【摘要】： 目的篩選在人皮膚黑素瘤中表達(dá)的已知hsa-microRNA,根據(jù)篩選結(jié)果,探討相應(yīng)的hsa-microRNA在該疾病中的功能,為闡明黑素瘤發(fā)病機(jī)制、尋求有效的治療途徑提供理論和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 方法采用SBC microRNA芯片技術(shù),將6例人皮膚黑素瘤組織總RNA分別與9例健康人色素痣總RNA的混合物對比,篩選其中已知的468條hsa-microRNA表達(dá)情況。根據(jù)生物信息學(xué)的有關(guān)方法處理芯片實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù),篩選出共同差異表達(dá)的候選hsa-microRNA。采用熒光實(shí)時定量PCR的方法,分別檢測這6例人皮膚黑素瘤組織中的各候選hsa-microRNA的表達(dá)情況。將芯片和qPCR兩種方法結(jié)論一致的候選hsa-microRNA確定為有意義的共同差異表達(dá)hsa-microRNA。檢測表達(dá)差異最明顯的hsa-microRNA在A375和M14細(xì)胞系中的表達(dá)情況。 采用microRNA-21 inhibitor脂質(zhì)體瞬時轉(zhuǎn)染黑素瘤細(xì)胞系,設(shè)立對照組,并設(shè)立microRNA-21 inhibitor 90nmol/L、180 nmol/L、270 nmol/L三個濃度,分別用CCK-8試劑盒檢測細(xì)胞活性變化,并分析該濃度與細(xì)胞活性之間的關(guān)系。將活性變化最明顯的一組細(xì)胞系用FCM術(shù)檢測細(xì)胞周期與細(xì)胞凋亡的改變,同時用RT-PCR法檢測其中的BRAF和p27基因mRNA表達(dá)水平。 結(jié)果 1、此6例人皮膚黑素瘤中miRNA-21明顯上調(diào)表達(dá),miRNA-320和miRNA-494明顯下調(diào)表達(dá)。 2、黑素瘤細(xì)胞系A(chǔ)375和M14中均有miRNA-21不同程度的表達(dá)。 3、將miRNA-21 inhibitor轉(zhuǎn)染A375和M14細(xì)胞,當(dāng)抑制劑濃度為90nmol/L時,細(xì)胞活性受到明顯抑制;提高抑制劑濃度,A375細(xì)胞活性受到進(jìn)一步抑制,且二者之間存在相關(guān)性。 4、經(jīng)轉(zhuǎn)染miRNA-21 inhibitor且細(xì)胞活性發(fā)生明顯抑制的A375細(xì)胞,其G1期細(xì)胞比率明顯增高,而S期細(xì)胞比率明顯降低,細(xì)胞凋亡比率增高。 5、經(jīng)轉(zhuǎn)染miRNA-21 inhibitor且細(xì)胞活性發(fā)生明顯抑制的A375細(xì)胞中的BRAF基因和p27基因mRNA表達(dá)水平?jīng)]有明顯變化。 結(jié)論運(yùn)用miRNA芯片技術(shù),首次發(fā)現(xiàn)人皮膚黑素瘤組織中miRNA-21明顯上調(diào)表達(dá),miRNA-320和miRNA-494明顯下調(diào)表達(dá)。miRNA-21在黑素瘤細(xì)胞中抑制細(xì)胞凋亡、促進(jìn)細(xì)胞增殖,可能起原癌基因樣的作用。miRNA-21對BRAF和p27基因的mRNA表達(dá)水平無明顯影響。
【學(xué)位授予單位】：中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2008
【分類號】：R739.5
【圖文】：

圖1mieroRNA的生物合成與作用機(jī)制示意圖截至2007年2月，在http:/lmicrorna.sanger.ac.ukSangermiRNA數(shù)據(jù)庫注冊miRNA多達(dá)468條，httP:/漁里叫魚匹魚巡邊組公布相應(yīng)的miRNA預(yù)測的靶mRNA，為人們開展miRNA的表達(dá)譜以及相應(yīng)功能研究奠定了基礎(chǔ)。有關(guān)NA在人類生長發(fā)育、腫瘤、病毒感染性疾病等方面的研究工作正在熱火朝

芯片點(diǎn)陣示意圖

標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)化后數(shù)據(jù)基因表表 差差異基因信息表 表 圖1一2數(shù)據(jù)分析流程圖

【參考文獻(xiàn)】

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1 高天文,孫東杰,李春英,何弘,李青,劉友生,刁慶春,黃高升,郝飛,鐘白玉,馬福成,柳鳳軒,閆小初,劉東梅,劉玉峰,劉榮卿;中國西部兩醫(yī)院1905例皮膚惡性腫瘤回顧分析[J];北京大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版);2004年05期

2 楊銀峰,李家林;細(xì)胞凋亡相關(guān)基因與人類腫瘤[J];生命的化學(xué);2004年03期

3 孟穎;湯華;強(qiáng)冉;劉民;李欣;;miRNA對腫瘤細(xì)胞活性影響的探討[J];臨床和實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志;2006年02期

4 孫東杰,高天文,李春英,劉榮卿,李青,劉友生,刁慶春,何弘,黃高升,郝飛,馬福成,柳鳳軒,鐘白玉,閆小初,劉東梅,李廷慧,劉玉峰;西安、重慶兩所醫(yī)院20年皮膚惡性黑素瘤回顧[J];中華皮膚科雜志;2004年02期

5 韓永智;孫建方;周武慶;曾學(xué)思;姜yN群;;短發(fā)卡RNA對人黑素瘤細(xì)胞BRAF基因的沉默作用[J];中華皮膚科雜志;2006年11期

6 陳浩;韓永智;周武慶;曾學(xué)思;孫建方;;短發(fā)卡RNA抑制黑素瘤細(xì)胞BRAF~(V600E)突變基因的研究[J];中華皮膚科雜志;2007年06期

本文編號：2764176