【摘要】：在組織器官(如牙齒、腸、羽毛等)的發(fā)育和再生過程中,上皮細(xì)胞和間質(zhì)細(xì)胞的相互作用具有極為重要的意義。研究表明,位于毛囊底部的特殊間質(zhì)成分——毛乳頭在毛囊的形態(tài)學(xué)發(fā)生和毛囊的周期性生長(zhǎng)調(diào)控中起主導(dǎo)作用。毛乳頭細(xì)胞作為毛囊的主要間質(zhì)成分,在毛囊研究中具有相當(dāng)重要的地位。 在胚胎發(fā)育過程中,毛乳頭細(xì)胞來源于位于表皮基板下方的一群凝集性生長(zhǎng)的真皮間質(zhì)細(xì)胞。在鼠觸須、鼠體被毛、羊和人皮膚等分離培養(yǎng)毛乳頭細(xì)胞,培養(yǎng)的毛乳頭細(xì)胞在形態(tài)上類似于真皮成纖維細(xì)胞,但一般均表現(xiàn)為凝集性生長(zhǎng)方式,在培養(yǎng)皿中形成相互重疊的細(xì)胞團(tuán),而周圍則形成空隙;真皮成纖維細(xì)胞則表現(xiàn)為平鋪式的融合性生長(zhǎng)。在培養(yǎng)情況下,毛乳頭細(xì)胞的凝集性生長(zhǎng)特性將隨著細(xì)胞傳代次數(shù)的增多而逐步喪失,一般情況下,第6代以后細(xì)胞不再表現(xiàn)凝集性生長(zhǎng)。 凝集性生長(zhǎng)是毛乳頭細(xì)胞的重要生物學(xué)特性之一,凝集性生長(zhǎng)與毛乳頭細(xì)胞的功能和分化狀態(tài)有關(guān)。但是毛乳頭細(xì)胞凝集性生長(zhǎng)的分子機(jī)制不明,同時(shí)凝集性生長(zhǎng)狀態(tài)下毛乳頭細(xì)胞所分泌的蛋白在毛囊發(fā)育和毛囊周期性生長(zhǎng)調(diào)控中的作用也少有研究。 毛乳頭是一個(gè)可誘導(dǎo)毛囊生長(zhǎng)的結(jié)構(gòu),它能發(fā)送或接受信號(hào),從而影響毛囊的發(fā)育和周期性生長(zhǎng)。最近研究發(fā)現(xiàn)了許多在毛囊形態(tài)學(xué)發(fā)生和周期性生長(zhǎng)中起作用的信號(hào)分子,如成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(fibroblast growth factors, FGFs)、骨形成蛋白(bone morphogenetic proteins, BMPs)、神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子、血小板衍生生長(zhǎng)因子(platelet derived growth factor , PDGF)等。這些信號(hào)分子大多來源于毛囊上皮細(xì)胞,它們構(gòu)成了一個(gè)復(fù)雜的網(wǎng)絡(luò),尚不能確定其中具有關(guān)鍵作用的因子。研究這些因子可能難以從根本上闡明毛囊發(fā)育和周期性生長(zhǎng)的具體機(jī)制,但是我們對(duì)于毛乳頭細(xì)胞自身分泌的生長(zhǎng)相關(guān)蛋白在其凝集性生長(zhǎng)和毛囊周期性生長(zhǎng)調(diào)控中的作用知之甚少,因此有人提出,毛乳頭細(xì)胞自身分泌的生長(zhǎng)相關(guān)蛋白將是今后毛囊研究的重要內(nèi)容。 鑒于以上認(rèn)識(shí),我們認(rèn)為研究毛乳頭細(xì)胞凝集性生長(zhǎng)狀態(tài)下所分泌的特異性蛋白有助于闡明毛乳頭細(xì)胞凝集性生長(zhǎng)、毛囊發(fā)育及周期性生長(zhǎng)調(diào)控的分子機(jī)制。因此,通過 國(guó)家自然科學(xué)基金資助課題(編號(hào)30200249) 及重慶市科委重點(diǎn)攻關(guān)課題(編號(hào)2001-8-4) WP=13 收集凝集性生長(zhǎng)人毛乳頭細(xì)胞培養(yǎng)液上清制備成條件培養(yǎng)基,分別作用于傳代培養(yǎng)后失去凝集性生長(zhǎng)特性的毛乳頭細(xì)胞和臨床斑禿患者,用來闡明毛乳頭細(xì)胞生長(zhǎng)相關(guān)蛋白對(duì)活力較弱毛乳頭細(xì)胞的影響和對(duì)毛囊生長(zhǎng)周期的調(diào)節(jié)作用,以期為臨床治療禿發(fā)性疾病探索一種新的治療途徑。 在本研究中,我們首先從人頭皮毛囊分離培養(yǎng)人毛乳頭細(xì)胞,這些細(xì)胞具有周期性凝集性生長(zhǎng)特性,而且這種特性隨著傳代次數(shù)的增多而逐步喪失。凝集性生長(zhǎng)作為毛乳頭細(xì)胞的固有特性與其生物學(xué)功能密切相關(guān)。