【摘要】：在組織器官(如牙齒、腸、羽毛等)的發(fā)育和再生過程中,上皮細胞和間質(zhì)細胞的相互作用具有極為重要的意義。研究表明,位于毛囊底部的特殊間質(zhì)成分——毛乳頭在毛囊的形態(tài)學(xué)發(fā)生和毛囊的周期性生長調(diào)控中起主導(dǎo)作用。毛乳頭細胞作為毛囊的主要間質(zhì)成分,在毛囊研究中具有相當(dāng)重要的地位。 在胚胎發(fā)育過程中,毛乳頭細胞來源于位于表皮基板下方的一群凝集性生長的真皮間質(zhì)細胞。在鼠觸須、鼠體被毛、羊和人皮膚等分離培養(yǎng)毛乳頭細胞,培養(yǎng)的毛乳頭細胞在形態(tài)上類似于真皮成纖維細胞,但一般均表現(xiàn)為凝集性生長方式,在培養(yǎng)皿中形成相互重疊的細胞團,而周圍則形成空隙;真皮成纖維細胞則表現(xiàn)為平鋪式的融合性生長。在培養(yǎng)情況下,毛乳頭細胞的凝集性生長特性將隨著細胞傳代次數(shù)的增多而逐步喪失,一般情況下,第6代以后細胞不再表現(xiàn)凝集性生長。 凝集性生長是毛乳頭細胞的重要生物學(xué)特性之一,凝集性生長與毛乳頭細胞的功能和分化狀態(tài)有關(guān)。但是毛乳頭細胞凝集性生長的分子機制不明,同時凝集性生長狀態(tài)下毛乳頭細胞所分泌的蛋白在毛囊發(fā)育和毛囊周期性生長調(diào)控中的作用也少有研究。 毛乳頭是一個可誘導(dǎo)毛囊生長的結(jié)構(gòu),它能發(fā)送或接受信號,從而影響毛囊的發(fā)育和周期性生長。最近研究發(fā)現(xiàn)了許多在毛囊形態(tài)學(xué)發(fā)生和周期性生長中起作用的信號分子,如成纖維細胞生長因子(fibroblast growth factors, FGFs)、骨形成蛋白(bone morphogenetic proteins, BMPs)、神經(jīng)營養(yǎng)因子、血小板衍生生長因子(platelet derived growth factor , PDGF)等。這些信號分子大多來源于毛囊上皮細胞,它們構(gòu)成了一個復(fù)雜的網(wǎng)絡(luò),尚不能確定其中具有關(guān)鍵作用的因子。研究這些因子可能難以從根本上闡明毛囊發(fā)育和周期性生長的具體機制,但是我們對于毛乳頭細胞自身分泌的生長相關(guān)蛋白在其凝集性生長和毛囊周期性生長調(diào)控中的作用知之甚少,因此有人提出,毛乳頭細胞自身分泌的生長相關(guān)蛋白將是今后毛囊研究的重要內(nèi)容。 鑒于以上認識,我們認為研究毛乳頭細胞凝集性生長狀態(tài)下所分泌的特異性蛋白有助于闡明毛乳頭細胞凝集性生長、毛囊發(fā)育及周期性生長調(diào)控的分子機制。因此,通過 國家自然科學(xué)基金資助課題(編號30200249) 及重慶市科委重點攻關(guān)課題(編號2001-8-4) WP=13 收集凝集性生長人毛乳頭細胞培養(yǎng)液上清制備成條件培養(yǎng)基,分別作用于傳代培養(yǎng)后失去凝集性生長特性的毛乳頭細胞和臨床斑禿患者,用來闡明毛乳頭細胞生長相關(guān)蛋白對活力較弱毛乳頭細胞的影響和對毛囊生長周期的調(diào)節(jié)作用,以期為臨床治療禿發(fā)性疾病探索一種新的治療途徑。 在本研究中,我們首先從人頭皮毛囊分離培養(yǎng)人毛乳頭細胞,這些細胞具有周期性凝集性生長特性,而且這種特性隨著傳代次數(shù)的增多而逐步喪失。凝集性生長作為毛乳頭細胞的固有特性與其生物學(xué)功能密切相關(guān)。我們收集凝集性生長人毛乳頭細胞培養(yǎng)液上清制備成條件培養(yǎng)基,培養(yǎng)9代毛乳頭細胞,發(fā)現(xiàn)其能將非凝集性生長的毛乳頭細胞轉(zhuǎn)化為凝集性生長狀態(tài);我們又將條件培養(yǎng)基培養(yǎng)的9代毛乳頭細胞與基礎(chǔ)養(yǎng)基培養(yǎng)的9代毛乳頭細胞分別作細胞計數(shù),發(fā)現(xiàn)條件培養(yǎng)基有明顯促進高傳代毛乳頭細胞增殖的能力;我們再將2代毛乳頭細胞與9代毛乳頭細胞共培養(yǎng),發(fā)現(xiàn)9代毛乳頭細胞有向低傳代毛乳頭細胞轉(zhuǎn)化的趨勢,而2代毛乳頭細胞未出現(xiàn)向高傳代轉(zhuǎn)化的趨勢。這些結(jié)果表明凝集性生長毛乳頭細胞所分泌的生長相關(guān)蛋白與毛乳頭細胞的凝集性生長等生物學(xué)特性有關(guān)。 我們應(yīng)用3H-TdR摻入技術(shù),發(fā)現(xiàn)基礎(chǔ)培養(yǎng)基培養(yǎng)的毛乳頭細胞,其3H-TdR摻入值隨著細胞傳代增高而降低,而對應(yīng)的條件培養(yǎng)基培養(yǎng)的高傳代毛乳頭細胞其3H-TdR摻入值是相對較高的,這表明條件培養(yǎng)基可促進活力較弱的高傳代毛乳頭細胞的增殖;我們應(yīng)用RT-PCR技術(shù),觀察分泌性蛋白血管內(nèi)皮生長因子mRNA的表達狀況,發(fā)現(xiàn)基礎(chǔ)培養(yǎng)基培養(yǎng)的毛乳頭細胞,其血管內(nèi)皮生長因子mRNA的表達隨著細胞傳代增多而降低,而對應(yīng)的條件培養(yǎng)基培養(yǎng)的高代毛乳頭細胞其血管內(nèi)皮生長因子的表達是相對較高的,這表明條件培養(yǎng)基可促進活力較弱的毛乳頭細胞的分泌性蛋白的基因表達;我們再在電鏡下觀察條件培養(yǎng)基培養(yǎng)的高代毛乳頭細胞,發(fā)現(xiàn)其細胞核靠邊,細胞內(nèi)核糖體較多,內(nèi)質(zhì)網(wǎng)分泌成池,呈圓形和橢圓形,而用基礎(chǔ)培養(yǎng)基培養(yǎng)的高傳代毛乳頭細胞,其電鏡下可見其細胞核居中,細胞內(nèi)核糖體較少,內(nèi)質(zhì)網(wǎng)分泌成星形或條索狀,這表明條件培養(yǎng)基可促進活力較弱的高傳代毛乳頭細胞的分泌。這些結(jié)果表明凝集性生長毛乳頭細胞所分泌的生長相關(guān)蛋白可促進活力較弱高傳代毛乳頭細胞的增殖和分泌性蛋白的表達和分泌。 我們收集凝集性生長人毛乳頭細胞培養(yǎng)液上清制備成毛乳頭細胞條件培養(yǎng)液凍干粉,經(jīng)熱源試驗、急性毒性試驗、細菌培養(yǎng)、真菌培養(yǎng)等檢查無異常,經(jīng)查排除人免疫缺陷病毒、乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、梅毒螺旋體感染,經(jīng)本院倫理委員會討論同意臨床使用,并征得患者同意且簽署知情同意書的情況下應(yīng)用于斑禿患者。我們發(fā) WP=14 現(xiàn)在50例毛乳頭細胞條件培養(yǎng)液治療的斑禿患者中,除2例無效外其余均有一定療效,這與去炎松治療組比較取得了良好的療效。毛乳頭細胞條件培養(yǎng)液組、去炎松組和空白組治愈率分別為74%、50%、10%,有效率分別
【學(xué)位授予單位】：第三軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2004
【分類號】：R751
【圖文】：

