【摘要】： 皮膚鱗狀細(xì)胞癌(Squamous cell carcinoma,SCC)的發(fā)病率有逐年增高趨勢(shì),但其病因及具體發(fā)病機(jī)制尚未完全闡明,近年的資料表明可能與下列因素有關(guān):1、紫外線輻射;2、人乳頭瘤病毒(HPV);3、化學(xué)致癌物質(zhì)的接觸;4、癌前期皮膚病及免疫抑制劑的應(yīng)用;5、其他皮膚病:慢性潰瘍、燒傷或外傷性瘢痕等;6、熱損傷。目前SCC的治療多為非特異性療法,并不針對(duì)腫瘤自身的發(fā)病特點(diǎn),所以不良反應(yīng)較常見(jiàn)。因此,開(kāi)發(fā)新型的、針對(duì)腫瘤特定發(fā)病機(jī)制的治療更具前景,也引起國(guó)內(nèi)外皮膚界學(xué)者的廣泛關(guān)注。 Hedgehog(Hh)信號(hào)通路是近年來(lái)倍受關(guān)注的一個(gè)調(diào)控胚胎發(fā)育的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑。研究表明,Hh信號(hào)通路在基底細(xì)胞癌(Basal cell carcinoma,BCC)等多種腫瘤的發(fā)病及治療中起著重要作用。Cyclopamine(環(huán)杷明)是Hh通路的特異性抑制劑,它可以特異性抑制該通路的活性,已成為一種潛在的抗腫瘤藥物。既往研究和我們的初步工作發(fā)現(xiàn)SCC的發(fā)生、發(fā)展與Hh通路的異常激活有關(guān)。為進(jìn)一步明確Hh信號(hào)通路在SCC發(fā)病和治療中的作用,本課題以五種人SCC細(xì)胞系為研究對(duì)象,體外觀察cyclopamine特異性抑制Hh信號(hào)通路對(duì)SCC細(xì)胞增殖、凋亡及其細(xì)胞周期的影響。 目的:探討cyclopamine特異性抑制Hedgehog信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路對(duì)人SCC細(xì)胞增殖及凋亡的影響。 方法:體外培養(yǎng)五種人SCC細(xì)胞株,經(jīng)cyclopamine處理后,分別采用MTT法測(cè)定cyclopamine對(duì)SCC細(xì)胞增殖的抑制作用,光鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)變化,采用流式細(xì)胞儀PI染色法檢測(cè)cyclopamine對(duì)SCC細(xì)胞周期分布的影響,并用流式細(xì)胞儀Annexin-V-FITC/PI雙重標(biāo)記法檢測(cè)細(xì)胞凋亡的變化。 結(jié)果: 1、Cyclopamine抑制Hh通路對(duì)SCC細(xì)胞的形態(tài)學(xué)影響 體外常規(guī)培養(yǎng)五種鱗癌細(xì)胞系A(chǔ)431、Sa3、HSQ-89、Tca、HSC-2,在倒置相差顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)變化及生長(zhǎng)情況。五種細(xì)胞均呈貼壁生長(zhǎng),鏡下觀察結(jié)果顯示:空白對(duì)照組和陰性對(duì)照組的細(xì)胞形態(tài)規(guī)則,輪廓清晰;與對(duì)照組細(xì)胞形態(tài)比較,cyclopamine組細(xì)胞生長(zhǎng)緩慢,立體感消失,細(xì)胞內(nèi)顆粒增多,胞質(zhì)皺縮,核固縮現(xiàn)象明顯,細(xì)胞變小變圓,輪廓變模糊。形態(tài)學(xué)結(jié)果表明cyclopamine作用后的各SCC細(xì)胞系生長(zhǎng)受到抑制,形態(tài)受損。 2、Cyclopamine對(duì)SCC細(xì)胞增殖的抑制作用 MTT比色法檢測(cè)不同濃度(依次為:0.5、1、2、5μmol/L)cyclopamine對(duì)鱗癌細(xì)胞生長(zhǎng)的劑量效應(yīng)影響,結(jié)果表明cyclopamine能劑量依賴性地抑制五種鱗癌細(xì)胞的生長(zhǎng),其中以5μM濃度時(shí)抑制作用最為明顯。