我們收集凝集性生長(zhǎng)人毛乳頭細(xì)胞培養(yǎng)液上清制備成條件培養(yǎng)基,培養(yǎng)9代毛乳頭細(xì)胞,發(fā)現(xiàn)其能將非凝集性生長(zhǎng)的毛乳頭細(xì)胞轉(zhuǎn)化為凝集性生長(zhǎng)狀態(tài);我們又將條件培養(yǎng)基培養(yǎng)的9代毛乳頭細(xì)胞與基礎(chǔ)養(yǎng)基培養(yǎng)的9代毛乳頭細(xì)胞分別作細(xì)胞計(jì)數(shù),發(fā)現(xiàn)條件培養(yǎng)基有明顯促進(jìn)高傳代毛乳頭細(xì)胞增殖的能力;我們?cè)賹?代毛乳頭細(xì)胞與9代毛乳頭細(xì)胞共培養(yǎng),發(fā)現(xiàn)9代毛乳頭細(xì)胞有向低傳代毛乳頭細(xì)胞轉(zhuǎn)化的趨勢(shì),而2代毛乳頭細(xì)胞未出現(xiàn)向高傳代轉(zhuǎn)化的趨勢(shì)。這些結(jié)果表明凝集性生長(zhǎng)毛乳頭細(xì)胞所分泌的生長(zhǎng)相關(guān)蛋白與毛乳頭細(xì)胞的凝集性生長(zhǎng)等生物學(xué)特性有關(guān)。 我們應(yīng)用3H-TdR摻入技術(shù),發(fā)現(xiàn)基礎(chǔ)培養(yǎng)基培養(yǎng)的毛乳頭細(xì)胞,其3H-TdR摻入值隨著細(xì)胞傳代增高而降低,而對(duì)應(yīng)的條件培養(yǎng)基培養(yǎng)的高傳代毛乳頭細(xì)胞其3H-TdR摻入值是相對(duì)較高的,這表明條件培養(yǎng)基可促進(jìn)活力較弱的高傳代毛乳頭細(xì)胞的增殖;我們應(yīng)用RT-PCR技術(shù),觀察分泌性蛋白血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子mRNA的表達(dá)狀況,發(fā)現(xiàn)基礎(chǔ)培養(yǎng)基培養(yǎng)的毛乳頭細(xì)胞,其血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子mRNA的表達(dá)隨著細(xì)胞傳代增多而降低,而對(duì)應(yīng)的條件培養(yǎng)基培養(yǎng)的高代毛乳頭細(xì)胞其血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子的表達(dá)是相對(duì)較高的,這表明條件培養(yǎng)基可促進(jìn)活力較弱的毛乳頭細(xì)胞的分泌性蛋白的基因表達(dá);我們?cè)僭陔婄R下觀察條件培養(yǎng)基培養(yǎng)的高代毛乳頭細(xì)胞,發(fā)現(xiàn)其細(xì)胞核靠邊,細(xì)胞內(nèi)核糖體較多,內(nèi)質(zhì)網(wǎng)分泌成池,呈圓形和橢圓形,而用基礎(chǔ)培養(yǎng)基培養(yǎng)的高傳代毛乳頭細(xì)胞,其電鏡下可見其細(xì)胞核居中,細(xì)胞內(nèi)核糖體較少,內(nèi)質(zhì)網(wǎng)分泌成星形或條索狀,這表明條件培養(yǎng)基可促進(jìn)活力較弱的高傳代毛乳頭細(xì)胞的分泌。這些結(jié)果表明凝集性生長(zhǎng)毛乳頭細(xì)胞所分泌的生長(zhǎng)相關(guān)蛋白可促進(jìn)活力較弱高傳代毛乳頭細(xì)胞的增殖和分泌性蛋白的表達(dá)和分泌。 我們收集凝集性生長(zhǎng)人毛乳頭細(xì)胞培養(yǎng)液上清制備成毛乳頭細(xì)胞條件培養(yǎng)液凍干粉,經(jīng)熱源試驗(yàn)、急性毒性試驗(yàn)、細(xì)菌培養(yǎng)、真菌培養(yǎng)等檢查無異常,經(jīng)查排除人免疫缺陷病毒、乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、梅毒螺旋體感染,經(jīng)本院倫理委員會(huì)討論同意臨床使用,并征得患者同意且簽署知情同意書的情況下應(yīng)用于斑禿患者。我們發(fā) WP=14 現(xiàn)在50例毛乳頭細(xì)胞條件培養(yǎng)液治療的斑禿患者中,除2例無效外其余均有一定療效,這與去炎松治療組比較取得了良好的療效。毛乳頭細(xì)胞條件培養(yǎng)液組、去炎松組和空白組治愈率分別為74%、50%、10%,有效率分別
【學(xué)位授予單位】：第三軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2004
【分類號(hào)】：R751
【圖文】：