二、毛乳頭細胞的培養(yǎng)：將獲得的毛乳頭接種于培養(yǎng)瓶中做懸浮培養(yǎng)。一般接種后 8hrs 即開始貼壁（圖1-1），24hrs 后貼壁率可達 95％。第二天貼壁后便有細胞從毛乳頭邊緣長出。在開始的 3~4 天，細胞生長較快，向四周呈放射狀生長（圖 1-2），此時毛乳頭逐漸失去其原來的形狀，形成成片的細胞生長致密區(qū)。含胎牛血清的培養(yǎng)基培養(yǎng)的毛乳頭細胞在散開 10 天后又開始逐漸融合，而用含新生牛血清的培養(yǎng)基培養(yǎng)的毛乳頭細胞在散開 14天后才開始逐漸融合，融合后細胞大致仍由呈放射狀排列的多個細胞團組成，中央?yún)^(qū)細胞出現(xiàn)多層化并向上堆積(凝集性生長)。凝集性生長初期的毛乳頭細胞多呈多角形或長三角形，尤其是凝集團中央?yún)^(qū)的細胞，周邊區(qū)細胞則多呈梭形，形態(tài)類似成纖維細胞，但前者胞體較大。經(jīng)胰酶消化并傳代的毛乳頭細胞，可在 2hrs 內(nèi)貼壁并鋪開生長。細胞排列方式開始時欠規(guī)則，隨著細胞數(shù)目增多，毛乳頭細胞逐漸重新傾向凝集生長。隨著時間的增加，凝集生長現(xiàn)象逐漸明顯，如果不給予傳代干預(yù)，則向上堆積成細胞球。用含胎牛血清的培養(yǎng)基培養(yǎng)的毛乳頭細胞 5 天后開始逐漸融合

3天后毛乳頭細胞向四周呈放射狀生長(xaoa

代毛乳頭細胞融合前可見凝集性生長現(xiàn)象〔X40)