選取5μM cyclopamine作用于培養(yǎng)的細(xì)胞5～8天,檢測(cè)其抑制鱗癌細(xì)胞生長(zhǎng)的時(shí)間效應(yīng)。結(jié)果表明cyclopamine對(duì)各SCC細(xì)胞系的增殖抑制也具有時(shí)間依賴性。 3、Cyclopamine對(duì)SCC細(xì)胞的凋亡誘導(dǎo)作用 選取5μM cyclopamine作用于SCC細(xì)胞48h,采用Annexin-V-FITC/PI雙重染色,流式細(xì)胞儀檢測(cè)凋亡率的變化。結(jié)果顯示,除HSQ-89細(xì)胞的凋亡率未檢測(cè)到明顯改變外,cyclopamine組的A431、Sa3、Tca、HSC-2四種細(xì)胞凋亡率(早期+晚期凋亡率)均較空白對(duì)照組明顯增加(P0.05)。結(jié)果表明cyclopamine能夠明顯誘導(dǎo)SCC細(xì)胞發(fā)生凋亡,對(duì)不同的SCC細(xì)胞系,其凋亡誘導(dǎo)作用不同。 4、Cyclopamine對(duì)SCC細(xì)胞的周期阻滯作用 5μM cyclopamine作用于SCC細(xì)胞48h,PI染色后流式細(xì)胞儀檢測(cè)cyclopamine對(duì)SCC細(xì)胞周期分布的影響。結(jié)果顯示:Tca細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)組G_2/M期細(xì)胞較空白對(duì)照組明顯增多,A431、Sa3、HSC-2三種細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)組G_0/G_1期細(xì)胞較空白對(duì)照組明顯增多,G1期前出現(xiàn)較對(duì)照組更為明顯的亞二倍體峰;HSQ-89的細(xì)胞實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組未檢測(cè)到明顯差別。結(jié)果表明:Cyclopamine抑制Hh通路能夠影響SCC細(xì)胞的正常周期活動(dòng),它可誘導(dǎo)Tca細(xì)胞發(fā)生G_2/M期阻滯,誘導(dǎo)A431、Sa3、HSC-2細(xì)胞發(fā)生G0/G1期阻滯。 結(jié)論:Hedgehog信號(hào)通路的特異性抑制劑cyclopamine能夠有效抑制SCC細(xì)胞的增殖,誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡,誘導(dǎo)細(xì)胞發(fā)生特定細(xì)胞周期的阻滯為其可能機(jī)制之一。該結(jié)果為進(jìn)一步深入研究SCC的發(fā)病機(jī)制及探索新的治療方法提供了一定的理論依據(jù)。
【學(xué)位授予單位】：第四軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2008
【分類號(hào)】：R739.5
【圖文】：

圖 1 Hedgehog 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑示意圖Hedgehog信號(hào)通路與凋亡亡(apoptosis)，又稱程序性細(xì)胞死亡。Kerr 等對(duì)凋亡細(xì)胞的超了如下描述：凋亡早期細(xì)胞核固縮、邊緣化、胞漿濃縮；晚

圖 2-1 Sa3 - 空白對(duì)照組 倒置顯微鏡下 圖 2-2 Sa3  cyclopamine 組 倒置顯微鏡下細(xì)胞形態(tài) ×200 細(xì)胞形態(tài) ×200

圖 2-1 Sa3 - 空白對(duì)照組 倒置顯微鏡下 圖 2-2 Sa3  cyclopamine 組 倒置顯微鏡下細(xì)胞形態(tài) ×200 細(xì)胞形態(tài) ×200

【共引文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2768091