二、毛乳頭細(xì)胞的培養(yǎng)：將獲得的毛乳頭接種于培養(yǎng)瓶中做懸浮培養(yǎng)。一般接種后 8hrs 即開始貼壁（圖1-1），24hrs 后貼壁率可達(dá) 95％。第二天貼壁后便有細(xì)胞從毛乳頭邊緣長(zhǎng)出。在開始的 3~4 天，細(xì)胞生長(zhǎng)較快，向四周呈放射狀生長(zhǎng)（圖 1-2），此時(shí)毛乳頭逐漸失去其原來的形狀，形成成片的細(xì)胞生長(zhǎng)致密區(qū)。含胎牛血清的培養(yǎng)基培養(yǎng)的毛乳頭細(xì)胞在散開 10 天后又開始逐漸融合，而用含新生牛血清的培養(yǎng)基培養(yǎng)的毛乳頭細(xì)胞在散開 14天后才開始逐漸融合，融合后細(xì)胞大致仍由呈放射狀排列的多個(gè)細(xì)胞團(tuán)組成，中央?yún)^(qū)細(xì)胞出現(xiàn)多層化并向上堆積(凝集性生長(zhǎng))。凝集性生長(zhǎng)初期的毛乳頭細(xì)胞多呈多角形或長(zhǎng)三角形，尤其是凝集團(tuán)中央?yún)^(qū)的細(xì)胞，周邊區(qū)細(xì)胞則多呈梭形，形態(tài)類似成纖維細(xì)胞，但前者胞體較大。經(jīng)胰酶消化并傳代的毛乳頭細(xì)胞，可在 2hrs 內(nèi)貼壁并鋪開生長(zhǎng)。細(xì)胞排列方式開始時(shí)欠規(guī)則，隨著細(xì)胞數(shù)目增多，毛乳頭細(xì)胞逐漸重新傾向凝集生長(zhǎng)。隨著時(shí)間的增加，凝集生長(zhǎng)現(xiàn)象逐漸明顯，如果不給予傳代干預(yù)，則向上堆積成細(xì)胞球。用含胎牛血清的培養(yǎng)基培養(yǎng)的毛乳頭細(xì)胞 5 天后開始逐漸融合

