【摘要】：背景本研究以肢端角化性類彈性纖維病(Acrokeratoelastoidosis,AKE)的家系為研究對象。先證者主要表現(xiàn)為雙手多發(fā)的、堅實(shí)的、角化性丘疹,主要位于掌指關(guān)節(jié)、近端指間關(guān)節(jié)骨性隆突處。多個丘疹融合呈“鋪路石”樣外觀,其中皮疹以掌背交界處最為顯著。其家系中的其他成員也有類似的病史。目的1)通過對該家系進(jìn)行遺傳學(xué)研究,探索AKE可能的致病基因。2)探索AKE相關(guān)的致病機(jī)制,為該疾病的診斷與治療奠定基礎(chǔ)。方法1)對一個常染色體顯性遺傳AKE家系中的四個成員(Ⅱ-2,Ⅲ-7,Ⅳ-3,Ⅳ-4)進(jìn)行全外顯子測序(WES)分析。2)應(yīng)用Primer Premier 5.0軟件對候選基因所在的突變位點(diǎn)設(shè)計引物,運(yùn)用PCR擴(kuò)增及Sanger測序方法將候選基因在該家系19名成員和60例與該家系無血緣關(guān)系的健康對照個體中進(jìn)行驗(yàn)證,分析該基因在該家系內(nèi)是否與疾病存在共分離現(xiàn)象。3)在另一例AKE家系對可疑致病基因進(jìn)行篩選驗(yàn)證。4)構(gòu)建以慢病毒載體的sh RNA,在293T細(xì)胞中進(jìn)行病毒包裝,最后轉(zhuǎn)染至人皮膚成纖維細(xì)胞中形成穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的細(xì)胞株p LKO.1 sh-CCDC91。通過細(xì)胞免疫熒光(ICC)及透射電子顯微鏡(TEM)方法,對CCDC91基因的亞細(xì)胞定位和可能的機(jī)制進(jìn)行研究。結(jié)果1)通過WES技術(shù),經(jīng)過濾過篩選出8個可能的候選基因,分別為OVCH2:p.G257D,CELSR3:p.A157P,TRAIP:p.R157H,CD180:p.N207S,OTP:p.A71V,ERAP2:p.T407,RIOK2:p.D140N和CCDC91:c.993+1GA。2)Sanger測序結(jié)果顯示,該AKE家系的致病基因?yàn)镃CDC91,且該基因在該家系中所有的患病個體中存在,未患病個體中不存在。3)在另一例AKE家系中對CCDC91基因進(jìn)行Sanger測序,結(jié)果發(fā)現(xiàn)CCDC91基因的錯義突變(c.941AG,p.K314R)。4)ICC結(jié)果顯示CCDC91基因的亞細(xì)胞定位在高爾基體上。TEM結(jié)果顯示相比于p LKO.1 Sh-Control組,p LKO.1 sh-CCDC91B2組細(xì)胞的高爾基體腫脹、碎裂,溶酶體及自噬體數(shù)量增多,且細(xì)胞質(zhì)內(nèi)可見異常囊泡的蓄積。結(jié)論1)CCDC91基因是AKE的致病基因。2)CCDC91基因的亞細(xì)胞定位于高爾基體,CCDC91蛋白的結(jié)構(gòu)改變可能影響囊泡之間的運(yùn)輸,使得彈力蛋白的合成與分泌減少,從而導(dǎo)致AKE的發(fā)生。
【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R758.4
【圖文】：

10圖 1 箭頭指的是先證者， 是正常男性， 是男性患者； 是正常女性， 是女性患者，帶斜線表示該成員已過世，“＋”代表進(jìn)行全外顯子測序的成員。A、B 分別為 AKE-1 和 AKE-2 的

圖 2 AKE-1 家系的臨床與組織病理學(xué)表現(xiàn)。（A）雙手對稱性角化性丘疹主要位于掌指關(guān)節(jié)及近端指指關(guān)節(jié)突起處。（B）手掌處多個光滑的、膚色丘疹，部分融合呈“鋪路石”樣外觀，且皮疹分布以背屈側(cè)交界處最為顯著。（C-D）浸泡 5 分鐘后,手背和手掌皮損發(fā)白，腫脹呈“海綿樣”外觀。（E）組織病理學(xué)表現(xiàn)。表皮增生，明顯的正角化過度，顆粒層和棘層增生，真皮

圖 3 PCR 產(chǎn)物的測序圖（A）（B）分別是 AKE-1 和 AKE-2 家系 CCDC91 基因測序圖。方框代表突變堿基所在位置。Fig. 3 Sequencing pictures of PCR products.Aand B were sequencing pictures of CCDC91 gene inAKE-1 andAKE-2 families, respectively. The box represents the location of the mutant base.

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本文編號：2782268