發(fā)布時間：2020-08-06 10:43

【摘要】：背景本研究以肢端角化性類彈性纖維病(Acrokeratoelastoidosis,AKE)的家系為研究對象。先證者主要表現(xiàn)為雙手多發(fā)的、堅實的、角化性丘疹,主要位于掌指關(guān)節(jié)、近端指間關(guān)節(jié)骨性隆突處。多個丘疹融合呈“鋪路石”樣外觀,其中皮疹以掌背交界處最為顯著。其家系中的其他成員也有類似的病史。目的1)通過對該家系進行遺傳學(xué)研究,探索AKE可能的致病基因。2)探索AKE相關(guān)的致病機制,為該疾病的診斷與治療奠定基礎(chǔ)。方法1)對一個常染色體顯性遺傳AKE家系中的四個成員(Ⅱ-2,Ⅲ-7,Ⅳ-3,Ⅳ-4)進行全外顯子測序(WES)分析。2)應(yīng)用Primer Premier 5.0軟件對候選基因所在的突變位點設(shè)計引物,運用PCR擴增及Sanger測序方法將候選基因在該家系19名成員和60例與該家系無血緣關(guān)系的健康對照個體中進行驗證,分析該基因在該家系內(nèi)是否與疾病存在共分離現(xiàn)象。3)在另一例AKE家系對可疑致病基因進行篩選驗證。4)構(gòu)建以慢病毒載體的sh RNA,在293T細胞中進行病毒包裝,最后轉(zhuǎn)染至人皮膚成纖維細胞中形成穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的細胞株p LKO.1 sh-CCDC91。通過細胞免疫熒光(ICC)及透射電子顯微鏡(TEM)方法,對CCDC91基因的亞細胞定位和可能的機制進行研究。結(jié)果1)通過WES技術(shù),經(jīng)過濾過篩選出8個可能的候選基因,分別為OVCH2:p.G257D,CELSR3:p.A157P,TRAIP:p.R157H,CD180:p.N207S,OTP:p.A71V,ERAP2:p.T407,RIOK2:p.D140N和CCDC91:c.993+1GA。2)Sanger測序結(jié)果顯示,該AKE家系的致病基因為CCDC91,且該基因在該家系中所有的患病個體中存在,未患病個體中不存在。3)在另一例AKE家系中對CCDC91基因進行Sanger測序,結(jié)果發(fā)現(xiàn)CCDC91基因的錯義突變(c.941AG,p.K314R)。4)ICC結(jié)果顯示CCDC91基因的亞細胞定位在高爾基體上。TEM結(jié)果顯示相比于p LKO.1 Sh-Control組,p LKO.1 sh-CCDC91B2組細胞的高爾基體腫脹、碎裂,溶酶體及自噬體數(shù)量增多,且細胞質(zhì)內(nèi)可見異常囊泡的蓄積。結(jié)論1)CCDC91基因是AKE的致病基因。2)CCDC91基因的亞細胞定位于高爾基體,CCDC91蛋白的結(jié)構(gòu)改變可能影響囊泡之間的運輸,使得彈力蛋白的合成與分泌減少,從而導(dǎo)致AKE的發(fā)生。
【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R758.4
【圖文】：

10圖 1 箭頭指的是先證者， 是正常男性， 是男性患者； 是正常女性， 是女性患者，帶斜線表示該成員已過世，“＋”代表進行全外顯子測序的成員。A、B 分別為 AKE-1 和 AKE-2 的

圖 2 AKE-1 家系的臨床與組織病理學(xué)表現(xiàn)。（A）雙手對稱性角化性丘疹主要位于掌指關(guān)節(jié)及近端指指關(guān)節(jié)突起處。（B）手掌處多個光滑的、膚色丘疹，部分融合呈“鋪路石”樣外觀，且皮疹分布以背屈側(cè)交界處最為顯著。（C-D）浸泡 5 分鐘后,手背和手掌皮損發(fā)白，腫脹呈“海綿樣”外觀。（E）組織病理學(xué)表現(xiàn)。表皮增生，明顯的正角化過度，顆粒層和棘層增生，真皮

圖 3 PCR 產(chǎn)物的測序圖（A）（B）分別是 AKE-1 和 AKE-2 家系 CCDC91 基因測序圖。方框代表突變堿基所在位置。Fig. 3 Sequencing pictures of PCR products.Aand B were sequencing pictures of CCDC91 gene inAKE-1 andAKE-2 families, respectively. The box represents the location of the mutant base.

【相似文獻】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 龍庭鳳;張林;何黎;;肢端角化性類彈性纖維病1例[J];臨床皮膚科雜志;2007年08期

2 姚露;王紅兵;鄭博文;何黎;;結(jié)節(jié)性類彈性纖維病[J];臨床皮膚科雜志;2010年06期

3 王小勇;方紅;喬建軍;朱偉芳;;結(jié)節(jié)性類彈性纖維病1例[J];實用皮膚病學(xué)雜志;2010年04期

4 閆潔;葉慶佾;郝飛;楊希川;;播散型匐行性穿通性彈性纖維病1例[J];臨床皮膚科雜志;2006年03期

5 尚進;何威;李鴻國;楊玲;程琦;于堯;劉康康;楊冠楠;張昭;;結(jié)節(jié)性類彈性纖維病一例[J];中國美容醫(yī)學(xué);2015年16期

6 王春又;楊希川;郝飛;翟志芳;;肢端角化性類彈性纖維病一例[J];實用皮膚病學(xué)雜志;2015年05期

7 翁立強;陳俊;張春萍;龍琴琴;鄭禮寶;;肢端角化性類彈性纖維病1例[J];臨床皮膚科雜志;2017年01期

8 吳愛萍;張安方;馬玲;;結(jié)節(jié)性類彈性纖維病伴囊腫及黑頭粉刺[J];臨床皮膚科雜志;2013年03期

9 朱鐵山,馬東來,王寶璽,方凱;肢端角化性類彈性纖維病[J];臨床皮膚科雜志;2002年09期

10 劉鑫;羅雯;阿霄;譚小智;鄧丹琪;;肢端角化性類彈性纖維病1例[J];皮膚病與性病;2017年05期

相關(guān)會議論文 前2條

1 袁星海;王豫平;李振魯;;匍行性穿通性彈性纖維病1例[A];中華醫(yī)學(xué)會第十八次全國皮膚性病學(xué)術(shù)年會論文匯編[C];2012年

2 劉娟;付萍;;肢端角化性類彈性纖維病1例[A];第六次全國中西醫(yī)結(jié)合變態(tài)反應(yīng)學(xué)術(shù)大會論文匯編[C];2013年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前1條

1 諸允露;肢端角化性類彈性纖維病致病基因及其相關(guān)致病機制的研究[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2019年

本文編號：2782268