3天后毛乳頭細(xì)胞向四周呈放射狀生長(zhǎng)(xaoa

代毛乳頭細(xì)胞融合前可見凝集性生長(zhǎng)現(xiàn)象〔X40)

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 周廣舉;鄧麗利;;毛囊各細(xì)胞體外生長(zhǎng)條件的探索研究[J];醫(yī)學(xué)信息(上旬刊);2011年05期

2 匡彬;楊蕓;;通心絡(luò)膠囊對(duì)擇期冠脈支架置入術(shù)患者的心肌保護(hù)作用[J];現(xiàn)代醫(yī)院;2011年05期

3 ;[J];;年期

4 ;[J];;年期

5 ;[J];;年期

6 ;[J];;年期

7 ;[J];;年期

8 ;[J];;年期

9 ;[J];;年期

10 ;[J];;年期

相關(guān)會(huì)議論文 前10條

1 羅洋;郝飛;杜華;鞠英;王潔;;人毛乳頭細(xì)胞條件培養(yǎng)液治療女性雄激素源性脫發(fā)的臨床觀察[A];2011全國(guó)中西醫(yī)結(jié)合皮膚性病學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2011年

2 呂中法;李偉;;血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體2在人毛乳頭細(xì)胞中的表達(dá)及功能研究[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第16次全國(guó)皮膚性病學(xué)術(shù)年會(huì)摘要集[C];2010年

3 李偉;呂中法;滿孝勇;李春明;鄭敏;;血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體2在人毛乳頭細(xì)胞中的表達(dá)及功能研究[A];2009年浙江省皮膚病學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2009年

4 李中明;范衛(wèi)新;;采用體外培養(yǎng)毛乳頭細(xì)胞誘導(dǎo)毛囊再生的動(dòng)物模型概況[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第十五次全國(guó)皮膚性病學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2009年

5 李梅云;范衛(wèi)新;;HIF-1α在人毛囊及體外培養(yǎng)的人毛乳頭細(xì)胞中的表達(dá)[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第14次全國(guó)皮膚性病學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2008年

6 鄭敏;呂中法;吳賢杰;;培養(yǎng)毛乳頭細(xì)胞生物學(xué)特性和毛囊重建的研究[A];2006年浙江省整形外科與醫(yī)學(xué)美容學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2006年

7 王洪濤;陳璧;陶克;湯朝武;胡大海;;人胎兒毛乳頭細(xì)胞在聚羥基乙酸真皮支架上的生長(zhǎng)特性觀察[A];第六屆全國(guó)燒傷救治專題研討會(huì)論文匯編[C];2009年

8 祁少海;劉坡;謝舉臨;徐盈斌;盛蹼義;舒斌;利天增;;胎兒毛乳頭細(xì)胞分化為類成骨細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)研究[A];第八屆全國(guó)燒傷外科學(xué)年會(huì)論文匯編[C];2007年

9 劉毅;郝飛;楊希川;楊斌;;RNA干擾抑制TCF4表達(dá)對(duì)毛乳頭細(xì)胞生物學(xué)功能的影響[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第14次全國(guó)皮膚性病學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2008年

10 丁國(guó)斌;陳璧;韓軍濤;王洪濤;曹云新;;組織工程皮膚中人毛乳頭細(xì)胞體外培養(yǎng)條件的優(yōu)化[A];全國(guó)燒傷創(chuàng)面處理、感染專題研討會(huì)論文匯編[C];2004年