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3 ;[J];;年期

4 ;[J];;年期

5 ;[J];;年期

6 ;[J];;年期

7 ;[J];;年期

8 ;[J];;年期

9 ;[J];;年期

10 ;[J];;年期

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2 呂中法;李偉;;血管內(nèi)皮生長因子受體2在人毛乳頭細胞中的表達及功能研究[A];中華醫(yī)學(xué)會第16次全國皮膚性病學(xué)術(shù)年會摘要集[C];2010年

3 李偉;呂中法;滿孝勇;李春明;鄭敏;;血管內(nèi)皮生長因子受體2在人毛乳頭細胞中的表達及功能研究[A];2009年浙江省皮膚病學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2009年

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5 李梅云;范衛(wèi)新;;HIF-1α在人毛囊及體外培養(yǎng)的人毛乳頭細胞中的表達[A];中華醫(yī)學(xué)會第14次全國皮膚性病學(xué)術(shù)年會論文匯編[C];2008年

6 鄭敏;呂中法;吳賢杰;;培養(yǎng)毛乳頭細胞生物學(xué)特性和毛囊重建的研究[A];2006年浙江省整形外科與醫(yī)學(xué)美容學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2006年

7 王洪濤;陳璧;陶克;湯朝武;胡大海;;人胎兒毛乳頭細胞在聚羥基乙酸真皮支架上的生長特性觀察[A];第六屆全國燒傷救治專題研討會論文匯編[C];2009年

8 祁少海;劉坡;謝舉臨;徐盈斌;盛蹼義;舒斌;利天增;;胎兒毛乳頭細胞分化為類成骨細胞的實驗研究[A];第八屆全國燒傷外科學(xué)年會論文匯編[C];2007年

9 劉毅;郝飛;楊希川;楊斌;;RNA干擾抑制TCF4表達對毛乳頭細胞生物學(xué)功能的影響[A];中華醫(yī)學(xué)會第14次全國皮膚性病學(xué)術(shù)年會論文匯編[C];2008年

10 丁國斌;陳璧;韓軍濤;王洪濤;曹云新;;組織工程皮膚中人毛乳頭細胞體外培養(yǎng)條件的優(yōu)化[A];全國燒傷創(chuàng)面處理、感染專題研討會論文匯編[C];2004年

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1 呂乃群;禿頂——男人的煩惱[N];衛(wèi)生與生活報;2006年

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3 馮琳;我國毛囊生長調(diào)控研究步入國際先進水平[N];中國醫(yī)藥報;2001年

4 萬睿;毛發(fā)缺失可選移植[N];健康報;2007年

5 英子;告別“頂上”煩惱[N];中國商報;2003年

6 陳瑜　陳龍;未老先“禿”為哪般[N];中國中醫(yī)藥報;2009年

7 本報記者 陳瑜　實習(xí)生 陳龍;他們?yōu)楹挝蠢舷取岸d”？[N];科技日報;2009年

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3 程波;毛囊細胞間相互作用的研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2001年

4 鄒鋒;HSPC016蛋白在人毛乳頭細胞中的表達及其意義[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2008年

5 楊亞東;Versican基因?qū)γ轭^細胞凝集性生長的作用研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2008年

6 楊斌;MRPS17蛋白在人毛囊毛乳頭細胞中的表達及其意義[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2006年

7 楊希川;毛囊生長期毛乳頭細胞差異表達基因文庫的構(gòu)建及篩選[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2004年

8 劉曉亮;毛囊細胞構(gòu)建毛囊化組織工程皮膚的研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2005年

9 周乃慧;血管生成素在人毛囊中的表達及其促毛發(fā)生長的作用研究[D];南京醫(yī)科大學(xué);2008年

10 王繼文;毛乳頭細胞HSPC016基因的全長cDNA克隆及功能分析[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2004年

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2 李玉平;P16蛋白在人毛乳頭細胞中的表達及對其生長特性的影響[D];河北醫(yī)科大學(xué);2012年

3 韓志敏;人毛乳頭細胞中P16基因的檢測及意義[D];河北醫(yī)科大學(xué);2012年

4 程毅;IGF-1、FGF7與毛乳頭細胞生物學(xué)特性的相關(guān)性及復(fù)方甘草酸苷、地塞米松對毛乳頭細胞活性影響的研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2010年

5 焦虎;用人毛乳頭細胞和角質(zhì)形成細胞構(gòu)建帶附屬器的組織工程皮膚替代物的實驗研究[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2010年

6 張教揚;體外重建毛乳頭的方法探索及其生物學(xué)特性的初步實驗研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2007年

7 孫麗華;人毛乳頭細胞CCDC72基因的表達及啟動子活性分析[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2009年

8 韋蔚;毛乳頭細胞和隆突部細胞相互作用誘導(dǎo)形成毛囊的實驗研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2010年

9 倪冬冬;影響毛乳頭細胞凝集性生長因素的初步研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2009年

10 蔡湘娜;人工毛乳頭體內(nèi)外誘導(dǎo)組織工程化毛囊結(jié)構(gòu)形成的研究[D];汕頭大學(xué);2005年

本文編號：2769231