嗎[N];科技日報;2010年

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4 陳希楊;高產(chǎn)雷帕霉素吸水鏈霉菌的遺傳改造和發(fā)酵過程優(yōu)化[D];浙江大學;2011年

5 陳先國;mTORC1和mTORC2調(diào)控雷帕霉素介導的前列腺癌DU145細胞AKT和ERK磷酸化[D];華中科技大學;2010年

6 邸若岷;雷帕霉素改善小鼠心肌梗死后心室重構(gòu)的分子機制研究[D];南京醫(yī)科大學;2010年

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9 趙莉;TNF-α與過氧化氫通過mTOR非依賴途徑激活p85 S6K1[D];南方醫(yī)科大學;2010年

10 王嵐;哺乳動物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）信號通路對脂多糖所致急性肺損傷的影響[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學;2010年

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3 許端敏;大鼠球囊損傷后主動脈壁MMP3的變化及雷帕霉素的干預(yù)作用[D];汕頭大學;2003年

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6 李全林;索拉非尼對雷帕霉素誘導的肝細胞癌PI3K/AKT及MAPK信號通路異�；罨霓卓棺饔肹D];復(fù)旦大學;2010年

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本文編號：2784352