相關(guān)重要報(bào)紙文章 前7條

1 呂乃群;禿頂——男人的煩惱[N];衛(wèi)生與生活報(bào);2006年

2 周璇;克隆法治脫發(fā),有點(diǎn)像種高產(chǎn)田[N];新華每日電訊;2008年

3 馮琳;我國(guó)毛囊生長(zhǎng)調(diào)控研究步入國(guó)際先進(jìn)水平[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2001年

4 萬睿;毛發(fā)缺失可選移植[N];健康報(bào);2007年

5 英子;告別“頂上”煩惱[N];中國(guó)商報(bào);2003年

6 陳瑜　陳龍;未老先“禿”為哪般[N];中國(guó)中醫(yī)藥報(bào);2009年

7 本報(bào)記者 陳瑜　實(shí)習(xí)生 陳龍;他們?yōu)楹挝蠢舷取岸d”？[N];科技日?qǐng)?bào);2009年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 羅洋;人毛乳頭細(xì)胞生長(zhǎng)相關(guān)蛋白生物學(xué)活性的初步研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2004年

2 楊衛(wèi)兵;HSPC011和HSPC016基因在毛乳頭細(xì)胞的表達(dá)及其生物學(xué)功能的研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2003年

3 程波;毛囊細(xì)胞間相互作用的研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2001年

4 鄒鋒;HSPC016蛋白在人毛乳頭細(xì)胞中的表達(dá)及其意義[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2008年

5 楊亞東;Versican基因?qū)γ轭^細(xì)胞凝集性生長(zhǎng)的作用研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2008年

6 楊斌;MRPS17蛋白在人毛囊毛乳頭細(xì)胞中的表達(dá)及其意義[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2006年

7 楊希川;毛囊生長(zhǎng)期毛乳頭細(xì)胞差異表達(dá)基因文庫的構(gòu)建及篩選[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2004年

8 劉曉亮;毛囊細(xì)胞構(gòu)建毛囊化組織工程皮膚的研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2005年

9 周乃慧;血管生成素在人毛囊中的表達(dá)及其促毛發(fā)生長(zhǎng)的作用研究[D];南京醫(yī)科大學(xué);2008年

10 王繼文;毛乳頭細(xì)胞HSPC016基因的全長(zhǎng)cDNA克隆及功能分析[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2004年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 李玲;毛乳頭細(xì)胞及其部分相關(guān)生長(zhǎng)因子的研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2010年

2 李玉平;P16蛋白在人毛乳頭細(xì)胞中的表達(dá)及對(duì)其生長(zhǎng)特性的影響[D];河北醫(yī)科大學(xué);2012年

3 韓志敏;人毛乳頭細(xì)胞中P16基因的檢測(cè)及意義[D];河北醫(yī)科大學(xué);2012年

4 程毅;IGF-1、FGF7與毛乳頭細(xì)胞生物學(xué)特性的相關(guān)性及復(fù)方甘草酸苷、地塞米松對(duì)毛乳頭細(xì)胞活性影響的研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2010年

5 焦虎;用人毛乳頭細(xì)胞和角質(zhì)形成細(xì)胞構(gòu)建帶附屬器的組織工程皮膚替代物的實(shí)驗(yàn)研究[D];中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2010年

6 張教揚(yáng);體外重建毛乳頭的方法探索及其生物學(xué)特性的初步實(shí)驗(yàn)研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2007年

7 孫麗華;人毛乳頭細(xì)胞CCDC72基因的表達(dá)及啟動(dòng)子活性分析[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2009年

8 韋蔚;毛乳頭細(xì)胞和隆突部細(xì)胞相互作用誘導(dǎo)形成毛囊的實(shí)驗(yàn)研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2010年

9 倪冬冬;影響毛乳頭細(xì)胞凝集性生長(zhǎng)因素的初步研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2009年

10 蔡湘娜;人工毛乳頭體內(nèi)外誘導(dǎo)組織工程化毛囊結(jié)構(gòu)形成的研究[D];汕頭大學(xué);2005年

本文編號(hào)：2769231